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CROMATOGRAFIA

Tcnica utilizada na separao dos componentes de uma amostra, os


quais se distribuem em duas fases, uma estacionria e a outra mvel
(IUPAC)
Planar: papel, centrifugao, camada delgada
Coluna: lquida, gasosa, supercrtica
Figura X: Cromatografia planar em papel

Fonte: Mundo Educao UOL


CROMATOGRAFIA GASOSA
Em coluna
Separao de compostos volteis/estveis termicamente
Fase estacionria
Cromatografia Gs-Lquido (CGL);
Cromatografia Gs-Slido (CGS);
Fase mvel
Gs de arraste
GS DE ARRASTE
Inerte
Alta pureza

Hidrognio, nitrognio e hlio;

Carregar a amostra atravs da coluna


Prover uma matriz adequada para o detector diferenciar os
componentes da amostra.
Figura X: Componentes bsicos de um cromatgrafo gasoso

a) Cilindro do gs de arraste
mantido sob alta presso;
b) Injetor;
c) Coluna;
d) Detector;
e) registrador.

Fonte: SBQ
SEPARAO
Foras de interao dos componentes com a fase estacionria
Quanto mais forte a interao, maior o tempo de reteno do composto
Fatores que influenciam a cromatografia em coluna:
Presso de vapor
Polaridade
Temperatura da coluna
Vazo do gs de arraste
Tamanho da coluna
Quantidade de material sendo analisado
Diferentes picos = diferentes componentes
CROMATOGRAMA reas abaixo dos picos = quantificar a
frao molar de cada componente

1 componente 2 componentes
AMOSTRA PADRO
Amostra de referncia que contm o analito de interesse
Padro externo:
Amostra e padro so injetados separadamente e a identificao do
composto desejado feita atravs da comparao de alguma caracterstica,
por exemplo, o tempo de reteno.
Padro interno:
Adio de quantidade conhecida de elemento de referncia nos padres e na
amostra.
MTODOS DE CALIBRAO
Padro externo
preparao de vrias solues com concentraes diferentes do analito, todas
de mesmo volume (difcil de se conseguir)

Padro interno
preparao de vrias solues todas de mesma concentraes do analito;
atenua os problemas oriundos da incerteza do volume de amostra aplicado;
vrias so
INJETORES
Split;
Splitless;
In-Column;
INJEO SPLIT
Tcnica simples;
A amostra vaporizada e 1-2% do vapor entra na coluna;

Vantagens:
Separaes de alta resoluo;
Introduo de amostras concentradas sem necessidade de dilu-las;

Desvantagens:
Limitao da anlise de traos;
Amostra que entra na coluna no representativa da amostra injetada;
Fonte: McNAIR, H. M.; MILLER, J. M., 2009
INJEO SPLITLESS
Utiliza o mesmo equipamento da injeo split, porm com a vlvula
de split inicialmente fechada;

Vantagens:
Melhora na anlise de traos para amostras farmacuticas, biomdicas e
ambientais.

Desvantagens:
Consome muito tempo, torna-se necessria a programao de temperatura;
Fonte: McNAIR, H. M.; MILLER, J. M., 2009
INJEO IN COLUMN
Figura X: injetor tipo in column

Fonte: Introduo a cromatografia, UFSM (2011)


COLUNA
Ocorre a a separao dos componentes;
Fase estacionria Destaque;
Dois tipos principais de colunas:
Empacotadas;
Capilares;
WCOT;
SCOT;
PLOT;
Figura X: Tipos de coluna para Cromatografia Gasosa: (a) coluna
empacotada; (b) WCOT; (c) SCOT; (d) PLOT.

Fonte: COLLINS, C. H, et al., 2006.


COLUNAS CAPILARES
Vantagens:
Aumento significativo no nmero de pratos em relao as colunas
empacotadas;
Anlises mais rpidas, mesmo em baixas temperaturas;
Maior comprimento = maior eficincia

As colunas capilares devem apresentar estabilidade fsica e qumica;


ANLISE QUALITATIVA
Identificao individual das espcies contidas na amostra x
Determinao da identidade da amostra propriamente dita
Fontes de informao: Figura X: Anlise por tempo de
Tempo de reteno reteno
(constante para cada espcie)

Deteco
DETECTORES
Captao dos componentes de uma coluna ;
Fornece uma resposta na forma de um cromatograma;
Os sinais do detector so proporcionais quantidade de cada analito;

Mais poderoso: Espectrometria de massa (MS);

Mais aplicvel: Detector de Ionizao de Chama (FID);


