APOPTOSIS

Apoptosis
Mientras los filsofos buscan el significado de la vida, los
bilogos estn ms interesados en el significado de la muerte
Valerie Fadok
9876
Apoptosis 2007 2008
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1970 1980 1990 2000
1972 Year
 Apoptosis fisiolgica

Defecto Exceso

Autoinmunidad SIDA
Cncer Alzheimer
 NDICE
1. Fases y caractersticas de la apoptosis

2. Apoptosis y filogenia
2.1. Caenorhabditis elegans
2.2. Drosophila melanogaster
2.3. Apoptosis en vertebrados

3. La maquinaria de la muerte celular en humanos

3.1. Caspasas
3.2. Sustratos de caspasas
3.3. Inhibidores de caspasas
3.4. Vas de induccin de apoptosis
3.4.1. Va extrnseca o de los receptores de muerte
3.4.2. Va intrnseca o mitocondrial
 1) FASES Y

CARACTERSTICAS

DE LA APOPTOSIS
 Fases de la apoptosis
2. Ejecucin
3. Fagocitosis
1. Decisin 4. Degradacin y
Activacin Temprana:
presentacin
de receptores antgenos
Desequilibrio Activacin
entre factores de proteasas y
inductores e endonucleasas
inhibidores Intermedia:
Fragmentacin DNA Deteccin
Tarda: de fosfatidil
Evita liberacin de
Emisin de serina (PS) componentes
cuerpos apoptticos intracelulares
inflamacin TGF b
 Diferencias entre Necrosis
Apoptosis
apoptosis y necrosis. (Oncosis)
Mecanismo Programada genticamente Accidental.
Tamao celular Disminuye aumenta
Membrana. Se mantiene Se rompe
Orgnulos. Se preservan Se desintegran

Temprana tarda
Fragmentacin del DNA fragmentos fragmentos
oligonucleosomales grandes

Fragmentacin celular En cuerpos apoptticos Los contenidos

rodeados por membrana de los orgnulos
.
se liberan
Restos celulares Son reconocidos Inducen
y fagocitados inflamacin local.
CARACTERSTICAS
DE LA APOPTOSIS
 Consecuencias de la apoptosis
La clula se fragmenta en cuerpos apoptticos
con PS en la cara exterior de su membrana
Las clulas fagocticas:
Reconocen PS y fagocitan los cuerpos
apoptticos
Al fagocitarlos producen mediadores anti-
inflamatorios
Consecuencias de la apoptosis
1. Se impide la liberacin de los contenidos
celulares al espacio extracelular

2. Permite muerte celular sin inflamacin

3. La apoptosis permite la muerte celular

sin provocar dao a las clulas
adyacentes
2) APOPTOSIS Y

FILOGENIA
2. Apoptosis y filogenia
2.1. Caenorhabditis elegans
2.2. Drosophila melanogaster
2.3. Vertebrados
 2.1. C. elegans
- Primera evidencia de una base gentica de la apoptosis.
- Desarrollo invariante y lineal.
- Durante la ontogenia de un gusano adulto hermafrodita, 131 cls
de la 1090 cls somticas mueren por apoptosis (959 cls).
- Anlisis gentico que determin genes especficos para la
regulacin de la apoptosis:
- egl-1
- ced-3
- ced-4
- ced-9
 2.1. C. elegans
A) Mutaciones con prdida de funcin en egl-1, ced-3 o ced-4
provocan la supervivencia de las 131 cls: genes
inductores de apoptosis.

B) Gen supresor de apoptosis, ced-9

- Mutantes carentes de ced-9: muerte durante el
desarrollo por muerte masiva de cls
- Ganancia de funcin: supervivencia de la 131 cls.
 2.1. C. elegans
La maquinaria bsica de muerte celular est altamente conservada
en la evolucin de los metazoos

- ced-3 es una cistein proteasa con dominios de interaccin

q forman una estruc. parecida al apoptosoma: caspasa iniciadora

- ced-4 es una protena adaptadora q desencadenara la

activacin de ced-3 si no estuviera unida a ced-9.

- ced-9 es supresora de muerte celular y homloga a Bcl-2.

- egl-1 desplaza a ced-9 de ced-4.

2.1. C. elegans
 2.2. D. melanogaster
Similitudes con C. elegans:
- Caspasas
- Adaptadores
- Supresores

Aparecen:
- p53
- IAPs
- Mitocondria
2.2. D. melanogaster
 2.3. VERTEBRADOS
1. Tanto en C. elegans como en D. melanogaster el desarrollo est
restricto a la vida temprana o a la metamorfosis.

