m. k.

DASAR TEKNOLOGI MIKROBIAL

TIN 232/1 (2-0)

PROSES HILIR
(Downstream Process)

Dosen : Liesbetini Hartoto

DEPARTEMEN TEKNOLOGI INDUSTRI

PERTANIAN
FATETA IPB
2011
 RANAH PROSES HILIR
PROSES HULU
PROSES HILIR
Bahan baku
residu
Penanganan/pembuangan
Persiapan bahan Residu
broth filtrat
Pemisahan Isolasi produk
Fermentasi
biomassa
Penanganan/
pembuangan
Sterilisasi biomassa

Pembuangan/daur
ulang (recycle)

Pemanfaatan/pembuangan

Downstream after the fermentation process

 DIAGRAM ALIR BIOPROSES

Substrat Analisis Pendahuluan

Pengaturan pH H2O
Persiapan media
Teknologi Pencampuran
fermentasi
Penambahan garam
mineral, Sumber C
dan N dll Inokulum
Sterilisasi

Energi
Aerasi Fermentasi CO2 dan gas lain
Pengukuran Panas
& pengontrolan
Pemisahan Biomassa dan Biomassa
cairan kultur

Isolasi Produk Residu Fermentasi

Purifikasi Produk &

Residu Fermentasi
Formulasi

Produk Akhir Pembuangan Residu

Proses hilir : sulit perlu teknik yang tepat dan biaya tinggi

20 60 % total biaya produksi

Cara menurunkan biaya :

1. Meningkatkan konsentrasi produk yg dihasilkan
- teknologi kultivasi
- rekayasa genetika
2. Proses hilir dibuat lebih efisien
 KRITERIA PEMILIHAN
METODE PROSES HILIR
Lokasi produk (intra/ekstraseluler)
Konsentrasi produk dalam cairan kultivasi (broth)
Sifat-sifat kimia dan fisik produk (ukuran partikel, kelarutan,
densitas, difusifitas, muatan dll)
Penggunaan produk pangan, farmasi dll
Standar tingkat kemurnian minimal yang ditentukan
Adanya senyawa pengotor (mis. pigmen) dalam cairan
kultivasi
Harga jual produk
 KARAKTERISTIK BIO-PRODUK
1.Konsentrasi rendah dan campuran kompleks
(sel, komponen medium & produk metabolik)
Konsentrasi (g/l)
- PST 30-50
- Etanol 70-120
- Camp.aseton/butil alkohol/etanol 18-20
- Asam organik 40-100
- Antibiotika (Penisilin G) 10-30
- Enzim 2 -5
- Vitamin B-12 0.02
- Riboflavin 10-15

2. Lokasi Produk (intraseluler/ekstraseluler)

3. Labil/sensitif thd pH, suhu, kekuatan ion dll
4. Tidak stabil
pH, suhu, kekuatan ion, jenis pelarut yang digunakan,
dirusak mikroba kontaminan dll

dapat dihindari dengan pendinginan 5oC tapi biayanya

tinggi

5. Gravitas Spesifik partikel hampir sama / kental

menyulitkan sentrifugasi / presipitasi

6. Sel m.o compressible (dapat dimampatkan & lengket)

menyulitkan filtrasi karena terbentuk kerak
 TAHAPAN UMUM PROSES HILIR
Cairan Kultivasi/Fermentasi

1. Pemisahan sel m.o/ partikel tidak larut

(filtrasi, sentrifugasi, sedimentasi)
2. Isolasi primer isolasi produk dari cairan kultivasi
pemekatan ( belum murni)
(ekstraksi dengan pelarut, presipitasi, ultrafiltrasi)
3. Purifikasi penghilangan, kontaminan
(fractional presipitation, khromatografi)
4. Isolasi produk tahap akhir sesuai formulasi/
aplikasi akhir atau distribusi/transportasi
= Polishing drum/spray drying, pengeringan
beku (freeze drying), kristalisasi
 PROSES HILIR IDEAL
Diperoleh produk berkualitas tinggi
Proses cepat & efisien
Investasi peralatan tidak mahal
Biaya operasi rendah

