Histoqumica

Dr. Giovanni Arnoldo Molina Paredes

Residente de Primer Ao de Patologa
Agosto 2012
Introduccin.
Las imgenes producidas por absorcin, en
preparaciones coloreadas, son mucho ms
fciles de interpretar que las imgenes de
difracciones dada por preparaciones no
coloreadas.
Los diversos elementos de los tejidos poseen
ms o menos el mismo ndice de refraccin,
lo que hace que el reconocimiento sea una
tarea difcil.
Estos dos argumentos hacen comprender la
necesidad de las coloraciones para el
estudio morfolgico de clulas y tejidos.
Introduccin.
Coloracin: es el proceso mediante el
cual un cuerpo es teido por una
sustancia colorante, sin perder el color
cuando es lavado con el disolvente
utilizado al preparar la solucin colorante.
Introduccin.
Colorantes: reciben esta denominacin las
sustancias que pueden conferir color a otros
cuerpos. poseen tres componentes
importantes: un esqueleto incoloro, que
normalmente es un anillo aromtico de
benceno, al cual se le unen dos tipos de
radicales: uno que aporta el color,
denominado cromforo, y otro que posibilita
la unin a elementos del tejido denominado
auxocromo. Al conjunto de estos tres
elementos unidos en una molcula se
denomina cromgeno.
Introduccin.
Introduccin.
Las coloraciones pueden ser:
Ortocromticas: los tejidos adquieren un
color igual al de la solucin colorante
empleada.
Metacromticas: una sustancia o un
componente celular se tie con un color
diferente al del colorante empleado.
Introduccin.
Mtodos de coloracin:
Coloracin directa: existe verdadera afinidad entre el
colorante y el objeto.
Coloracin indirecta: requiere intervencin de intermediarios
o mordientes.
Coloracin progresiva: se hace actuar el colorante hasta que
llegue a su punto ptimo.
Coloracin regresiva: se realiza primero una sobrecoloracin y
luego se elimina el resto del colorante por medio de
diferenciadores.
Coloracin simple: se colorean solamente algunos elementos
del preparado.
Coloracin combinada: se tien elementos nucleares y
citoplasmticos.
Coloracin panptica: coloracin combinada realizada
sucesivamente por colorantes neutros.
Coloracin pancrmica: en un solo bao colorante actan
todos los colorantes neutros que se necesiten.
Batera de coloracin H-E.
Desparafinar los cortes con dos
baos de xileno de 10 a 15 min.
c/u.
Eliminar el solvente por sucesivos
baos en alcohol de 100, 96, 70
de 1 a 2 min. c/u.
Hidratar en agua destilada durante
1 a 2 min.
Tincin nuclear en hematoxilina
durante 2 a 12 min. de acuerdo a
la formula utilizada.
Viraje de la hematoxilina en agua
corriente hasta desprendimiento
total del color (3 a 5 min.).
Coloracin citoplasmtica con
eosina durante 15 a 30 seg.
Lavado en agua destilada.
Deshidratar, aclarar y montar.
Los pasos de la deshidratacin
pueden ser suplidos dejando secar
el corte en estufa a 37 por 15 a 20
min.
Colorantes y reacciones histolgicas
comunes.
Hematoxilina: Ncleo y regiones cidas.
Eosina: Regiones bsicas y colgena.
Tinciones argnticas: Fibras reticulares.
Hematoxilina frrica: Msculo, eritrocitos.
cido perydico de Schiff: Molculas ricas
en carbohidratos y glucgeno.
Colorantes de Wright y Giemsa: Eritrocitos y
grnulos de eosinfilos; Ncleos de
leucocitos y grnulos de basfilos;
Citoplasma de monocitos y linfocitos.
Tricrmica de Masson: Ncleos; Msculo,
queratina y citoplasma; Mucingeno,
colgena.
Tinciones histoqumicas.
Suponen una reaccin qumica en la que
intervienen molculas pertenecientes al propio
tejido.
