HPLC

High Performance Liquid Chromatography

KELOMPOK 5
Kromatografi kolom terbuka
Sistem pemasukan sampel :
manual, tidak volumetrik
Color Injector
Waktu analisis lama,
mengandalkan gaya grafitasi dan
kapiler pompa
Hasil pemisahan kurang baik
pengemasan kolom
Kesulitan Pengamatan hasil
pemisahan untuk analit tidak
berwarna Detektor
KCKT dikembangkan dari kromatografi kolom
terbuka untuk menjawab kekurang-
kekurangan tersebut
Injector : Sistem pemasukan sampel: sample loop dan robotik
injektor, sangat volumetrik
Pompa : Waktu analisis singkat, pengulangan/presisi baik
Kolom : baja, packing kompak, partikel sangat kecil, tekanan
dapat dibuat besar Hasil pemisahan baik
Detektor : semua zat dapat diamati (tidak harus berwarna)
Integrator :dilengkapi komputer, bisa menghitung AuC
mudah penghitungan kadar

Sehingga disebut: Kinerja

Tinggi
DEFINISI
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi atau KCKT atau
yang disebut dengan HPLC didefinisikan ---- >
sebagai kromatografi cair yang dilakukan dengan
memakai fase diam yang terikat secara kimia
pada penyangga halus yang distribusi ukuranya
sempit ( kolom ) dan fase gerak yang dipaksa
mengalir dengan laju alir yang terkendali dengan
memakai tekanan tinggi sehingga menghasilkan
pemisahan dengan resolusi tinggi dan waktu
PRINSIP

Pemisahan suatu senyawa kimia dari suatu

campuran atau senyawa lainnya
berdasarkan perbedaan sifat fisiknya.

Memisahkan setiap komponen dalam

sampel untuk selanjutnya diidentifikasi
(kualitatif) dan dihitung berapa konsentrasi
dari masing masing komponen tersebut
(kuantitatif)
JENIS JENIS HPLC
1. Kromatografi Adsorbsi
2. Kromatografi fase terikat (Kromatografi
Partisi)
3. Kromatografi penukar ion
4. Kromatografi Pasangan ion
5. Kromatografi Eksklusi Ukuran
6. Kromatografi Afinitas
SISTEM PERALATAN

detektor

kolom
injektor
oven
pomp
a
Wadah
solven
 detektor

kolom
injektor
oven
pomp
a
Wadah
solven

WADAH FASE GERAK

Merupakan tandon berisi fase gerak

Mempunyai sistem penyaring
 detektor

kolom
injektor
oven
pomp
a
Wadah
POMPA
solven
Merupakan sistem agar fase gerak mengalir.
Kinerja pompa yang diinginkan :
Tekanan yang dihasilkan tinggi

Fluktuasi tekanan rendah

Kecepatan aliran fase gerak tepat
 detektor

kolom
injektor
oven
pomp
a
Wadah
solven
INJEKTOR
Alat untuk pemasukan sampel ke
dalam sistem KCKT
 detektor

kolom
injektor
oven
pomp
a
Wadah
solven

OVEN KOLOM instrumen pemanas

Syarat :
1. Keseragaman temperatur yang baik
2. Kestabilan temperatur yang baik
3. Ketepatan kontrol temperatur yang baik
Kolom pada KCKT
Penampang: baja tahan karat, tahan
tekanan tinggi
Ukuran partikel sangat kecil:
pengepakan lebih kompak, hasil
pemisahan lebih baik
Dapat dipakai berulang
 detektor

kolom
injektor
oven
pomp
a
Wadah
solven
Yang umum dipakai
Detektor Ultraviolet / Visible
(UV/VIS)
Detektor Photodiode Array (PDA)
Detektor Fluorescence (RF)
Detektor Konduktivitas (CDD)
Detektor Refraktive Indeks (RID)
Detektor Elektrokimia (ECD)
KEUNTUNGAN & KERUGIAN
Keuntungan
1. Mampu memisahkan molekul- molekul dari suatu campuran
2. Mudah melaksanakannya
3. Kecepatan analisis dan kepekaan yang tinggi
4. Dapat dihindari terjadinya dekomposisi/kerusakan bahan yang dianalisa
5. Dapat digunakan bermacam- macam detektor
6. Kolom dapat digunakan kembali
7. Mudah melakukan "sample recovery". Mudah untuk mendapatkan
kembali cuplikan, karena detector pada HPLC tidak merusak komponen
zat yang dianalisis.
8. Dapat menganalisis senyawa organik yang terurai (labil) pada suhu
tinggi karena HPLC dilakukan pada suhu kamar.
9. Dapat menganalisis cuplikan yang berasal dari senyawa-senyawa
anorganik.
10.Dapat menganalisis cuplikan yang memiliki berat molekul tinggi atau
titik didihnya sangat tinggi seperti polimer.
Kerugian
1. Larutan harus dicari fase diamnya terlebih dahulu
2. Hanya bisa digunakan untuk asam organic
3. Harus mengetahui kombinasi yang optimum antara pelarut,
analit, dan gradient elusi.
4. Harganya mahal sehingga penggunaannya dalam lingkup
penelitian yang terbatas.
Kromatografi cair kinerja tinggi merupakan suatu metode
PENERAPAN METODE HPLC DALAM FARMASI
pemisahan canggih dalam analisis farmasi yang dapat
digunakan sebagai uji identitas, uji kemurnian dan penetapan
kadar. Titik beratnya adalah untuk analisis senyawa-senyawa
yang tidak mudah menguap dan tidak stabil pada suhu tinggi,
yang tidak bisa dianalisis dengan metode KG. Banyak senyawa
yang dapat dianalisis dengan KCKT mulai dari senyawa ion
anorganik sampai senyawa organik makromolekul. Untuk
analisis dan pemisahan obat/bahan obat campuran rasemis
optis aktif dikembangkan suatu fase pemisahan kiral yang
mampu menetukan rasemis dan isomer aktif.
Berikut ini adalah beberapa contoh penggunaan KCKT untuk
analisis beberapa sediaan farmasi :

Obat (sediaan) Fase diam Fase gerak Detektor

Fluoresen
Asetonitril-asam fosfat 0,01
Adriamisin (serum) C18 EK : 465 nm
N ph 2,3 (50:50)
EM : 580 nm

Aktinomisin (Serbuk) C18 CH3CN-H2O (1:1) Elektrometer

KH2PO4 0,05M; 1,5

Allopurinol (tablet) C18; 4 x 30 cm UV 254 nm
ml/menit
TERIMA KASIH