Tabela X: Gases de arraste para cada detector

Fonte: McNAIR, H. M.; MILLER, J. M., 2009


ESPECTROMETRIA DE MASSA
Em um sistema GC/MS, o espectrmetro de massa varre as massas
continuamente ao longo da seprao
No MS, a amostra ionizada e fragmentada
Os ions so analisados e classificados de acordo com sua relao
massa/carga
Cada sustncia apresenta um padro de fragmentao especfico
DETECTOR DE
IONIZAO DE CHAMAS
Figura X: Esquema GC/FID Os efluentes da coluna so queimados em
uma pequena chama de ar sinttico-
hidrognio
ons gerados pela combusto de compostos
orgnicos na chama proporcionalmente a
concentrao das espcies orgnicas na
amostra
Boa sensibilidade, grande linearidade,
Fonte: ETS Laboratories simplicidade, robustez e adaptabilidade a
todos os tamanhos de colunas
Compostos que no contm carbono orgnico
no queimam e no so detectados
ANLISE DO BIODIESEL
Monitoramento de glicerina, steres e lcoois para garantia da qualidade da
mistura
Padres internos comuns:
ster metlico em C17;
ster metlico em C23;
Uso de injetor in column indicado
A massa do ster obtida atravs da comparao da rea total dos picos
correspondentes com a rea do pico do padro utilizado como referncia
cada cido graxo interage de forma nica, porm constante, com a fase estacionria;
dessa forma os picos e tempos de reteno dos cidos graxos so sempre os mesmos, nas
mesmas ordens;
assim o tempo de reteno pode ser usado para determinar a composio de cidos graxos
da amostra
Norma EN 14103
EXEMPLO: ANLISE DA PRESENA DE CIDO
LINOLNICO Contedo de ster em frao
molar
Figura X: Separao de biodiesel por cromatografia gasosa
usando ster metlico C17 como padro interno Contedo de cido linolnico em
frao molar

A: rea total dos picos de C14:0


a C24:1
AEI: rea do padro interno
AL: rea do pico de cido
linolnico - C18:3
CEI: concentrao da soluo de
padro interno, em g/mL
VEI: volume da soluo de
padro interno, em mL
Fonte: Agilent Technologies, Inc m: massa da amostra, em g
ESPECIFICAES

PELISSON et al. Scientia Chromatographica, 2012

KNOTHE. JOACS, Vol 83, no 10 (2006)


REFERNCIAS BIBIOGRFICAS
McNAIR, H. M.; MILLER, J. M. Basic gas chromatography. 2nd ed. New York:
John Wiley & Sons, 2009. 239 p.
TERCINI,A.C.B. Desenvolvimento e validao de mtodo analtico
empregando cromatografia ultrarrpida para quantificao do teor total
de steres em amostra de biodiesel. 2014. 87 f. Tese (Mestrado em
Qumica) - Universidade Estadual Paulista,Instituto de Qumica . 2014.
COLLINS, C. H.; BRAGA, G. L.; BONATO, P. S. Fundamentos de
cromatografia. Campinas: Ed. UNICAMP, 2006. 456 p.
FARIA, 2013. Desenvolvimento de metodologias analticas alternativas por
cromatografia gasosa para anlise do Biodiesel. Tese de Doutorado. UFRN,
2013.
REFERNCIAS BIBIOGRFICAS
Introduo cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE - HPLC). Apostila da Universidade
Federal Fluminense (UFF) - Departamento de Qumica Orgnica. Apostila utilizada na disciplina de
Qumica Orgnica Experimental I. Autoria: Luci Martins Viana (Professora Associada - GQO - UFF)
e Priscila Alvares Pinto (Programa de Monitoria GQO/2012).
Cromatografia: Um breve ensaio. Autoria: Ana Luiza G. Degani, Quezia B. Cass, Paulo C. Vieira.
Qumica Nova Interativa (QNINT) - Sociedade Brasileira de Qumica (SBQ). Originalmente
publicado em Qumica Nova na Escola, n. 7, maio 1998. Edio: Leila Cardoso Teruya.
Coordenao: Guilherme Andrade Marson.
PELISSON, L.; Oscar BAHIA FILHO, O.; LANAS, F. M. Determinao direta de mono, di e
triglicerdeos em biodiesel: anlise crtica da metodologia recomendada e sugestes de alterao
nos parmetros experimentais da HT-HRGC, visando estabilidade e consistncia das medidas.
Scientia Chromatographica 2012; 4(2):111-124
DUKEVOT, C. Determination of total FAME and Linolenic Acid Methyl Esters in Biodiesel according
to EN 1403. Agilent Technologies, inc.
ADAIME, M. Cromatografia: Fundamentos, instrumentao e aplicaes. Universidade Federal de
Santa Maria. 2011.