Pemilihan proses hilir harus tepat

 KLASIFIKASI METODE PEMISAHAN

Prinsip pemisahan Metode Ukuran partikel

pemisahan (m)
Ukuran partikel - Fiberfiltrasi > 200 10
- Mikrofiltrasi 20 0.5
Ukuran molekul - Ultrafiltrasi 2 0.005
- Hiperfiltrasi 0.008 0.00025
- Gel Khroma- 2 0.0003
tografi
- Dialisis 0.002 0.00025
Suhu - Kristalisasi < 0.0002
KLASIFIKASI METODE PEMISAHAN

Prinsip Metode Ukuran partikel

pemisahan pemisahan (m)
Kelarutan -Adsorbsi < 0.002
-Ekstraksi

Muatan listrik -Elektroforesis 2 0.02

-Elektrodialisis 0.02 0.00025
-Pertukaran ion 0.02 0.00025

Bobot jenis -Sedimentasi > 1000

(densitas) -Dekantasi 1000 5
-Sentrifugasi 1000 0.5
-Ultra 2 0.02
sentrifugasi
 FILTRASI
Pemisahan partikel tersuspensi dari cairan/gas

Menggunakan medium filter berpori yang menahan

partikel (=retentat), tetapi melewatkan cairan/gas (=filtrat)
Proses umum untuk semua skala operasi
.
slurry
.
Filter cake
-- - - - - - - - filter
-
-

filtrat
 PERALATAN FILTRASI
1. Rotary Vacuum Drum Filter
- drum bersekat yang dilapisi filter kain/logam
dimasukkan tangki cairan kultivasi (bagian yg
terendam 35%)
- filter dilapisi filter aid
(contoh : tanah diatomeae)
- kecepatan berputar
Produk
0.1-10 rotasi/menit
Umpan
- vakum dijalankan
melalui pipa drainasi
- filtrat terkumpul melalui pipa
di bag dalam drum

Filtrat
 PERALATAN FILTRASI

1. Rotary Vacuum Drum Filter

- filter cake (kerak) dipotong dengan pisau produk
- penggunaan :
* enzim ekstraseluler
* sel khamir & kapang dll

untuk volume besar &

proses sinambung
2. Leaf Filter

- dapat dioperasikan seperti vacuum/presure filter

- selama filtrasi tidak diputar akhir filtrasi diputar
untuk pembuangan padatan
- Filter aid (tanah diatomeae dll) ditambah pada umpan
- dapat digunakan secara tertutup
Leaf Filter
3. Filter Press
- plate & frame berseri tiap plate dilapisi filter
sederhana dan murah
- Broth ditekan dg tekanan ( 20 bar) padatan
tertahan di bag dlm bejana & filtrat dikeluarkan melalui
saluran pada permukaan plate
- digunakan untuk suspensi yang sulit di-filter (kental)
- tidak memerlukan filter aid
- operasi batch (curah)
- waktu penghilangan cake pembersihan & pemasangan
alat lebih lama
 Filter Plate

Filter Press
 SENTRIFUGASI
Diperlukan bila :
1) Pemisahan dgn filtrasi sulit (perbedaan densitas sel & produk
kecil) dan mahal
2) Sel dan bahan tersuspensi lain harus bebas dari filter aid
3) Diperlukan pemisahan dgn standar higiene tinggi

Dasar pemikiran :
Pemisahan berdasarkan perbedaan densitas antara
padatan dan cairan & ukuran partikel dan viskositas cairan
medium yang dipercepat dgn gaya sentrifugal

Partikel padatan mengalami akselerasi (percepatan) yang

berbeda
Centrifus : peralatan yang digerakkan dengan motor
contoh berotasi sekitar sumbu, menggunakan
gaya yang tegak lurus thd sumbu.