2. En vertebrados la morfognesis, el remodelado y la regeneracin

se produce abundantemente en muchos tejidos a lo largo de toda la
vida.

3. La maquinaria apopttica es homloga a invertebrados aunque

ms elaborada y degenerada.
 2.3. VERTEBRADOS
En mamferos aparece:

1. Familia de receptores de muerte cuyo reconocimiento

desencadena activacin de caspasas y muerte.

2. Daos pro-apoptticos impactan directamente en la

mitocondria y liberan pptidos pro-apoptticos:

- Holocitocromo c
- Smac/DIABLO que antagoniza la actividad anti-
apopttica de XIAP.
2.3. VERTEBRADOS
3) MAQUINARIA DE LA MUERTE

CELULAR EN HUMANOS
3. Maquinaria de la muerte celular en humanos
3.1. Caspasas
3.2. Sustratos de caspasas
3.3. Inhibidores de caspasas
3.4. Vas de induccin de apoptosis
3.4.1. Va extrnseca
3.4.2. Va intrnseca
3.1. CASPASAS
 CASPASAS
- Son cistein proteasas especficas de aspartato (caspase)
- Se expresan como proenzimas (zimgenos)
- Presentan 3 dominios:
1. Prodominio terminal
2. Subunidad larga (p20) que contiene el centro activo
3. C-terminal que es la subunidad pequea (p10)

Asp Prodominio terminal

Subunidad larga (p20)
Asp
Subunidad pequea (p10)
ACTIVACIN DE CASPASAS

Asp

Asp Caspasa
iniciadora

Caspasa
activa
MECANISMOS DE ACTIVACIN
DE CASPASAS

1. Activacin por otra caspasa

2. Activacin inducida por proximidad

3. Asociacin con una subunidad reguladora

 1. ACTIVACIN POR OTRAS
CASPASAS
- Activacin de una caspasa por otra previamente activada:
cascada de caspasas

- Caspasas con prodominio corto: Caspasas efectoras

- Caspasas 3, -6, -7.

- Amplificacin e integracin de seales

1. ACTIVACIN POR OTRAS
CASPASAS
2. ACTIVACIN INDUCIDA POR
PROXIMIDAD
- Activacin de una caspasa por proximidad: Trimerizacin de
receptores que reclutan caspasas y se procesan mutuamente.

- Caspasas con prodominio largo: Caspasas iniciadoras.

- Caspasa -8.

- Implicada en va extrnseca (CD95).

2. ACTIVACIN INDUCIDA POR
PROXIMIDAD
 3. ASOCIACIN CON UNA
SUBUNIDAD REGULADORA
- Activacin de una caspasa a travs de un cofactor.

- No se activa por proteolisis sino por cambio conformacional.

- Caspasas con prodominio largo: Caspasas iniciadoras.

- Caspasa -9. Cofactor: Apaf-1. Citocromo c.

- Implicada en va intrnseca o mitocondrial.

 3. ASOCIACIN CON UNA
SUBUNIDAD REGULADORA

Apoptosoma
 CASPASAS
- Las caspasas efectoras se activan proteolticamente por otras
caspasas

- Las caspasas iniciadoras son activadas mediante interacciones

reguladas protena-protena.
3.2. SUSTRATOS DE

CASPASAS
 SUSTRATOS DE CASPASAS
- La caspasa-3 es la ltima responsable de los efectos apoptticos
junto con las caspasas -6 y 7.

- Estas 3 caspasas ejecutoras causan el fenotipo apopttico:

1) Fragmentacin de DNA
2) Alteraciones de la membrana plasmtica
3) Translocacin PS
 1) FRAGMENTACIN DEL DNA
- La caspasa-3 acta sobre el complejo DNasa activado por caspasa
(CAD) y sobre su inhibidor, iCAD.

iCAD CAD Caspasa-3

 2) ALTERACIONES DE LA
MEMBRANA PLASMTICA
- La caspasa-3 acta sobre:

- La gelsolina
- La fodrina

- Se disocia de membrana plasmtica del citoesqueleto

- Formacin de vesculas
- Plegamiento de la membrana plasmtica
3.3. INHIBIDORES

DE CASPASAS
 INHIBIDORES DE CASPASAS
- Protenas inhibidoras de apoptosis (IAP).

- Se identificaron en baculovirus. Hay al menos 5 en mamferos:

- X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP)

- c-IAP1
- c-IAP2
- IAP neuronal
- Survivina

- Todos inhiben caspasa 3 y 7 activa y procaspasa-9.

 INHIBIDORES DE CASPASAS

Frenan la apoptosis por inhibicin, unin y degradacin:

1. Dominio repetido IAP de baculovirus (BIR) por el q el IAP se

une e inhibe a las caspasas. Entre 1-4 dominios BIR.