Su objetivo es poner de manifiesto una molcula
o familia de molculas presentes en una seccin
histolgica y estudiar su distribucin tisular "in situ".
Estas molculas son difcilmente discernibles con
colorantes generales.
Tinciones histoqumicas.
Durante el procesamiento del tejido previo a la
reaccin histoqumica, como la fijacin o la
inclusin, hay que evitar daar a la molcula que
se quiere detectar porque de otra manera
resultara en falsos negativos, es decir, no tener
tincin cuando en realidad la molcula de inters
s est presente en el tejido, aunque deteriorada.
Tinciones histoqumicas.
Periodic acidSchiff (PAS).
Es una tcnica extremadamente til y
agradable estticamente. Las sustancias
que contienen grupos glicol o sus
derivados amino o alquilaminos son
oxidados por el cido peridico para
formar dialdehdos, que se combinan con
el reactivo de Schiff para formar un
compuesto insoluble de color magenta.
Demuestra el glucgeno y
mucosustancias neutrales, esboza las
membranas basales, y pone en evidencia
la mayora de los tipos de hongos y
parsitos.
Como curiosidad, cabe aadir que
tambin es til para la demostracin de
los cristales intracitoplasmticos en el
sarcoma alveolar de partes blandas.
Tinciones histoqumicas.
Tinciones para microorganismos.
Incluyen tcnicas para las bacterias gram-positivas y
gram-negativas, micobacterias cido-resistentes,
hongos y parsitos.
La tincin de Gram permite la separacin de las
bacterias en aquellas que retienen el complejo violeta-
yodo (gram positivos) y aquellas que se decoloran por
tratamiento del alcohol o acetona y son teidas por
safranina o fucsina.
Depende del alta contenido lipdico (cidos miclicos
y acidos grasos de cadena larga) en las paredes
celulares de las micobacterias, que confieren a la
clula la capacidad de formar complejos colorantes
bsicos (tales como carbolfucsina) y para retenerlos
tras la fuerte decoloracin con alcohol cido.
Las tcnicas de este grupo ms utilizados son el de
Brown y Brenn (B &B; como una modificacin de la
tincin de Gram), la tincin de Ziehl-Neelsen (de
microorganismos cido-alcohol resistentes), Grocott
hexamina y plata (para los hongos y Pneumocystis),
PAS (para los hongos, amebas y tricomonas), y Dieterle
o una de sus modificaciones (para Helicobacter,
Legionella y organismos de la sfilis y enfermedad de
Lyme).
Tinciones histoqumicas.
Tinciones argentafines y argirfilas.
La reaccin argentafn depende de la
presencia en el tejido de una sustancia, a
menudo del grupo fenlico (tales como las
catecolaminas o indolaminas), que reduce
las sales de plata (y otros metales); por lo
general se utiliza la tcnica de Fontana-
Masson en el material incluido en parafina.
En la reaccin argiroflicas, es aadido un
agente reductor tal como la hidroquinona o
la formalina; generalmente se emplea la
tcnica de Grimelius no modificada.
Se utilizan principalmente para la
identificacin de las clulas
neuroendocrinas y sus tumores, tambin
para la demostracin de fibras de reticulina,
melanina y calcio.
Tinciones histoqumicas.
Tinciones para amiloide.
La tincin llamada rojo
Congo es considerada
como la tcnica ms
fiable y prctica para
detectar amiloide.
Tinciones histoqumicas.
Tinciones de retculo.
Demuestran tanto las fibras reticulares
como materiales de la membrana basal.
Consisten en fibras muy finas de colgeno
tipo III, muy extendidas en el tejido
conectivo. Las membranas basales se
compone principalmente de colgeno tipo
IV y laminina. En ambos casos, parece que
la adsorcin de la plata y su PAS positividad
se deben a un revestimiento de
proteoglicanos consolidados.
