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Tema-11 INTRODUCCIN A LA CINTICA ENZIMTICA

1. Inicios de la cintica enzimtica


- Introduccin del concepto de complejo enzima-sustrato
2. Cintica enzimtica de reacciones monosustrato
2.1 Aproximacin del equilibrio rpido: Ecuacin de Henri-
Michaelis-Menten.
- Deduccin de la Ecuacin de Michaelis-Menten
2.2 Aproximacin del estado estacionario: Tratamiento de
Briggs-Haldane.
2.3 Ecuacin de Michaelis-Menten; Anlisis
Parmetros cinticos: Km, Vmax y kcat
Medida de la eficiencia y la especificidad de una enzima:
kcat/Km.
Tiempo de especificidad
2.4.Actividad enzimtica unidades
2.5 Poder Cataltico
1.Inicios de la cintica enzimtica
* El estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas
comienza a finales del siglo XIX.

- No se dispona de ninguna enzima en forma pura.


- Los mtodos de ensayo eran rudimentarios/primitivos.
- No se usaban tampones para controlar el pH (an no se haba
introducido el concepto de pH).

Segua el curso de la reaccin durante un periodo de tiempo, ms o


menos largo, en lugar de medir velocidades iniciales a diferentes
concentraciones de sustrato, como hacemos hoy en da, que proporciona
resultados ms fcilmente interpretables.
* La mayor parte de los primeros estudios, sobre cintica enzimtica, se
realizaron con la enzima invertasa, que cataliza la reaccin:
Sacarosa + Agua Glucosa + Fructosa
OSullivan y Tompson (1890) estudiaron esta reaccin e hicieron una
serie de importantes observaciones:
La reaccin era dependiente de la acidez del medio de reaccin.
Supuesto que la acidez era la apropiada, la velocidad de la
reaccin era proporcional a la cantidad de enzima.
La velocidad disminua a medida que el sustrato se consuma, y
pareca ser proporcional a la concentracin de sacarosa, aunque
haba ciertas desviaciones respecto de la curva esperada.
A bajas temperaturas la velocidad de reaccin se duplicaba por
cada incremento de 10C. Sin embargo, a diferencia de los
catalizadores qumicos, la invertasa presentaba una temperatura
optima, por encima de la cual la velocidad caa rpidamente a
cero.
La invertasa era un verdadero catalizador ya que no se
destrua ni alteraba en el curso de la reaccin, excepto a altas
temperaturas, y una muestra era totalmente estable, incluso tras
catalizar la hidrlisis de una cantidad de sacarosa 100.000 veces
mayor que su peso.
Finalmente, su estabilidad trmica era mucho mayor en
presencia de sustrato que en ausencia de ste.
Invertase when in the presence of cane sugar [i.e.
sucrose] will stand a temperature fully 25C greater
that in its absence. This is a very striking fact, and, as
far we can see, there is only one explanation of it,
namely the invertase enters into combination with the
sugar
* A una conclusin parecida haba llegado previamente, en 1880, Wurtz
estudiando la hidrlisis de la fibrina por la papaina.
Introduccin del concepto de complejo enzima-sustrato
* La idea/concepto de complejo enzima-sustrato, en el campo de la
cintica enzimtica, fue introducida en 1892 por Brown.
Brown, y col, encontraron, que la velocidad de una reaccin enzimtica
se desviaba del comportamiento cintico de segundo orden.
- Centrndonos en los trabajos de Brown, ste primeramente observ
que la hidrlisis de la sacarosa por las levaduras pareca ser
independiente de la concentracin de sacarosa.
- Las discrepancias entre los resultados de OSullivan y los de Brown,
no se tomaron en principio muy en serio ya que los procesos catalticos
in vivo se consideraban de naturaleza diferentes a los que tenan lugar
con enzimas aisladas, o procesos in vitro.
- Sin embargo, el descubrimiento de los Buchner, en 1897, demostrando
que un extracto de levaduras, libre de clulas vivas, poda realizar
tambin la fermentacin alcohlica, estimulo a Brown, en 1902, a
reexaminar sus resultados.
* Tras confirmar que sus resultados eran correctos, y demostrar que
resultados totalmente anlogos se obtenan tambin purificando la
invertasa, propuso un mecanismo basado en la formacin de un
complejo enzima-sustrato que impona un lmite a la velocidad de
reaccin en funcin de la cantidad o concentracin posible de este
complejo.

E + S (ES) P + E
(Modelo de Brown)

E + S E S P+
E

(ES)
* Supuesta la existencia de este complejo, (modelo de Brown), la
mxima velocidad de reaccin, de acuerdo con la ley de accin de
masas se alcanzara cuando la concentracin de sustrato fuera tal
que toda la enzima estuviera en forma de complejo-ES. A
concentraciones bajas de sustrato, la velocidad de reaccin estar
gobernada por la concentracin de complejo-ES.

