Instituto Politcnico Nacional.

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas.

Qumico Farmacutico Industrial.
Departamento de Inmunologa.
Inmunologa General.

Seminario prctica 4: Inmunizacin y sangrado de

animales
Introduccin.
La Inmunizacin es el proceso, natural o artificial, mediante el cual un individuo
competente desarrolla una respuesta inmune al entrar en contacto con un antgeno.
 Paso de Anticuerpos. Ej:
Pasiva
Placenta o Leche

Natural

Activa Infecciones

Inmunizacin
Seroterapia.
Administracin de
Pasiva
suero proveniente de
un donante inmune
Artificial

Activa Vacunas
Inmungeno
Sustancia capaz de inducir o estimular una respuesta inmunolgica

Caractersticas:
Ser extraa
Peso molecular elevado
Complejidad qumica
Estructura
Poderse degradar a pptidos que interaccionen con las protenas del CMH
Cuando un inmungeno entra en el
cuerpo .

El primer contacto con un inmungeno provoca una respuesta inmune primaria, tras
una serie de interacciones entre clulas T, CPA y clulas B, con la consecuente
formacin de anticuerpos

Cuando un organismo se expone a un antgeno desconocido, el sistema inmune

puede requerir mucho tiempo para producir cantidades apreciables de anticuerpos.
Al final de la infeccin la concentracin alcanzada de anticuerpos declina.
La sntesis de anticuerpos (Ac) est dirigida contra molculas especficas que el
organismo no reconoce como propias (determinantes antignicos), para que esta
sntesis ocurra, primero debe existir un contacto entre las clulas encargadas de la
respuesta inmune y el determinante antignico, contacto que es mediado por las
clulas involucradas en la respuesta humoral y celular.
Siguiente contacto con el mismo
inmungeno.
Induce una respuesta que ocurre mucho ms rpida, mas amplia y mas eficaz porque
la concentracin alcanzada, es apreciablemente mayor, en este caso se habla de
respuesta secundaria que difiere de la primaria como si el organismo recordara que
ya haba estado expuesto a ese inmungeno antes.
La respuesta secundaria y las subsecuentes explotan el aumento del nmero de
linfocitos especficos para el inmungeno producidos durante la respuesta primaria.

Esta respuesta tambin se llama respuesta de memoria y los linfocitos que

participan en ella se denominan clulas de memoria.
Curvas de una repuesta primaria y
secundaria
IgM 6% de la poblacin presente en sangre.
Es la inmunoglobulina ms grande 950000 Daltons
La capacidad de la IgM para formar complejos es la que le da
el poder de opsonizar (marcar un patgeno para su ingestin y
destruccin por un fagocito) determinados antgenos,
provocando la lisis de bacterias, envueltas vricas y otros
agentes patgenos.
Es el primer tipo de inmunoglobulina sintetizada en respuesta
a una infeccin
Se ubica en la superficie de las clulas B; constituye el primer
anticuerpo que se genera en la respuesta inmunolgica
(respuesta primaria aguda) y es el primero que se forma en el
neonato.
Es un excelente activador de la citolisis dependiente del
complemento, por lo que es una defensa poderosa de primera
lnea contra las bacterias.
IgG Predominante en los fluidos internos del cuerpo, como son la
sangre, el lquido cefalorraqudeo y el lquido peritoneal
(lquido presente en la cavidad abdominal).
Esta protena especializada es sintetizada por el organismo en
respuesta a la invasin de bacterias, hongos y virus.
Es la inmunoglobulina ms abundante del suero, con una
concentracin de 600-1800 mg por 100 mL
La IgG constituye el 80 % de las inmunoglobulinas totales. Su
tiempo de vida media es de aproximadamente 25 das.
La IgG es la nica clase de inmunoglobulinas que atraviesa la
placenta, transmitiendo la inmunidad de la madre al feto de
manera natural y pasiva
la inmunoglobulina ms pequea, con un peso molecular de
150000 Daltons, as puede pasar fcilmente del sistema
circulatorio del cuerpo a los tejidos.
La sntesis de IgG se controla principalmente por el estmulo
de los antgenos.
Factores para que un antgeno logre una
respuesta inmune
Debe favorecer la cooperacin entre las clulas T y B
Depende de caractersticas genticas: edad y sexo
La dosis
Estado fsico del antgeno (particulado o soluble), ya que designan la ruta de
inmunizacin
Rutas o Vas de Inmunizacin

Particulados En solucin

Va intravenosa Va IM, IP,

SC, ID Se acompaan de
Adyuvante
Adyuvantes inmunolgicos.
Los adyuvantes son sustancias o preparados que incorporados al antgeno o
inyectados simultneamente con l que hacen ms efectiva la respuesta inmune
Como agentes inmunopotenciadores, se les atribuyen 2 funciones fundamentales:
La estimulacin de la resistencia no especfica del husped contra las enfermedades
infecciosas y el cncer.
La potenciacin de la inmunogenicidad de las vacunas comerciales y de la respuesta
de los animales de laboratorio durante la inmunizacin experimental con vistas a la
produccin de antisueros.
 El aumento de la inmunogenicidad puede estar mediado por uno o varios de los
siguientes procesos:
I. Incremento de la produccin de anticuerpos especficos frente a un antgeno
vacunal.
II. Aumento de la afinidad de los anticuerpos inducidos con una potenciacin de su
funcin neutralizante, germicida, opsonizante etc.
III. Incremento de la magnitud y/o efectividad de la respuesta mediada por clulas T.
IV. Generacin de una respuesta humoral y/o celular de mayor duracin.
V. Generacin de una respuesta incrementada de memoria inmunolgica.
Cmo actan?