Tradicionalmente, sus principales
aplicaciones (como Gomori, Wilder, y
Gordon y Sweet) en la patologa tumoral
han sido para distinguir: neoplasias
epiteliales de no epiteliales, diversas
neoplasias mesenquimales de otras, y
carcinoma in situ o invasor.
Tinciones histoqumicas.
Tinciones tricrmicas.
En los mtodos tricrmicos, tales como
los elaborados por Masson, Van
Gieson, y Mallory, cido fosfotngstico
o fosfomolbdico se utilizan en
combinacin con varios colorantes
aninicos.
El valor principal de este grupo de
tinciones es en la evaluacin del tipo y
cantidad de material extracelular.
Las tres estructuras tisulares
demostradas por los tres
componentes de los tintes son los
ncleos, el citoplasma, y el colgeno
extracelular, respectivamente.
Tinciones histoqumicas.
Tinciones de Perls, Fontana-Masson y von Kossa.
Las tinciones de hemosiderina (Perls), melanina
(Masson-Fontana) y calcio (Von Kossa).
En la tcnica de Perls, el cido clorhdrico se
separa de la protena unida al hierro,
permitiendo que el ferrocianuro de potasio
pueda combinarse especficamente con el
hierro frrico para formar ferrocianuro frrico
(azul de Prusia).
En el mtodo de Fontana-Masson para
melanina, una solucin de plata amoniacal se
utiliza sin un bao de reduccin. Solamente
aquellas sustancias capaces de reducir las
sales de plata directamente (es decir,
argentafines), como la melanina, se
demuestran.
En el mtodo de von Kossa para el calcio, la
plata es sustituida por sales de calcio; que
luego es reducida a una plata metlica negra
por el uso de la luz o un revelador fotogrfico.
Tinciones histoqumicas.
Tinciones para mucina.
La mucina es el trmino tradicional utilizado
para un gran grupo de macromolculas que
contiene un grupo cido, que se divide en dos
categoras principales: las epiteliales O-
glicoprotenas (unido a la membrana o
secretado) compuesto de un ncleo de
protena y un cido silico que contiene resto
de carbohidrato (si sulfatado o no) y los
glicosaminoglicanos del estroma, que
contienen cido hialurnico y que tambin
puede ser sulfatado.
Varias tinciones estn disponibles para la
demostracin especfica de mucinas
altamente cidas. Estos incluyen el azul de
Alciano, hierro coloidal, de hierro de alta-
diamina, y el clsico mucicarmn Mayer.
Se utilizan para clasificar a la metaplasia
gstrica incompleta en subtipos (que
contienen sialomucina y sulfomucina), que
tienen un potencial maligno supuestamente
diferente.
Tinciones histoqumicas.
Tincin de Giemsa.
La tcnica es muy til para la
demostracin de varios
elementos hematolinfoides
(incluyendo los mastocitos) y
microorganismos.
Los ncleos celulares se tornan
de un violeta intenso, la
granulacin eosinfila de un
pardo rojizo, el citoplasma de
linfocitos de un azul definido y
sus ncleos de violeta variable.
Tinciones histoqumicas.
Tincin para fibras elsticas.
Las tcnicas tipo Weigert son
bastante especficas para la elastina,
y son consideradas por muchos como
el mtodo de eleccin para la
demostracin de estas fibras
extracelulares.
Sin embargo, la tincin de Gieson
Verhoeff-van (VVG) es ms popular
porque es rpida y se esbozan las
fibras elsticas con un fuerte color
negro.
Ambas tcnicas se suelen establecer
en el contexto tricrmico
proporcionado por la tincin de Van
Gieson.
Como resultados, los ncleos celulares
se tien de marrn a negro, la
colgena de rosa a rojo y el msculo
y citoplasmas de amarillo.
Bibliografa.
Rosai and Ackerman's Surgical Pathology,
10th Edition, By Juan Rosai.
Laboratorio de Anatoma Patolgica, 1a
edicin, 1993.