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ENZIMAS

CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS


ENZIMAS COMO CATALIZADORES
COFACTORES
COENZIMAS
COFACTORES
CINETICA ENZIMATICA
CINETICA ENZIMATICA
COMPLEJO ENZIMA - SUSTRATO
ENZIMAS : CATALIZADORES
BIOLOGICOS
APLICACIONES INDUSTRIALES DE
LAS ENZIMAS
OTRAS APLICACIONES
Mtodos de Purificacin de las
Enzimas
Para fines cientficos es importante purificar un
preparado de enzimas para llegar lograr extraer las
enzimas indeseables.
Cada tipo de enzima y tejido requieren un tipo de
tratamiento distinto.
Algunos mtodos que se utilizan son la precipitacin
fraccionada, la dilisis y la precipitacin mediante el
calentamiento moderado, con algn acido o con
concentraciones de alcohol o acetona. (1L)
Mtodos de purificacin de las
Enzimas
Para la realizacin de la pureza de una enzima es
necesario realizar la tcnica de purificacin de una
protena algunas de estas son:
el anlisis por ultracentrfuga,
el electrofortico
y otros pero se debe tomar en cuenta que durante este
transcurso se llegan a perder gran parte de ella.
Mtodos de purificacin de las
Enzimas

Tambin este se puede realizar mediante el


sometimiento de la enzima a fraccionamientos
sensitivos como en el caso de la electroforesis en gel de
almidn o de acrilamida y as demostrar que la enzima
como tal est compuesta por varias protenas, y que
algunas presentan la misma actividad enzimtica pero a
causa de la sus estructuras y propiedades distintas se
les consideran isoenzimas.
Mtodos de purificacin de las
Enzimas

En general, la absorcin de una enzima es fcil debido


especficamente, por su sustrato, de manera que este
sea insoluble en la solucin de la enzima empleada.
Tal nocin no ha tenido una gran practica, tal vez a
causa de que la enzima se libera de una manera
constante en relacin de la descomposicin del
sustrato.
A pesar de todo, recientemente se ha realizado con
gran xito la absorcin de amilasa por almidn en una
Mtodos de purificacin de las
Enzimas

Uno de los procedimientos para la purificacin de


enzimas es la absorcin, estas al igual que otras
protenas son absorbidas muy fcilmente por sustancias
inorgnicas como los hidrxidos frrico y alumnico
coloidales.
La sustancia absorbida se lava ya sea con agua o con
una sal apropiada para poder llegar a eliminar ms
impurezas y por ltimo la enzima es separada de su
absorbente por elucin con lcali diluido o con alguno
que reacciones con la superficie del absorbente.
Purificacin de las enzimas

La purificacin de las enzimas se realiza a una baja


temperatura para as disminuir la perdidas por
desnaturalizacin en algunos casos esta puede ser
calentada durante unos minutos ms sin embargo este
no tendr ninguna prdida de su actividad enzimtica.
Existe tambin el proceso de electroforesis que
consiste en la aplicacin de un campo elctrico a la
solucin. (2)
Purificacin de las enzimas

La precipitacin de las enzimas es un proceso de


purificacin de las enzimas el cual requiere de muchos
procedimientos.
Como el cambio de pH el cual remueve las
nucleoprotenas y el material grueso, con este, es
posible continuar con los dems pasos. Con la
utilizacin de la temperatura en muchos casos ocurre la
desnaturalizacin el material proteico inactivo.
En diversos casos se utilizan solventes orgnicos como
Purificacin de las enzimas
La absorcin Fraccional es de gran utilidad por que
permite la absorcin de la enzima y luego desprenderla
del material de una forma ms pura.
Esta es agregada a un material activo en donde la
enzima es fijada, esta es lavada con soluciones de sales
las cuales son recogidas en fracciones de volumen en
donde alguna porcin la enzima sale de una forma ms
pura.
Purificacin de las enzimas

Se encuentra la Cristalizacin, este procedimiento debe


repetirse varias veces debido a que los primeros
cristales algunas veces suelen estar contaminados con
otras enzimas.
Esto demuestra que la obtencin de cristales no es
100% pura es solo la repeticin de este procedimiento
es el que garantiza que se da la pureza.
Purificacin de las enzimas

Para saber exactamente si en se da la pureza absoluta


existen otros procesos que pueden obtenerse por
medios fsicos como los son la electroforesis,
sedimentacin en ultracentrfuga, la cromatografa y la
determinaciones de solubilidad.
Purificacin de las enzimas

Aun sabiendo que las propiedades de las enzimas


pueden llegar a ser muy diferentes es necesario tener
preparaciones puras para poder hacer el estudio
completo de su actividad.
Hoy en da se ah llegado a cristalizar o purificar de una
manera correcta, cerca de unas 200 enzimas, y es
posible que en unos aos ms, esto llegue a aumentar
considerablemente.