TECNICAS DE CULTIVO-CARACTERISTICAS

INTRODUCCION
Los microorganismos estn por todas partes (aire, comida, bebidas,
etc.) por lo que se denominan ubicuo. El microbilogo debe ser capaz
de identificar organismos que aparecen rpidamente y fcilmente. Si
hay moho u otros microbios que no sean bacterias, se observan
caractersticas que sern cubiertas en sesiones de laboratorio
posteriores. Este laboratorio ofrece especficamente con las
caractersticas de crecimiento de los organismos bacterianos
CRECIMIENTO MICROBIANO
Los microbios (no slo las bacterias) requieren condiciones adecuadas
de incubacin. Estos pueden incluir los nutrientes, productos
qumicos, temperaturas, etc. Si las condiciones son correctas, los
microbios son capaces de multiplicarse y formarn colonias. Una
colonia es la nica manera de ver a los microorganismos a simple
vista y debe recordarse que las colonias son grandes grupos de
microbios, no individuos. El uso de nutrientes, qumicos, pH,
temperatura, salinidad y otras condiciones de incubacin, un
microbilogo es siempre con la primera pista de lo que un organismo
particular podra ser.
 Para un informe preciso, el estudiante de microbiologa debe
aprender el vocabulario del microbilogo. Las descripciones de las
colonias deben ser concisas y formulando de tal manera que otros
cientficos sabrn lo que se est describiendo. Los trminos utilizados
en este laboratorio se emplean en el MANUAL DE BERGEY DE
BACTERIOLOGA SISTEMTICA que consta de cuatro volmenes y es la
fuente de libros ms utilizados para las bacterias taxonmicas.

Las descripciones de los patrones de crecimiento para diversos

medios se dan en los siguientes pginas junto con diagramas.
Tambin hay otras caractersticas que se pueden utilizar desde
crecimiento de las colonias en los medios, sin embargo, la mayora de
los otros caracteres diagnsticos son fisicoqumicos en origen y se
explicar en los siguientes laboratorios.
MATERIALES PARA LAS TECNICAS DE CULTIVO
CULTIVOS
(1) Cultivo de TSB de Bacillussubtilis
(1) TSB cultivo de Streptococcusbovis o Streptococcusequi
(1) TSB cultivo de Staphylococcusaureus
(1) TSB cultivo de Proteus mirabilis
(1) tubo TSB
(2) placas TSA
(1) portaobjetos de microscopio
INSTRUMENTOS
Asa de inoculacin
Quemador de Bunsen
Huelguista
Reactivos de tincin de Gram
Botella de agua
Alfiler de ropa
OBJETIVOS
OBJETIVO PRIMARIO
Estudiar los patrones de crecimiento de organismos especificados en caldo y en formas
variables de slidos
Medios de comunicacin para que la identificacin aproximada de cada organismo se
pueda hacer utilizando el crecimiento de colonias
patrones.
OTROS OBJETIVOS
Demostrar los procedimientos de inoculacin adecuados para los caldos y las placas.
Comprender y utilizar el vocabulario descriptivo utilizado en microbiologa.
Reforzar los procedimientos de tincin de Gram.
Describir con precisin los patrones de crecimiento en el caldo, en los pliegues y en las
placas.
Aprender el procedimiento adecuado para extender las placas y demostrar esta
Obteniendo incluso un crecimiento que cubre completamente el medio.
FORMAS DE CULTIVO

CALDO DE CULTIVO
Las bacterias, cuando se suspenden en caldo, pueden causar nubosidad o
turbidez, ahi son macizos flotantes que se conocen como floculantes. A
menudo las bacterias forman un anillo en la parte superior que flotar como
una isla pesada conocida como una pelcula, clulas que se hunden en el
fondo del tubo que convierten en sedimento y los que flotan en wisps abajo
de la superficie se denominan serpentinas
PLACAS DE CULTIVO
En las placas, una colonia aislada se utiliza mejor para fines descriptivos. A
continuacin, se usan habitualmente trminos para describir colonias tal
como se ven en una placa de agar:
 PLACAS DE CULTIVO/caractersiticas
o TAMAO - dimetro de la colonia medida en mm o cm
o FORMA DE LA COLONIA ENTERA - circular, rizide, puntiforme, irregular,
lenticulado
o BORDE O MARGEN - lobatos, enteros, ondulados, filamentosos, erosa
o ELEVACIN - elevado, plano, umbonato, convexo, pulvinate, crateriforme
o ANILLOS SUPERFICIALES - arrugados, speros, concntricos, opacos, cerosos,
brillantes, etc.
o COLOR: rojo, crema, blanco, amarillo, ninguno, etc.
o SOLUBILIDAD EN AGUA - teido soluble en agua la colonia y el agar ONo
soluble en agua solo se colorea la colonia.
o OPACIDAD: transparente, translcido, opaco.
o OLOR - putrefaccin, afrutado , etc.
 PREPARACION DE UN MEDIO DE CULTIVO EN PLACA PETRI.
PROCEDIMIENTO TEORICO

