UNIVERSIDAD NACIONAL DE

TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS

AGROPECUARIAS ESCUELA
ACADEMICO PROFESIONAL DE
ZOOTECNIA

BIOTECNOLOGAS REPRODUCTIVAS
EN CAMLIDOS SUDAMERICANOS

DOCENTE: Dr. Gilmar Mendoza Ordoez

ALUMNOS: Rodrguez Valencia Vctor
Zavala Urtecho Irving
BIOTECNOLOGAS
 Biotecnologas
Reproductivas:
Sincronizacin e induccin de la ovulacin
Inseminacin artificial y congelacin de semen
Produccin de embriones por superovulacin
Produccin in vitro de embriones
Congelacin de ovocitos y embriones
Micro manipulacin de embriones para
producir gemelos idnticos
Determinacin y seleccin del sexo de
embriones y espermatozoides
Clonado de animales por medio de
transferencia nuclear
Sincronizacin e induccin de la ovulacin:

La necesidad de los sistemas de explotacin

intensivos de implementar la IA, han sido el motor
impulsor de las investigaciones desarrolladas en
cuanto al desarrollo de tcnicas de sincronizacin e
induccin del celo.
Entre los sistemas de sincronizacin del celo los ms conocidos son:

Empleo de las Prostaglandinas

Empleo de Progestgenos y Estradiol
Utilizacin de plasma seminal
A pesar de disponerse en la actualidad de un gran
nmero de esquemas de sincronizacin siguen
existiendo limitantes que no podemos gobernar,
tales como: la respuesta individual, el efecto raza,
estado reproductivo, nutricional y productivo.

Por otra parte hay regulaciones en diferentes pases

sobre el empleo de determinadas hormonas, lo que
puede limitar el uso de los diferentes tratamientos
descritos.
 INSEMINACIN ARTIFICIAL Y CONGELACIN DE SEMEN

Esta tcnica que no es ms que la introduccin del semen (material

fecundante del macho o semilla), por medio de instrumentos,
desarrollados en dependencia de las caractersticas del tracto
reproductivo de las hembras cada especie.
Monje italiano Lzaro Spallanzani (1780)
Los Rusos Elias Ivanov 1890
1942, Salisbury, de la escuela americana, idea un diluyente a base de citrato
de sodio y yema de huevo
El gran paso de la inseminacin artificial lo logran los norteamericanos Polge
y Smith (1952) con el descubrimiento de que el semen de toros, poda
conservarse congelado por largo tiempo
 CERTIFICADO DE EXAMEN ANDROLGICO
Datos de la Finca: Datos del Animal:
Finca: Identificacin:
Propietario: Especie:
Localidad: Raza:
Provincia: Edad:
Peso:
Fecha: Color:
Requisitos para la seleccin Resultados del Examen General y Especial:
Aplomos:
de un Reproductor: Visin:
Condicin Corporal: (en escala de 1 a 5).

Temperamento:
Salud General Escroto:
Testculos: Circunferencia escrotal:
Valor Gentico Adherencias:
Epiddmos:
Examen Reproductivo Prepucio:
Pene:
Capacidad de Servicio Vesculas Seminales:
Prstata:
Respuesta al Electroeyaculador:

Resultado del Espermiograma:

Cantidad del eyaculado:
Color:
Vigor de los Espermatozoides:
Motilidad por campo bajo microscopio: % V/M: %
Concentracin de Espermatozoides: x 106 espermios / ml

Anormalidades Espermticas: % Patologas:

Clulas de Descamacin:
Calificacin Final del Semen Segn Morfologa:

Observaciones y Recomendaciones:
Congelacin de Semen:
Diluentes crioprotectores:
Citrato yema
Glicerina leche
Biladyl
Triladyl
Andromed

Mtodos de congelacin:
mpulas
Pastillas
Pajuelas
 PRODUCCIN DE EMBRIONES POR SUPEROVULACIN

