Praktikum Biokimia

Endokrin dan Metabolik

 Glukosa
Glukosa adalah monosakarida yang mengandung enam
atom karbon
 Glukosa Darah
sewaktu

Penetapan kadar Glukosa Darah

Glukosa Darah Puasa

Tes Toleransi
Glukosa Oral
 Percobaan
Glukosa Darah
(metode
Tujuan Enzimatik GOD-
Memahami metode pelaksanaan PAP)
pemeriksaan Tes Glukosa Darah
Puasa dan Tes Toleransi Glukosa dan
interpretasinya

Dasar Reaksi
Glukosa + O2 + H2O GOD Asam
Glukoronat + H2O2

H2O2 + 4-aminoantipyrin + 2,4

diklorofenol POD antipyrilquinonimin
 Bahan dan Alat
Reagen :
Standar glukosa 100 mg/dl
Reagen warna
Alat-alat
 Cara kerja
Siapkan 3 tabung
Tambahkan ke Sampel Standar Blanko
tabung
Serum atau plasma 20 l - -
Larutan standar - 20 l -
Reagensia warna 2 ml 2 ml 2 ml

Inkubasi 15 menit temp. kamar dalam waktu 30

menit
Ukur absorban
 Perhitungan :
Kadar glukosa = Absorban sampel x 100mg/dl
Absorban standar
Nilai normal :

Normoglikemia GDPT atau TGT Diabetes

GDP < 100 mg/dl GDP 100 mg/dl dan <126 GDP 126 mg/dl
mg/dl (GDPT)
2 jam PP < 140 mg 2 jam PP 140 mg/dl dan 2 jam PP 200 mg/dl
<200 mg/dl (TGT) symptom diabetes dan GDS
200 mg/dl
 Lemak

Sifat dan ciri

Struktur molekul CH2-CH2-CH2
Hidrophob
Larut dalam larutan apolar
 Percobaan kolesterol (metode Enzimatik
CHOD-PAP)

Dasar: Kolesterol ditemukan

setelah hidrolisa enzimatik
dan oksidasi. Zat warna
quinoneimin terbentuk dari
hidrogen peroksida dan 4-
aminoantipyrin dengan
adanya fenol dan peroksida
 Reaksi
Kolesterol ester + H2O kolestrolesterase Kolesterol + asam
lemak
Kolesterol ester + H2 O + O2kolestroksidase Kolesterol-3-one +
H2 O
H2 O2 + 4-aminoantipyrin + fenol POD Turunan zat warna
quinoneimin + 4H2 O2
 Reagen
Reagen warna enzimatik kolesterol
Standar kolesterol 200 mg/dl

Alat
 Cara kerja
Siapkan 3 tabung, beri label
Tambah kedalam tabung sampel standar Blanko
Serum/plasma 20l - -
Larutan standar - 20l -
Reagen warna 2 ml 2 ml 2 ml

Biarkan selama 5 menit, suhu 37C atau 10 menit

suhu ruang
Ukur absorban panjang gelombang 510 nm
 Perhitungan
Kadar total kolesterol = Absorban sampel x 200mg/dl
Absorban standar
Nilai normal
<220 mg/dl, dicurigai 220-260 mg/dl
 Dari gliserol dan
tiga asam lemak

Trigliserida Lemak utama

Dicerna dalam
lumen usus
 Percobaan
trigliserida
(Metode
enzimatik GPO-
Dasar PAP)
Zat warna kuinoneimin terbentuk
dari hidrogen peroksida, 4-aminoantipyrin
dan 4-klorofenol dengan katalisator
peroksidase.

