KROMATOGRAFI EKSKLUSI

KELOMPOK : 5
Nanda Aulia Farhani
Rifardi Nurohman
Risna Auliawati
Seliana Marliantini D.
 PENGERTIAN
Merupakan metode kromatografi yang
menggunakan partikel berpori untuk
memisahkan molekul dengan ukuran yang
berbeda. Teknik ini pertama kali ditemukan
oleh Grant Henry Lathe dan Colin R
Ruthven. Teknik ini unik karena proses
pemisahannnya didasarkan pada ukuran
partikel dari sampel. Molekul besar pada
sampel akan dipisahkan dengan molekul
yang kecil dalam sampel.
 Prinsip dasar
Kromatografi Eksklusi :

Size-Exclusion Chromatography (SEC) disebut juga

Gel Permeation Chromatography (GPC), didasarkan
pada pemisahan molekul polimer sesuai dengan
volume hidrodinamikanya ketika sampel
diinjeksikan ke dalam kolom dengan meninjau
perbedaan ukuran dan geometri molekul
 Fasa Gerak dan Fasa Diam
Fasa diam yang digunakan dapat berupa silika
atau polimer yang bersifat berpori, sehingga
solut dapat melewati pori diantara partikel atau
berdifusi melalui fasa diam.
Sedangkan fasa gerak pada kromatografi ini
tidak berpengaruh, sehingga pelarut yang
berlainan yang mempunyai daya mensolvasi
yang sama menghasilkan hasil yang sama.
 MEKANISME

Pada teknik ini, pengepak adalah suatu gel dengan

permukaan berlubang-lubang sangat kecil (porous) yang
inert. Molekul-rnolekul kecil dapat masuk dalam jaringan
dan ditahan dalam fase gerak yang menggenang (stagnat
mobile phase). Molekul- molekul yang lebih besar, tidak
dapat masuk kedalam jaringan dan lewat melalui kolom
tanpa ditahan. Akibatnya, molekul yang lebih besar terelusi
dari kolom molekul cepat dan lebih kecil kemudian, yang
secara efektif macam molekul berdasarkan ukuran. Ini
adalah prinsip pemisahan kromatografi eksklusi ukuran
MEKANISME
Gambar Kolom Kromatografi Eksklusi
Ukuran
 Kategori
MENU Kromatografi Eksklusi :

Suatu teknik yang menguraikan

Teknik Permeasi Gel
campuran zat-zat sesuai dengan ukuran
atau Filtrasi Gel
molekulnya

Suatu proses untuk memisahkan materi

ionik dari materi non ionik didasari pada
Eksklusi dan Reterdasi perbedaan distribusi pada ke dua tipe
ion zat pelarut ini di antara fase resin
penukar ion dan larutan air

Suatu saringan molekul untuk

Inorganic Molekular
pemisahan gas-gas dan molekul organik
sieves
berukuran kecil
 ANALISIS KUANTITATIF
Parameter-parameter kolom dapat
dihubungkan secara matematik dengan:

Vb = Vo + Vi + Vr = Vo Vs
Vi = m Sr/ Ps
Vi =Vo + Kd Vi
 ANALISIS KUANTITATIF
Dimana :
Vi = volume bagiana dalam gel,
Vr= volume matriks gel,
Vs= volume total face diam gel,
m = berat gel,
Sr = volume pelarut yang dipakai,
Ps = kerapatan pelarut,
Kd = koefisien distribusi,
Pr = kerapatan gel,
Vb= volume bed,
Vo= volume di luar gel,
 ANALISIS KUANTITATFIF
Pemilihan Kolom
Karena ukuran molekul sangat beragam (berat molekul
berbeda-beda) maka pemilihan ukuran pori kemasan pada
umumnya bergantung pada molekul solut yang akan
dipisahkan. Beberapa mungkin dieksklusi seluruhnya dari
pori (K=0) dan terelusi sebagai satu puncak dengan volum
mati (V0), sedangkan yang lain berpermeasi ke semua pori
(K=1) dan terelusi sebagai satu puncak dengan volum
permeasi total (V0 + Vp). Sedangkan molekul yang lainnya
lagi berpermeasi ke pori secara selektif, bergantung pada
ukuran relative dan terelusi dengan volum retensi (VR)
yang dinyatakan oleh persamaan ;
VR = V0 + KVp
 Kelebihan & Kekurangan
Kromatografi Eksklusi :

Kelebihan Kekurangan
Waktu pemisahan yang Hanya sejumlah frekuensi
cepat dan hasil yang baik terbatas dapat diakomodasi
Frekuensi tajam dan karena skala waktu
sensitivitas baik kromatogram pendek
Bebas dari kehilangan Tidak dapat digunakan
sampel, pelarut tindak untuk sampel dengan
berinteraksi dengan fase ukuran seragam, seperti
stasioner isomer
Variasi larutan dapat
diaplikasikan tampa
mengganggu proses filtrasi
 Aplikasi Kromatografi Eksklusi :
Pemisahan/clean up platelets (fungsi penting dalam haemostasis)
dari plasma darah
Metode

Preparative size-exclusion chromatography (kromatografi eksklusi),

kolom kromatografi berukuran 350 x 16 mm dengan Sepharose 4B
sebagai fase gerak dan larutan CDP/Hepharine/Dipyhidamol sebagai
eluen, dan sebelumnya di set secara terpisah eritrosit dan leukosit
dengan sentrifugasi.
Fraksi yang diambil adalah 17-19 ml, platelets diendapkan dengan
sentrifugasi pada 6000 rpm selama 5 menit. Cairan yang di bagian
atas dibuang dan platelets disuspensi dalam tempat yang baik dan
cocok untuk investigasi kimia. Dan light-scattering digunakan sebagai
detektor.
 Aplikasi Kromatografi Eksklusi :

Kromatogram dengan
sensitivitas yang tinggi

H
a
s
i
l
Dalam fraksi 16-19 ml
setelah GPC preparatif

Referensi
 Aplikasi Kromatografi Eksklusi :

Jurnal of The University of Chemical Technology

and Metallurgy, Vol. 41, No. 1, 2012

Application of Preparative Size-Exclusion

Chromatography (SEC) for Separation / Clean-UP of
Platelets from Blood Plasma Before Their Chemical
Investigation

V. Bardarov, M. Shishenkov dan K. Bardarov

 Kesimpulan :

Digunakan pada pemisahan/pemurnian platelets pada

kondisi steril supaya tidak hancur dan cocok untuk
investigasi kimia.
Hasil yang diperoleh bersih (murni) dengan ukuran yang
homogen.
Menghemat waktu dan perlakuan secara otomatis.