-Prinsip kerja alat : sedimentasi (Hukum Stokes)

pemisahan partikel bahan berdasarkan perbedaan
densitas

- Faktor yg mempengaruhi laju sedimentasi :

* perbedaan densitas antara sel dgn cairan
* diameter sel
* viskositas cairan

- Sentrifus batch kapasitasnya terbatas tidak cocok untuk

skala besar
- Sentrifus yg digunakan untuk pemisahan sel biasanya
dioperasikan secara sinambung atau semi sinambung
 Centrifugation properties of different cell types

Bacteria
Highspeed required
Small cell size
Low cell damage
Resilient
Yeast cells Lower speed required
Large cells
Low cell damage
Resilient
Filamentous fungi Lower speed required
Mycelial
High water retention in
Resilient pellet
Cultured animal cells
Large cells Very susceptible to damage
Very fragile
Industrial centrifuges
bowls, motor drives, cooling jackets
& sludge collection vessels

Tubular bowl Chamber Disc

Faktor akselerasi
Tubular centrifuge 13000 17000 g
Chamber centrifuge 6000 11000 g
Disc-stack centrifuge 5000 15000 g
 Properties of industrial centrifuges

Tubular Limited solids capacity

Foams
- High centrifugal force
Difficult to recover protein
Good dewatering
Easy to clean
No solids discharge
Chamber Cleaning difficult
Large solids capacity Solids recovery difficult
Good dewatering
Bowl cooling possible Poor dewatering
Difficult to clean
Disc type
Solidsdischarge
No foaming
Bowl cooling possible
 ISOLASI PRODUK
ekstraseluler langsung diekstraksi
Produk
intraseluler pemecahan sel
1. Metode fisika-mekanika
- liquid shear (high-pressure homogenizer)
- solid shear (ekstrusi dg tekanan pd sel mo beku (-25 0C)
- pengadukan dg abrasives (glass ballotini)
- pembekuan & pencairan (kristal es merusak sel)
2. Metode Kimia
- Deterjen (e.g. sodium lauril sufat, Tween, Triton X-100)
- Kejutan osmotik (perubahan mendadak kons. garam)
- Perlakuan dengan alkali (untuk enzim yg tahan alkali)
- Perlakuan dengan enzim (e.g lysozime) kondisi lunak
tapi mahal & purifikasi kompleks
 Cell disruption (for intracellular enzymes)
Sonication
Use of high frequency sound waves to disrupt cell walls
and membranes
Can be used as continuous lysis method
Better suited to small (lab-scale) operations
Can damage sensitive proteins

Pressure cells
Apply high pressure to cells; cells fracture as pressure
is abruptly released
Readily adapted to large-scale and continuous operations
Industry standard (Manton-Gaulin cell disruptor)

Enzymic lysis
Certain enzymes lyse cell walls
Lysozyme for bacteria; chitinase for fungi
Only useful on small laboratory scale
ISOLASI PRODUK
1. Ekstraksi Cairan-cairan
Pemisahan komponen suatu cairan dengan penggunaan
pelarut yang dapat melarutkan komponen tersebut

Penentuan jenis pelarut nilai koefisien partisi atau

distribusi (K)

Konsentrasi solut dalam ekstrak

K=
Konsentrasi solut dalam rafinat

K > 0.5 pemisahan lebih mudah ekstraksi 1 tahap

K < 0.1 Ekstraksi bertahap :
- Concurrent (aliran searah)
- Counter Current (aliran berlawanan arah)
Peralatan Ekstraksi dgn Pelarut :

Skala Kecil (Lab) :

separating funnel

Skala Industri :
centrifugal contactors,
spray columns,
pulsed columns
dan mixer-settlers.

Mixer-settler
ISOLASI PRODUK

2. Destilasi
Untuk pengambilan cairan/pelarut (produk kultivasi, e.g
etanol, aseton, butanol dll )

Tahapan :
a. Evaporasi pemisahan pelarut dari cairan kultivasi
b. Pemisahan uap cairan untuk memisahkan pelarut
yang lebih volatil dan kurang volatil
c. Kondensasi uap untuk mendapatkan pelarut kembali
 ISOLASI PRODUK

