ANTAGONISMUL

ANTAGONISMUL
MICROBIAN. ANTIBIOTICELE.
MICROBIAN.
BACTERIOCINELE.

ANTIBIOTICELE.
BACTERIOCINELE.
COMUNITILE MICROBIENE. RELAIILE
DINTRE MICROORGANISME N COMUNITI

BIOTOP spaiu cu condiii de via

particulare (conjunctiva, mucoasa
intestinal, orofaringe, vagin,
tegument, etc), populat i
transformat de asociaii de fiine
vii.
MICROBIOCENOZ (comunitate
microbian) asociaii microbiene
ce populeaz un biotop.
 Microorganismele prezente ntr-un biotop
particular constituie microflora acestui habitat
(m/f cutanat, intestinal, etc)
Aceasta joac un rol important n protejarea
gazdei fa de o invazie microbian ulterioar,
actionnd prin urmtoarele mecanisme:
competiia pentru aceiai nutrieni;
competiia pentru aceiai receptori de pe
celulele gazdei;
producia de bacteriocine; vitamine;
producerea de acizi grai volatili sau ali
metabolii;
stimularea continu a sistemului imun;
stimularea producerii unor factori imuni de
protecie (anticorpii naturali).
 ntre microorganismele unui biotop se pot
stabili relaii:
I. Indiferente (neutralism)
II. Favorabile (comensalism/satelitism,
simbioz/mutualism, sinergism)
III. Defavorabile (parazitism, antagonism)

Antagonismul bacterian se caracterizeaz prin

lupta pentru oxigen, substane nutritive, spaiu
pentru trai.
Cauzele antagonismului:
1. Vitalitatea mai mare
2. Modificarea mediului
3. Eliberarea unor substane cu aciune specific
 Mi/o care manifest activitate inhibitoare
antagonist (A), mi/o care sufer concurent
(C).
Antagonism direct
Antagonism indirect

Dup direcia antagonist:

Antagonism unilateral
Antagonism bilateral
Izoantagonism
 Efectul aciunii unui antagonist asupra
concurentului poate fi bacteriostatic sau
bactericid (uneori bacteriolitic).

Utilizarea practic a antagonismului microbian:

1. Pentru depistarea mi/o produceni de
antibiotice (micete, actinomicete, bacterii)
2. Pentru obinerea produselor biologice
curative de origine microbian (probiotice,
eubiotice/sinbiotice): Lactobacterina,
Colibacterina, Bifidumbacterina, Bificol, etc
3. Crearea biocenozelor favorabile
organismului
METODELE DE STUDIU AL ANTAGONISMULUI
1. n mediu solid (metoda traneei)
antagonistul se nsmneaz n centrul
cutiei, concurenii perpendicular. Termostat
24h. Aprecierea dup dimensiunea zonei de
inhibiie a creterii culturii concurentului.
2. n mediu semisolid I strat antagonistul, II
strat concurentul. Termostat 24h.
Aprecierea zon clar ntre straturi.
3. nsmnarea n mediu lichid (BP) a unui
numr egal de A i C. Dup 24 h de incubaie
se rensmneaz 0,1 ml pe placa cu geloz.
Se compar numrul coloniilor de A i C.
 Fleming, Chain i Florey
premiul Nobel pentru Medicin,
1945
ANTIBIOTICE (AB) produse de origine natural
(microbian, animal sau vegetal), derivai
semi-sintetici sau produse sintetice care inhib
sau omoar selectiv unele mi/o sau/i celule
tumorale, fr a exercita ca regul efecte
toxice asupra macroorganismului.