Retencin y
liberacin del Efecto directo en
antgeno macrfagos y
linfocitos
Adyuvante de uso en animales de
experimentacin
INCOMPLETO DE FREUD
Mezcla de aceite mineral (Drakeol, Bayol o Nujol) con un
detergente (Falba, Arlacel, Aquafor) en diferentes
proporciones, por ejemplo, Arlacer-Drakeol (1:9);
Arlacel-Bayol (3:17).
COMPLETO DE FREUD
Contiene adems del aceite y el detergente, una
micobacteria (M. tuberculosis, M. bovis) cuya cantidad
es variable (de 1 a 5 mg de la bacteria, peso seco, por
cada mL de la mezcla incompleta de Freund).

En los humanos no se recomienda el uso de este tipo de adyuvante Freund completo e incompleto ya que
frecuentemente su aplicacin conduce al desarrollo de granulomas severos.
Objetivos.
Identificar las tcnicas de inmunizacin en los animales de uso ms comn, en el
laboratorio, practicando algunos de los esquemas de inmunizacin ya establecidos.
Fundamento
Los animales de laboratorio utilizados (conejos) deben ser sangrados antes del
protocolo de inmunizacin para contar con el suero testigo. El cual servir para
detectar la produccin de anticuerpos al compararlo con el suero extrado despus de
haber concluido el esquema de inmunizacin.
Para obtener suero inmune experimentalmente se deben tomar en consideracin las
caractersticas del antgeno, cuando se inoculan antgenos articulados se obtienen
sueros aglutinantes, y cuando se inoculan antgenos solubles se obtienen sueros
precipitantes.
 Metodologa.
Inmunizacin y sangrado de animales
Seguir el protocolo de
inmunizacin de acuerdo al
tiempo estimado para realizar la
prctica.
Obtener el suero de conejo para la
prctica de hipersensibilidad.
Dirigirse al bioterio por un
conejo de acuerdo a las
especifcaciones de la hoja de
control.
Administrar de manera ID en la
zona rasurada el/los antgeno(s)
en 4 puntos distintos.
Rasurar y limpiar el rea a tratar.
Localizar y limpiar la zonda de
ubicacin de la arteria de
donde se realizar el sangrado.
Obtener la cantidad necesaria
de sangre.
Protocolos de inmunizacin.
Protocolo de inmunizacin para antgenos solubles.
Inyecin No. Tiempo (da) Fecha Dosis y Va
5mg de Ag disuelto en
1.0mL de SS, emulsificados
1 0 27/febrero/2017 con 1.0mL de adyuvante
de Freund.
Va ID en sitios mltiples.
Igual que el anterior
2 15 13/marzo/2017 usando adyuvante
incompleto de Freund.
3 30 02/mayo/2017 0.25mg de Ag en SS Va IV.
4 31 03/mayo2017 0.50mg de Ag en SS Va IV.
5 32 04/mayo/2017 1.0mg de Ag en SS Va IV.
Sangrar 39 08/mayo/2017
 Protocolo de inmunizacin para sueros.
Inyecin No. Tiempo (da) Fecha Dosis y Va
1mL de Ag dil. 1:10 en SS y
emulsificado con 1.0mL de
1 0 27/febrero/2017 adyuvante complto de
Freund. Va ID en sitios
mltiples.
Igual que el anterior
2 15 13/marzo/2017 usando adyuvante
incompleto de Freund.
3 30 02/mayo/2017 0.25mg de Ag en SS Va IV.
4 31 03/mayo2017 0.50mg de Ag en SS Va IV.
5 32 04/mayo/2017 1.0mg de Ag en SS Va IV.
Sangrar 39 08/mayo/2017
Resultados
Se obtendrn conejos hiperimunes que sern utilizados en la practica de
hipersensibilidad.
Se obtendr suero de los conejos inmunizados para emplearlos en practicas
posteriores
DISCUSION
El antgeno OVA y el suero humano tienen la caracterstica de potenciar la respuesta inmune con el uso
de adyuvante. Este adyuvante fue el completo de Freud que contiene, aceite mineral, detergente y
micobacteria. La micobacteria tendr el efecto de inducir una respuesta inmune que ser la
inflamacin. Sin el detergente las micobacterias difundirn rpidamente y no generan la respuesta
inmune deseada, por lo que el detergente tiene la funcin de formar micelas, que atrapan al antgeno
que al administrar liberara las micobacterias de forma lenta (pausada) y sostenida. Pudiendo observar
la respuesta inmune contra el antgeno que es a micobacteria, IgM se presenta en los primeros das de
la inmunizacin.
Posteriormente, se administra un adyuvante incompleto, esto debe ser as porque si se administra un
adyuvante completo la respuesta del organismo sera un choque anafilctico, debido a que las
inmunoglobinas IgG un efecto inflamatorio, pero este sera mayor, por lo que no se administra la
micobacteria, solo se hace evidente la respuesta inmune secundaria

Se finaliza administrando solucin salina, para obtener suero inmunizado, que es necesario para
realizar pruebas de hipersensibilidad.
Conclusin
Se inmunizo conejo 167 con Suero Humano Total con protocolo de inmunizacin para
sueros totales.

Se inmunizo conejo 100 con antgeno OVA de acuerdo al protocolo de inmunizacin

para antgenos solubles
Bibliografa.
https://farmapuntes.wikispaces.com/file/view/tema8.0-t.pdf
http://www.biblioteca.upibi.ipn.mx/Archivos/Material%20Didactico/Manual%20Inmu
nolog%C3%ADa%20Aplicada.pdf
http://pendientedemigracion.ucm.es/info/saniani/troncales/inmunologia/documento
stemas/TEMA%205.pdf