En sentido general la tcnica se basa en seleccionar

animales altamente valiosos genticamente, como
donadoras de embriones para la induccin hormonal
de ovulaciones mltiples, para obtener un nmero
considerable de embriones. Una vez realizada la
estimulacin, se procede a la fecundacin de los
vulos liberados. Luego de 7 das se realizar un
lavado del tero, para colectar los embriones y
clasificarlos morfolgicamente. Los embriones aptos
pueden ser transferidos a otros animales previamente
sincronizadas. Generalmente los resultados son entre
4 y 6 embriones por donante super ovulada y
resultados de preez de 50 y 70% para embriones
congelados o transferidos en fresco, respectivamente.
SUPEROVULACIN
 EXISTEN NUMEROSOS ESQUEMAS DE
SUPEROVULACIN ENTRE LOS CUALES PODEMOS
CITAR:

Inicio en fase media luteal o tratamiento convencional

Con estradiol y progesterona
Por puncin folicular
Aplicacin de GnRH o LH
No obstante a todo el desarrollo alcanzado en las investigaciones sobre super ovulacin, los resultados de la misma son
impredecibles y poco repetibles. De forma tal que la misma es afectada por mltiples factores dentro de los que podemos citar:
nutricin, edad, raza, categora,, manejo, tipo de hormona empleada, entre otros.

Estos factores son difciles de controlar por el tcnico, frente al inters gentico que pueda presentar el productor por reproducir un
animal en particular.
 PRODUCCIN DE EMBRIONES IN VITRO.

Para poder producir embriones in vitro, primero tenemos que

conseguir la maduracin de los ovocitos, la capacitacin del
semen que vamos a utilizar para fecundar y despus el
cultivo de los embriones obtenidos hasta estadios pre-
implantatorios.

Medios empleados

Medio de maduracin (TCM 199 + FSH)

TALP hepes o gradientes de Percol (medios
para procesamiento del semen)
Medio de fertilizacin (TCM 199 + heparina)
Medio de desarrollo (TCM 199 + IGF1 y otros aditivos o
OSF)
La metodologa para conseguir la fecundacin in vitro es
la siguiente:

- Obtencin de los ovocitos post mortem (ovarios de

animales sacrificados) o in vivo (aspiracin folicular guiada
por ecografa).
Maduracin de los ovocitos in vitro
Separacin de fraccin espermtica
motil (swim up o gradientes de
percol) y capacitacin in vitro de los
espermatozoides, bien procedentes
de semen fresco o de semen
congelado.
Inseminacin in vitro de los ovocitos madurados en el
laboratorio con el semen capacitado. El tiempo de
inseminacin vara dependiendo de la especie animal de que
se trate.
Cultivo in vitro, con una duracin variable y dependiendo
de dnde se realice la transferencia de embriones: en el
oviducto (hasta el estadio de mrula), y en cuerno uterino
(mrula o blastocisto).
En contraste con la FIV de ovocitos colectados post
mortem, la FIV de ovocitos colectados in vivo por
aspiracin folicular permite realizar colectas hasta tres
veces por semana (cuatro embriones por colecta 16
mensuales) y los costos de produccin son bajos y
estables (solo la inversin inicial es relativamente alta).

En general los resultados de maduracin, fecundacin y

cultivo in vitro de embriones, dejan mucho que desear,
porque no se superan unas cifras de nacimientos de
animales superiores al 40%
 CONGELACIN DE OVOCITOS Y EMBRIONES.