Clasificarea AB
I. Dup efectul asupra celulei
Bacteriostatic (tetraciclina,
cloramfenicol)
Bactericid (streptomicina, polimixina)
Bacteriolitic (peniciline, cefalosporine)
II. Dup spectrul de activitate
- AB cu spectru restrns (ngust) de aciune
(AB anti-G+, anti-G-, anti-tuberculoase,
anti-micotice, anti-tumorale, etc)
AB cu spectru larg de aciune (G+ i G-)

III. Dup producent (origine)

1. De origine fungic (peniciline,
cefalosporine)
2. Din actinomicete (aminoglicozide,
macrolide, cloramfenicol, etc)
3. De origine microbian (bacitracina din
Bacillus subtilis, gramicidina din Bacillus
brevis, polimixina din Bacillus polimyxa)
4. De origine vegetal fitoncidele (alicina,
rafanin, imanin)
5. De origine animal (lizozimul din albu de
ou, ecmolina din oase de pete, eritrina
din mas eritrocitar, splenocitina din
splin)
IV. Dup compoziia chimic (beta-lactamice,
macrolide, aminoglicozide, fenicoli,
polipeptide, poliene, sulfamide, chinolone i
fluorochinolone, nitrofurani, etc)
Mecanismul de aciune al AB

1. AB cu aciune asupra sintezei

peretelui celular (dereglarea
sintezei peptidoglicanului)
Beta-lactamice (peniciline, cefalosporine),
vancomicina, teicoplanina, bacitracina,
fosfomicina

Efectul acestor AB este bactericid/litic, doar

celulele metabolic active sunt omorte. Nu
afecteaz celulele eucariote (lipsa PG).
2. AB cu aciune asupra MCP
AB polipeptidice (polimixina, colistina).
AB polienice (nistatina, levorina,
amfotericina B, etc).
Aceste AB acioneaz i asupra celulelor n
repaos. Relativ toxice, n special nefro.
3. AB cu aciune asupra
ribozomilor
Streptomicina, kanamicina, gentamicina,
tobramicina, amikacina; tetracicline,
cloramfenicol, macrolide: eritromicina,
oleandomicina; lincosamide: clindamicina,
lincomicina).
4. AB cu aciune la nivelul aparatului genetic

Rifampicine
Novobiocina , Quinolonele (acidul nalidixic,
ciprofloxacina, ofloxacina).
Nitrofurani
Imidazoli

5. AB care inhib sinteza acidului

folic
Sulfamide
Trimetoprim
Producerea AB
1. Metoda biologic
2. Metoda sintetic
3. Metoda semi-sintetic
Etapele metodei biologice:
4. Cultivarea tulpinilor-producente (ex.:
Penicillium notatum, Actinomyces
griseum, etc) n mediu lichid adecvat
5. Extragerea AB
6. Purificarea i concentrarea AB
7. Controlul toxicitii
8. Determinarea activitii AB
 Activitatea AB se msoar n uniti de
mas (g, mg, g ) sau de aciune (UA)

1 UA cantitatea minim de AB care inhib

creterea unei tulpini de referin n condiii
standarde.
Ex. Penicilina 1 UA 0,6 g de substan

pur
Calitile ideale ale unui AB
proprieti antimicrobiene:
- toxic pentru microorganism, de preferat efect cid;
- spectru antimicrobian suficient de larg;
- s nu favorizeze dezvoltarea fenomenului de rezisten secundar;
proprieti farmacologice:
- lipsa de toxicitate fa de organismul gazd;
- persistena n organism un interval de timp suficient de lung;
- bun distribuie tisular, inclusiv n LCR;
- lipsa reaciilor de sensibilizare;
- lipsa interaciunii cu alte medicamente;
condiii de ordin economic
- pre de cost sczut.
Efectele negative ale
antibioticoterapiei
1. Efect toxic (streptomicina surditate,
cloramfenicolul toxic pentru mduva
osoas, polipeptidele nefrotoxice, etc)
2. Efect teratogen
3. Aciune sensibilizant (penicilina, etc)
4. Disbacterioz
5. Dereglarea imunogenezei
6. Selecia tulpinilor rezistente
7. Avitaminoze
8. Mascarea unei infecii
Rezistena bacteriilor la antibiotice
Rezisten natural
Rezisten dobndit

- rezisten natural
reprezint un caracter de specie;
contribuie la definirea spectrului iniial sau
natural de activitate antibacterian a unui
antibiotic;
Rezistena natural

Absena intei de aciune

Impermeabilitatea

bacteriei
Rezistena dobndit
atribut de tulpin;
permite definirea spectrului actual de activitate a unui antibiotic.

