LATAR BELAKANG

Chagas disebabkan oleh protozoa Trypanosoma cruzi

Ditransmisikan lewat serangga triatomine sebagai vektor
Disebut sebagai American Trypanosomiasis
Triatomine akan menggigit dan menghisap darah manusia. Ketika
darah sudah dicerna, kotoran akan dikeluarkan dari triatomine dan
mengandung trypanosoma cruzi.
Ketika kotoran tersebut kontak dengan mukosa yang terbuka, maka
protozoa akan masuk ke dalam dan menginfeksi manusia
Dapat ditularkan lewat transfusi darah
MASALAH
Diagnosis untuk chagas masih belum memuaskan
Tes serologi memberikan hasil yang kurang tepat dan peralatan untuk
diagnosis yang mahal
Perlu ada tes diagnostik lain?
TUJUAN
Diharapkan dengan realt time PCR dapat memberikan sensitivitas dan
spesifisitas yang tinggi
METODE
DNA EXTRACTION
10 ml darah vena diaspirasi
5ml darah ditaruh di BD Vacutainer Plus Platic Serum Tube dan
dibiarkan selama 30 menit dalam suhu ruangan: untuk menghasilkan
bekuan
5ml darah BD Vacutainer Plus EDTA K3 Plastic Tube
Ekstraksi DNA dari 200 l serum dan blood sample menggunakan
QIAamp DNA Mini kit
DNA yang terpisah disimpan -20 c sebelum dilakukan PCR
qPCR
Tambahkan DNA 5l
2X Taqman Universal PCR Master mix AmpErase
300 nM cruzi 1 dan 2 (primer)
100 nM cruzi 3 (primer)
0.5X Taqman RNAseP Control Reagents Kit
Taruh di suhu 95 c selama 5 menit: denaturasi
Ganti suhu menjadi 94 c selama 15 detik kemudian suhu diturunkan
menjadi 58 c selama 1 menit. Lakukan langkah ini selama 40 kali