Anda di halaman 1dari 10

Insulin Rekombinan

Struktur Asam Amino Hormon Insulin


Struktur molekul asam amino hormon
insulin terdiri dari 2 rantai peptida, yaitu
rantai A dan rantai B.
Kedua rantai ini dihubungkan dengan
ikatan sulfida.
Sebagian besar spesies, rantai A terdiri
dari 21 asam amino, rantai B teridiri dari
30 asam amino.
Gambar Struktur Asam Amino Insulin
Gambar Sintesis Insulin Manusia
Proses Sintesis Insulin Rekombinan
Kita membuat rantai A dan rantai B secara terpisah.
Gen yang menyandi protein rantai A dan rantai B dibuat
secara sintetik dengan mensintesis oligonukleotida yang
sesuai dengan sekuen nukleotida gen A dan gen B.
Untai DNA gen A dan untai DNA gen B, masing-masing
kemudian difusikan dengan operon laktosa, yaitu
promotor, operator dan gen LacZ yang menyandi B-
galaktosidase pada plasmid pBR322.
Masing-masing gen A dan gen B disisipkan secara
terpisah ke dalam plasmid, yaitu pada bagian sebelah
kanan gen LacZ, kemudian ditransfer kedalam bakteri
Escherichia coli.
Protein gabungan antara B-galaktosidase dan protein
insulin A atau B dimurnikan, dengan di hidrolisa dengan
larutan sianogen bromida untuk memecah ikatan insulin
dengan protein B-galaktosidase.
Dengan cara ini akan diperoleh polipeptida insulin rantai
A dan rantai B, yang apabila difusikan akan membentuk
protein insulin, dimana rantai A dan B dihubungkan oleh
ikatan bisulfida.
Proses Sintesis Hormon Pertumbuhan
Fragmen DNA
penuntun

Sekuen cDNA
Promotor
Vektor Plasmid

Bakteri E.Coli
Gen untuk merekayasa protein hormon pertumbuhan didapat dari
cDNA yang dibuat dari mRNA dengan enzim reverse transcriptase.
mRNA yang digunakan sebagai cetakan DNA diisolasi dari kelenjar
hormon manusia yang menghasilkan hormon pertumbuhan
Molekul cDNA yang menyandi ekspresi hormon pertumbuhan
manusia, yang terdiri dari 24 asam amino, digabung dengan suatu
plasmid vektor bakteri, yang memiliki sekuen promotor yang kuat
dan fragmen DNA penuntun.
Lalu Plasmid vektor bakteri ini yang telah disisipkan cDNA
ditransformasikan ke sel bakteri E.Coli
Molekul hormon pertumbuhan akan berada diantara lapisan
membran luar dan lapisan membran dalam, pada dinding sel bakteri
Escherichia coli, yang disebut dengan lapisan periplasma.
Dengan demikian proses purifikasi hormon
pertumbuhan yang diproduksi oleh Escherichia coli, dapat
dilakukan dengan mudah, yaitu dengan cara melisiskan
lapisan membran luar dinding sel bakteri.
Strategi kloning dengan menggabungkan gen hGH
dengan fragmen DNA penuntun dilakukan agar protein
yang dihasilkan dapat ditranslokasikan melalui membran
sitoplasma ke dalam lapisan periplasma