Rezistena la antibiotice este un fenomen

biologic natural, amplificat i accelerat prin:

- presiunea de selecie exercitat de utilizrea neraional

a antibioticelor;
- rspndirea uneori la mari distane a clonelor rezistente.
Rezistena dobndit
Adaptiv (nu se transmite genetic)
Definitiv
Primar (direct)
Secundar (indirect)
Monovalent
Polivalent
Monostadial
Pluristadial
Evoluia rezistenei la antibiotice a S.
aureus
Penicillin
Methicillin
S. aureus [1950s]Penicillin-resistant Methicillin-
resistant
S. aureus [1970s]
S. aureus (MRSA)
Vancomycin
[1997]
[1990s]

Vancomycin Vancomycin-resistant
- Vancomycin
resistant intermediate- enterococci (VRE)
S. aureus resistant
S. aureus
(VISA)
 Emergena rezistenei la antibiotice
Bacterie rezistent
BbbbBacterie rezistent Bacterie sensibil

Bacterie rezistent
Mutaie

Transferul genei de rezisten

Bacterie nou
rezistent
Selecia tulpinilor rezistente la antibiotice

Tulpini rezistente rare

Expunre la
aciunea
antibioticului

Tulpini rezistente dominante

Posibiliti de control a
rezistenei la antibiotice
1. Supravegherea epidemiologic a
tulpinilor rezistente
2. Politic strict de prescriere a AB
3. Ghidarea corect a AB
4. Asocierea AB cu mecanisme de
aciune diferite
5. Reciclarea AB
Relaia bacterie-antibiotic in vitro

concentraia minim inhibitorie (CMI) = cantitatea

minim de antibiotic care inhib cultivarea unei tulpini
bacteriene;

concentraia minim bactericid (CMB) = cantitatea

cea mai mic de antibiotic care omoar 99,9% dintre
bacteriile unei tulpini testate.
Relaia bacterie-antibiotic in vivo
bacterii sensibile = antibioticul, in doze uzuale, va
asigura vindecarea infeciei (CMI < nivelul mediu al
antibioticului n focarul de infecie);
bacterii rezistente = antibioticul, cel mai probabil, va
determina eec terapeutic (CMI > nivelul mediu al
antibioticului);
bacterii intermediare = efectul terapeutic poate fi
obinut numai n anumite condiii (CMI nivelul
mediu al antibioticului).
Definirea unei tulpini bacteriene ca S, I sau R prin teste in vitro

Valorile CMI, superioar i inferioar, n relaie cu

concentraiile realizate in vivo, care permit ncadrarea
unei tulpini n categoria S, R sau I se numesc
concentraii critice, respectiv C i c:
tulpini sensibile = CMI < c;
tulpini rezistente = CMI > C;
tulpini intermediare = C < CMI > c

Ex.16-20
Determinarea concentraiei minime inhibitorii
(CMI)
 Definirea unei tulpini bacteriene ca S, I sau R prin teste in vitro (continuare)

Antibiograma difuzimetric, cea mai frecvent metod de

testare a sensibilitii unei tulpini bacteriene n laboratorul
clinic, permite definirea unei tulpini bacteriene ca S, I sau R
prin raportarea diametrului zonei de inhibare a culturii la cele
dou diametre critice, D i d:
tulpini sensibile = zonei de inhibiie > D
tulpini rezistente = zonei de inhibiie < d
tulpini intermediare= d > zonei de inhibiie < D
Preparea inoculumului
Standardizarea suspensiei Agitare puternica
Prelevarea inoculumului
Insmnarea cu tamponul
 Incubarea peste noapte

Aplicarea discurilor
Msurarea zonei de
inhibiie
 Bacteriocinele substane proteice
bactericide produse de numeroase specii
bacteriene i active asupra altor tulpini ale
aceeai specii sau asupra speciilor nrudite.
Producerea bacteriocinelor este determinat
plasmidic (plasmide Col).

Tipuri de bacteriocine: colicine (secretate

de Escherichia coli), corinecine
(Corynebacterium), vibriocine (Vibrio), piocine
(Pseudomonas), etc.
Studiul sensibilitii unei tulpini la
bacteriocine (bacteriocinotipia) se utilizeaz n
scopuri epidemiologice