Reaksi
Trigliserida + H2 O LP(lipase) Gliserol + asam lemak

Gliserol + ATP Gliserol kinase Gliserol-3-fosfat + ADP

Gliserol-3-fosfat + O2 GPO Dihidroxyacetonephosphat

+ H2 O2

2 H2 O2 + 4-aminoantipyrin + 4-klorofenol POD

quioneimin + HCL + 4H2 O2

 Reagens
Reagens warna enzimatik kolesterol
Standar gliserida 200 mg/dl
Alat
 Cara kerja
Siapkan 3 tabung, beri label
Masukkan dalam tabung sample standar blanko
Serum/plasma 20 l - -
Larutan standar - 20 l -

Reagen warna 2 ml 2 ml 2 ml

Biarkan selama 20 menit pada temp kamar. Dalam

waktu 30 menit baca absorban dengan panjang
gelombang 510 nm
 Perhitungan
Kadar total trigliserida= Absorban sampel x 200mg/dl
Absorban standar
Nilai normal
L: 40-160 mg/dl
P: 35-135 mg/dl
 Percobaan HDL-
Kolesterol
(Metode
Dasar
Trigliserida ditentukan setelah fosfotungstat)
hidrolisa enzimatik dengan lipase. Zat
warna quinoneimin terbentuk dari
hidrogen peroksida, 4-aminoantipyrin dan
4-klorofenol dengan katalisator
peroksidase

Reaksi
Trigliserida + H2 O LP(lipase) Gliserol + Asam lemak

Gliserol + ATP Gliserol kinase Gliserol-3-fosfat + ADP

Gliserol-3-fosfat + O2 GPO Dihidroxyacetonephosphat + H2 O2

2H2 O2 + 4-aminoantipyrin + 4-diklorofenol POD quiononeimin

+ HCl + 4 H2 O2
 Reagens
Reagen warna enzimatik kolesterol
Standar Trigliserida 200 mg/dl
Alat
 Cara kerja
Siapkan tabung

Masukkan dalam tabung Sampel

Serum/Plasma 200 l
Reagensia pengendap 0,5 ml

Biarkan 15 menit temp. 20-25C

Sentrifuge 10 menit kecepatan 4000 rpm atau 2 menit kecepatan
12.000 rpm
Siapkan 3 tabung, beri label

Masukkan dlm tabung sampel Standar Blanko

Supernatant dari sampel 20l - -

Larutan standar - 20l -

Reagen warna 2 ml 2 ml 2 ml

Biarkan 15 menit, dlm waktu 45 menit baca absorban dengan panjang

gel. 510
 Perhitungan
Absorban sampel x 100mg/dl
Absorban standar
Nilai normal
HDL: L: 45-65 mg/dl
P: 35-55 mg/dl
LDL: T kolesterol (HDL-kolesterol) (trigliserida/5)
Rasio: <5
 Protein
Mengandung karbon, hidrogen, oksigen,
nitrogen dan sulfur
 Percobaan total
Dasar protein (Metode
Protein dengan ion tembaga dalam biuret)
larutan alkalis menghasilkan senyawa
kompleks yang berwarna ungu.
Reagen dan alat
Reagen biuret
Larutan standar (6 gr/dl)
 Cara kerja:
Siapkan 3 tabung, beri label
Masukkan ke dalam tabung sample standar Blanko
Reagen warna 3 ml 3 ml 3 ml
Plasma/serum 10 l - -
Larutan standar - 10 l -

Biarkan selama 30 menit temp. kamar, ukur

absorban dengan panjang gelombang 545
 Perhitungan
Kadar total protein = Absorban sampel x 6 g/dl
Absorban standar
Nilai normal
6,6-8,7 gr/dl
 Rantai polipeptida
tunggal
Mengangkut
Albumin
molekul kecil
Fungsi
Memberikan
tekanan osmotik
 Percobaan
albumin (Metode
Dasar Bromcresol
Albumin dengan Bromcresol Green)
green pada pH 4,3 membentuk
kompleks warna.
Reagen dan alat
Reagens warna buffer pH 4,3
Bromcresol Green 0,9 mmol/l
standar albumin 5 gr/dl
 Cara kerja
Siapkan 3 tabung, beri label
Masukkan dalam tabung Sampel Standar Blanko
Reagen warna 3 ml 3 ml 3 ml
Sampel 10l - -
Larutan standar - 10l -

Kocok, inkubasi pada temp. kamar 10 menit. Ukur

absorban dengan panjang gelombang 620 nm
 Perhitungan
Kadar albumin = Absorban sampel x 5g/dl
Absorban standar
Nilai normal
Albumin = 3,5 5,5 gr/dl
Globulin = 1,5 -3,5 gr/dl
Rasio= 1,2 : 1
THANK YOU!