Constituye una herramienta til para la industria de la

transferencia de embriones, ya que el nmero de embriones
puede ser fcilmente correlacionado con el nmero de
receptoras disponibles en un momento apropiado del ciclo estral.
Tambin posibilita la transferencia de algunos embriones y la
conservacin del resto en bancos de germoplasma, hasta poder
analizar los registros de produccin de la descendencia. Por otra
parte permite el intercambio comercial a largas distancias con un
material libre de enfermedades contagiosas si estos son tratados
adecuadamente. La congelacin de ovocitos result ser, en sus
inicios, tcnicamente ms problemtica de lo esperado. En
cuanto a las perspectivas de futuro inmediato se refiere a validar
mtodos ultrarrpidos de crioconservacin para desarrollar
eficaces protocolos de crioconservacin.
En la actualidad ya se han logrado estabilizar protocolos que
emplean congeladores programables que ejecutan todo el
procedimiento de congelacin lenta y permiten obtener resultados
alrededor del 50% de preez despus de la descongelacin y
transferencia directa sin remocin del crioprotector., empleando
como crioprotector etilenglicol al 20% en PBS. Con un
procedimiento de descenso de la temperatura igual al empleado
con el glicerol:

Estabilizacin entre -6 a -70C / 3 min.

Seeding.
Estabilizacin post seeding entre -6 a -70C / 3 min.
Descenso de la t0C de -70C a -32 0C a una velocidad de 0.3 0C/min.
Estabilizacin a -320C / 3 min.
Introducir y depositar en N2. liq. -196 0C.
EQUIPO DE CONGELACIN PROGRAMAB
LA VITRIFICACIN: Es otro procedimiento de criopreservacin, en
el cual el embrin es sometido a una solucin crioprotectora
altamente concentrada, que provoca una deshidratacin drstica y
extrema. Esta solucin con el embrin pasa de un estado lquido a
otro casi slido, sin llegar a congelarse al ser introducida en N 2
lquido. La descongelacin se realiza de igual forma pero si es
imprescindible retirar el crioprotector del embrin, antes de su
transferencia, lo cual ha determinado el poco uso prctico de la
misma.
Es necesario acotar que los resultados de
gestacin logrados con embriones producidos in
vitro son menores que los obtenidos por
superovulacin (25 a 30%. vs 40 a 50%), por
tales razones se ensayan actualmente nuevos
protocolos que salven esta dificultad dado el
vertiginoso auge que est alcanzando la
produccin de embriones por FIV.
 DETERMINACIN Y SELECCIN DEL SEXO DE
EMBRIONES Y ESPERMATOZOIDES
Histricamente, los primeros intentos en diagnosticar el sexo de
embriones se realizaron a travs de anticuerpos que reconocen un
antgeno del embrin masculino (Antgeno H-Y), as como anlisis
citolgicos que detectaban el cuerpo cromtico. Sin embargo,
estas metodologas ofrecan resultados poco precisos, alta
mortalidad embrionaria y resultaban muy laboriosas.

Con las modernas tcnicas de biologa molecular y la identificacin

de secuencias de ADN especficas del cromosoma Y en varias
especies de animales, se han logrado grandes avances para el
diagnstico del sexo en embriones, logrando as, mantener la
viabilidad y un alto grado de precisin en embriones
preimplantatorios. Uno de los requisitos para el diagnstico, es
obtener una pequea biopsia del embrin, sin que este afecte su
desarrollo posterior.
Sexado
 SEXADO DE ESPERMATOZOIDES

Varios son los mtodos de separacin de espermatozoides y

podramos resumirlos en dos: aquellos que intentan separar
espermatozoides sobre la base de sus caractersticas fsicas o
cinticas y aquellos que actan sobre las diferencias nucleares de
los espermatozoides que transportan el cromosoma X o el Y. Para
separar espermatozoides es necesario conocer que el ncleo del
espermatozoide que transporta el cromosoma X es ms grande y
contiene por tanto una mayor cantidad de ADN que el que transporta
el cromosoma Y.