2. Dominio RING q acta como una ligasa de ubiquitina:

degradacin del IAP y de cualquier caspasa unida a l.

3. Dominio CARD: regulacin directa o indirecta del

procesamiento de las caspasas. c-IAP1 y c-IAP2
INHIBIDORES DE CASPASAS

RING BIR3 BIR2 BIR1 XIAP

c-IAP1
CARD RING BIR3 BIR2 BIR1
c-IAP2
3.4) VAS DE INDUCCIN

DE APOPTOSIS
3.4) VAS DE INDUCCIN DE APOPTOSIS

Existen dos vas de induccin de apoptosis:

3.4.1. Va extrnseca o va de los receptores de muerte

3.4.2. Va intrnseca o va de la mitocondria

 3.4.1. VA EXTRNSECA
- A travs de receptores superficiales: receptores de muerte.
Receptores de la familia de TNFR: CD95, TNFR1, TNFR2. Tb
DR3, TRAIL...

- Requiere trimerizacin para la transduccin de la seal.

- Al receptor activado se le asocia un complejo de protenas:

dominio de sealizacin inductor de muerte (DISC, death-
induced signalling domain)
 DISC
1. El adaptador FADD se une a travs de su dominio de muerte
(DD) al dominio de muerte del receptor activado

2. FADD contiene un dominio efector de muerte (DED) que por

homologa atrae procaspasa-8 o FLICE que se activa.

3. Inhibicin debida a protenas con dos dominios DED: protena

inhibidora de FLICE (FLIP, FLICE-inhibitory protein).
 CD95L

CD95

DD DISC
Procaspasa-8
DED
FADD

c-FLIP Caspasa-8

Bid Caspasa-3
 3.4.1. VA EXTRNSECA
FasL Fas

MORT/FAAD

caspasa 8 Bid Va mitocondrial

caspasa-7 caspasa-3
caspasa-6

Deshidratacin
citoplsmica
Externalizacin Formacin Fragmentacin
de PS de cuerpos Hidrlisis Fragmentacin
DNA nuclear
apoptticos
Condensacin de NuMA
Cambios apoptticos cromatina Cambios apoptticos
extranucleares nucleares
3.4.1. VA EXTRNSECA
 3.4.2. VA INTRNSECA
- La regulacin de la apoptosis en esta va es debida a la familia de
Bcl-2.

- Bcl-2 fue descubierto como un proto-oncogn en el linfoma

folicular de clulas B y es homlogo a ced-9.

- Existen 19 miembros que se dividen en tres grupos.

- Cada miembro posee al menos uno de los cuatro motivos

conservados denominados dominios de homologa con Bcl-2
(BH): BH1-BH4.
 FAMILIA DE Bcl-2
1. Grupo I:
- Actividad anti-apopttica
- Bcl-2, Bcl-XL, Bcl-w...
- 4 motivos BH: BH1-BH4
- Cola hidrofbica en el C-terminal
2. Grupo II:
- Actividad pro-apopttica
- Bax, Bak, Bok...
- Carecen de BH4
3. Grupo III:
- Actividad pro-apopttica
- Bid, Bik, Bad, Bim...
- Slo poseen el dominio BH3
- Pueden o no tener regin transmembrana
 CONTROL DE LA APOPTOSIS
POR LA FAMILIA DE Bcl-2
- Los miembros de la familia de Bcl-2 intentan bloquear el
siguiente movimiento de otro.

- Algunos homodimerizan

- Se forman heterodmeros de miembros pro y anti-apoptticos

neutralizndose
Gradiente
pro-apoptticos
Gradiente
Anti-apoptticos
MITOCONDRIA: CENTRO DE
LA MUERTE CELULAR
La mitocondria no es slo la central productora de energa de la
clula, tambin es un arsenal pues secuestra un potente
combinado de protenas pro-apoptticas:

1. Citocromo c: Componente junto con Apaf-1 y caspasa

9del apoptosoma

2. Smac/DIABLO (second mitochondria-derived activator

of caspases/direct IAP-binding protein with low pI): es
una protena que inhibe IAPs secuestrndolas.
 Dao genotxico

Bcl-2 p53

Apaf-1 Bax

citocromo c

Procaspasa-9
Procaspasa-3 Smac/DIABLO

IAPs

caspasa-3
Apoptosoma
INTEGRACIN DE LAS DOS VAS
 APOPTOSIS
- Caractersticas definidas

- Regulada genticamente

- Conservada en la evolucin

- Muy regulada: patologas

- Inducida por seales externas e internas