El proceso exacto requiere de una inoculacin del cultivo original(CEPA) para el

rea primaria. El bucle es inflamado y enfriado, despus de girar la placa 90
grados, algunas bacterias se extienden sobre en el rea secundaria del rea
primaria. El bucle se flamea, se enfra y la placa vuelve a girar y se propagan unas
cuantas bacterias desde el rea secundaria hasta el rea terciaria. Si el inculo es
pesado, el rea debe hacerse ms pequea para que se distribuyan menos
organismos. Si el inculo es el rea primaria debe hacerse ms grande para que
ms organismos puedan ser introducidos. A menudo se utilizan placas de
dispersin cuando se necesitan reacciones de ensayo.
 TECNICA DE CULTIVO
El procedimiento es bastante simple en que se coloca un hisopo estril con
punta de algodn en el cultivo y luego se aplica a una placa con medios. La
tcnica de extensin requiere que Toda la superficie del medio se cubra con
inculo. Una propagacin suave es lo que es Considerado mejor. La siguiente
ilustracin muestra la forma apropiada de sembrar. Se usan giros de 90 grados,
tal como se usan en la tcnica de la placa de rayas, pero no de los organismos.

Asegrese de ir todo el camino hasta los bordes de la placa. No debe verse

ningn agar! (despusCrecimiento.)
PROCEDIMIENTO 1 - ORGANISMOS GRAM TINCIN

1. Obtener 1 cultivo de TSB de S. aureus, P. mirabilis, B. subtilis o

S.bovis.

2. Obtener una diapositiva y proceder a la tincin de Gram de dos de

las cuatro muestras bacterianas de acuerdo con el procedimiento
de tincin de Gram del Laboratorio # 4. (Usted puede poner 2
muestras por Diapositiva- asegrese de trabjar los cuatro
organismos entre usted y su compaero de laboratorio.)

3. Registre las conclusiones a continuacin.

o Staphylococcusaureus- Bacillussubtilis

o Streptococcusbovis (o equi) - Proteus mirabilis

PROCEDIMIENTO 2 - DESCRIBIENDO PATRONES DE CRECIMIENTO EN CALDO, Y EN PLACAS DE
AGAR
(PRIMERA PARTE)
1. Obtenga 1 tubo TSB estril y 1 placa TSA estril.
2. flamea el lazo de inoculacin.
3. Abrir 1 tubo TSB no inoculado e inocular con 3 bucles llenos de uno de los
organismos que se tien en el Procedimiento 1(COLORACION
GRAM).Flamea el labio del tubo de reserva y nuevo. TSB labio, labio antes y
despus de la inoculacin, as como el bucle de inoculacin.
4. Abra una placa TSA no inoculada, sujete para que el aire no pueda llegar al
agar y, usando 1 Lazo lleno del organismo que utiliz en # 3, raya para el
aislamiento usando el mtodo cuadrante. Flamea el labio del tubo antes y
despus de la inoculacin, as como el bucle de inoculacin. Cada persona
har un organismo y se asegurar de que los cuatro organismos se utilizan
en su banco.
5. Incubar a 35C durante 24-48 horas. Asegrese de que las placas estn
giradas de manera que el agar est encima.Esta es la forma apropiada para
que las placas de agar se incuban
PROCEDIMIENTO 2 - DESCRIBIENDO PATRONES DE CRECIMIENTO EN CALDO, Y EN
PLACAS DE AGAR
(SEGUNDA PARTE)
Recuperar todos los pliegues, caldos y platos.
Observe los patrones de crecimiento y registre los patrones de su organismo, luego
observe las placas/tubos de sus compaeros para que vea los cuatro
organismos.Utilizar las tcnicas microbiolgicas(Consulte el libro de laboratorio en
espiral para obtener ms informacin).

Staphylococcusaureus:
Caldo
Plato
Bacillus subtilis
Caldo
Plato
Proteus mirabilis:
Caldo
Plato
Streptococcusbovis (o equi):
Caldo
Plato
 Procedimiento 3 - Preparacin de una plancha (trabajo en grupos de 2)
o Obtener una placa de TSA y un tubo TSB del organismo del Procedimiento # 2.
o Preparar una placa separadora de cada uno segn las tcnicas descritas.
o Incubar durante 48 horas a 35C.
Segunda sesin:
o Observe el crecimiento uniforme en la placa, extendindose hasta los bordes.