3. Khromatografi

Isolasi & pemurnian metabolit dengan konsentrasi

rendah

a. Khromatografi Adsorbsi
contoh : untuk antibiotika streptomisin

Adsorbsi senyawa oleh fase padat (absorban). Pemisahan

terjadi karena setiap senyawa diadsorbsi dengan kekuatan
berbeda-beda
senyawa yang diikat paling kuat akan dielusi paling
akhir
Contoh absorban : karbon aktif, Mg oksida, Al oksida,
Al (OH)3, silikat gel
b. Khromatografi Penukar Ion
contoh : untuk antibiotika
Pertukaran antara ion pada fase cair dan fase padat yang
reversible tanpa mengubah strukturnya

Fase padat resin penukar ion

Contoh :

R-COONa+ + streptomycin R-COOstreptomicin+ + NaOH

(resin) (resin)

R-COOstreptomicin+ + HCl R-COOH + streptomicin+Cl

(resin) (resin)

Regenerasi Resin : R-COOH + NaOH R-COONa+ + H2O

c. Khromatografi Filtrasi Gel
contoh : untuk vaksin
Pemisahan berdasarkan atas ukuran molekul.
Mol kecil berdifusi ke dalam gel lebih cepat, sehingga
dielusi paling akhir

d. Khromatografi Afinitas

contoh : untuk enzim

- Pemisahan berdasarkan struktur kimia atau fungsinya

interaksi spesifik antara pasangan molekul-molekul
biologis :
a. enzim - substrat
b. enzim - inhibitor
c. antigen - antibodi
 POLISHING
(Penyelesaian)

KRISTALISASI
pemisahan padatan dari larutan (teknik pemurnian
senyawa padatan)

- Prinsip : pembentukan padatan kristal dari larutan lewat

jenuh (supersaturated)

Contoh : Produksi asam sitrat

Produksi asam amino ( asam glutamat, lisin)
Produksi asam MSG
Widely used
crystallizer type
(Swenson Draft tube)

http://www.tkk.fi/Units/ChemEng/research/Crystallization/SwenDTB.gif
 PENGERINGAN

Agar memudahkan penanganan dan pengangkutan

harus dijaga viabilitas, aktivitas & nilai gizi produk

Sebelum pengeringan dapat disentrifugasi/filtrasi

kadar air produk berkurang, sehingga pengeringan lebih

cepat

Spray drying
Cara pengeringan cairan menggunakan udara panas

cairan dipompa melalui atomizer, sehingga dihasilkan

tetesan halus ke dalam bejana pengering powder
Spray drying

:http://class.fst.ohio-state.edu/.../14Spraydrying.htm
Contoh : Proses Hilir Ragi Roti
Cairan kultivasi S. cerevisiase

Centrifugasi Filtrat

Pasta Ragi

Rotary Vacuum Filter

(pengeringan)

Tepung Ragi Roti

Proses Hilir Asam Sitrat
A
Cairan kultivasi A. niger
Evaporasi

Rotary Filter miselium mo

Kristalisasi

Filtrat + Ca(OH)2
Sentrifugasi
Rotary Filter Kalsium sitrat
Pengeringan
(+) H2SO4

Asam Sitrat
Rotary Filter

Asam sitrat CaSO4

A
 Proses Hilir Penisilin
Cairan kultivasi

Rotary vacuum Filter Miselia mo

Ekstraksi dg centrifugal extractor

(pelarut : amil asetat/butil asetat)

Evaporasi & Kristalisasi

Re-ekstraksi dg air
(+buffer)

Pengeringan
(vacuum Drier) Penisilin
Contoh : Formulasi Enzim Deterjen

Protease alkalin dari Bacillus sp

Bentuk awal : dry powder pekerja alergi & gangguan kulit

Formulasi : enkapsulasi :
- debu tak beterbangan
- partikel larut cepat
- tak menghasilkan bau & warna
- daya simpan lebih baik, melindungi thd komponen lain
contoh pemutih (bleaching agent )
Proses Enkapsulasi Protease

Cairan fermentasi (broth) filtrasi presipitasi enzim

filtrasi pengeringan disaring powder

Formulasi :
enzim powder dicampur aditif penstabil etoxylated-C18-fatty
alcohol terbentuk bola lalu dilapis (minyak parafin atau
PEG) agar tidak berdebu selama penanganan