Para el proceso en cuestin (citometra), el semen tiene que ser

teido con un colorante fluorescente, el cual se unir a cada
espermatozoide individual segn su contenido de ADN. Se hacen
pasar luego a manera de una corriente o flujo muy delgado a travs
de la mquina separadora, la misma utiliza un rayo lser, que ilumina
el colorante. Como el espermatozoide "X" contiene 3.8 % ms de
ADN, ste atrapa ms colorante y hace que resplandezca ms
brillantemente.
Posteriormente una computadora clasifica los
espermatozoides en tres grupos:

1) los que llevan cromosoma "X",

2) los que portan "Y", y
3) una poblacin mixta de portadores de "x" e "y"
que no pudieron ser clasificados con absoluta
claridad.

Aqul flujo fino de espermatozoides se fracciona

entonces en gotitas conteniendo un
espermatozoide cada una, pasando por un
dispositivo que les asigna una carga elctrica + o
- , segn la clasificacin efectuada por la
computadora - . Se les hace pasar luego por un
campo magntico donde aqullas con carga +
son atradas hacia el lado - , y las que poseen
carga - lo son hacia el lado + . Una vez que han
sido separadas las fracciones, el semen puede
usarse en fresco (24 horas) o ser congelado.
La citometra, desarrollada por el Dr. Lawrence Johnson en
el ao de 1992, consigna un 90 % de seguridad en el
sexado del semen.

Pero an los resultados alcanzados en la IA, con semen

sexado son ms bajos que los que se logran semen
convencional (se disminuye la tasa de preez a la IA, entre
un 15 y 20%) y no se recomienda su uso para inseminacin
de donadoras para la transferencia de embriones, pero ha
sido empleado con xito en la FIV.
MICROMANIPULACIN DE EMBRIONES
PARA PRODUCIR GEMELOS IDNTICOS

Esta 1ra tcnica permite duplicar el nmero

de embriones disponibles y posibilita la
induccin de partos dobles de igual sexo, y
le brinda al productor una posibilidad de
incremento en la tasa de natalidad.
Existen diferentes formas en las cuales los embriones pueden ser
divididos satisfactoriamente y hay gran variacin en las tcnicas,
producto fundamentalmente de hbitos y experiencias individuales.

Estas tcnicas pueden ser divididas en tres grupos, en relacin con

el estadio de desarrollo con que se trabaje: Separacin de
blastmeros, divisin de mrulas antes de la compactacin y divisin
de mrulas compactas o blastocitos. Las principales diferencias
entre cada procedimiento se basan fundamentalmente en:
Instrumentos empleados y medios de cultivo (tanto para realizar la
manipulacin, como para la conservacin o cultivo).
 CLONACIN
Clonar significa crear un ser vivo idntico a otro, a partir de una
clula del individuo original. Hasta hace poco tiempo, los nicos
clones que se podan obtener en el laboratorio eran los de clulas
embrionarias. Todas las clulas o blastmeros que componen un
embrin son totipotentes, capaces de regenerar todo el embrin y
todas contienen la misma informacin gentica. Cuando llegan al
estadio de blastocisto, es cuando comienza la diferenciacin celular,
ya que las clulas del trofoblasto darn lugar a la formacin de la
placenta y las otras, las llamadas del ndulo embrionario o de la
masa celular interna, son las que originaran el ectodermo,
mesodermo, y el endodermo. stas son clulas diferenciadas y
darn lugar a la formacin del rgano o tejido para el cual estn
programadas. Para poder formar clones los requisitos mnimos son:
ncleo de una clula donante y ovocitos previamente enucleados.
Las principales tcnicas de clonacin son:

- Por separacin de blastmeros en los

embriones

- Por transferencia nuclear, que fue

el mtodo utilizado para clonar a la
oveja Dolly.

- Agregacin de embriones clonados

para incrementar los resultados de
preez.

La clonacin por TN es hoy una realidad pero an hay mucho por

investigar en cuanto a incrementar la eficiencia de las tcnicas,
resultados de preez y sobrevida de los fetos producido, as como
trastornos en su desarrollo hasta adultos.
Muchas Gracias!