Vmax = k[ES]
Vmax

[S]
Victor Henri : Lois gnrales de lction des diastases
Tesis doctoral 1903
-Henry propone, en su lugar, un mecanismo, conceptualmente similar al de Brown pero
formulado, qumica y matemticamente, de una manera ms precisa.

* A primeros del siglo XX, 1902-1903, Henri critica el modelo de


Brown, ya que ste asuma para el complejo-ES una vida fija, una
duracin permanente.
- Segn Henri:
- Existen dos complejos, un complejo entre la enzima y el
sustrato, complejo-ES y un complejo entre la enzima y el
producto, el complejo-EP.
- Entre la enzima libre, E, y los complejos ES y EP existe un
equilibrio qumico.

E + S =ES =EP E + P
(Modelo de Henri)

Problema: No control de la acidez del medio del pH.


Michaelis-Menten

Michaelis L and Menten M L 1913


Kinetik der Invertinwirkung;
Biochem. Z. 49 333369

* Los primeros experimentos de cinetica enzimtica, realizados bajo condiciones


controladas de pH, lo realizaron Michaelis y Menten en 1913, (una vez que en 1909
Sorensen introdujera el concepto de pH).

Realizaron sus estudios utilizando el concepto de velocidades


iniciales de reaccin y diferentes concentraciones de
sustrato. Con lo que eliminaban factores:

- reversibilidad,
- inhibicin por producto y
- desactivacin de la enzima.
* A pesar de este refinamiento los resultados de Michaelis y Menten
coincidan con los obtenidos por Henri, y propusieron un mecanismo,
esencialmente igual al propuesto por l:

E + S = ES E + P
(Mecanismo de Michaelis Menten)

* Este modelo es el que, bsicamente, se ha utilizado para el desarrollo


de la Enzimologa clsica.
2. CINTICA ENZIMTICA DE REACCIONES
MONOSUSTRATO
* Las reacciones enzimticas ms sencillas son las denominadas
reacciones monosustrato, es decir aquellas que implican la accin de la
enzima (E) sobre un unico sustrato (S).

E + S = ES E + P
Ejemplos: - isomerasa
- un gran nmero de liasas e
- hidrolasas (ya que la concentracin de agua la podemos
considerar cte.)

* La ecuacin matemtica que describe el comportamiento cintico de una


reaccin de este tipo puede deducirse, inicialmente, de dos maneras o mediante
dos aproximaciones:

Aproximacin del equilibrio rpido (Michaelis-Menten)


Aproximacin del estado estacionario (Briggs-Haldane).
2.1 APROXIMACIN DEL EQUILIBRIO RPIDO:
Ecuacin de Henri-Michaelis-Menten

k1 k2
E + S = ES ---- E + P
k-1
* Al igual que Henri, Michaelis y Menten asumieron que la primera reaccin, el
equilibrio entre la E el S y el complejo-ES, es una etapa mucho ms rpida que la
segunda, la etapa que conduce a la produccin de producto, P, y a la regeneracin de la
enzima, es decir, (k2 << k-1).

Ks
E S
ES
La constante de equilibrio Ks:
Deduccin de la Ecuacin de Michaelis-Menten
- En la aproximacin del equilibrio rpido asumimos que el equilibrio:
k1 -> k2
E + S = ES P
<- k-1

- Prcticamente no se ve afectado por la reaccin de transformacin del


complejo ES en P.
- Esta asuncin ser tanto ms cierta cuanto menor sea el valor de k2
respecto de k-1.
* En este caso, la constante de equilibrio, Ks, como ya hemos indicado,
la podemos definir como:

E S
[E]: es la concentracin de enzima libre Ks
Donde:

[S]: es la concentracin de sustrato libre



ES
De la ec. anterior tenemos que:
ES E S
Ks
- Las concentraciones instantneas de enzima libre y sustrato libre, E y S,
respectivamente, no las podemos medir experimentalmente.

- Sin embargo, en condiciones de velocidades iniciales, donde [P] 0, de


acuerdo con la estequiometra de la reaccin se cumple:
[Eo] = [E] + [ES] [E] = [Eo] - [ES]
[So] = [S] + [ES]
- De acuerdo con la primera de estas dos ecuaciones, la [ES] nunca podr
ser mayor que la [Eo].

- Si trabajamos, bajo condiciones catalticas, es decir,


[So] >> [Eo],
para [So] tambin se cumplir que,
[So] >> [ES],
y por tanto, bajo estas condiciones,
[So] [S]
velocidades iniciales y bajo condiciones catalticas, la expresin:

ES E S (Eo ES ) S

Ks Ks
[ES] Ks = [Eo] [S] [ES] [S]
ES EoS
Ks S
[ES] (Ks + [S]) = [Eo] [S]

dividiendo el segundo trmino por [S] tendremos:


[ES] = [Eo]/{(Ks/[S]) + 1}
(Nota: donde [S] = [So]).
* La velocidad de la reaccin vendr dada por la etapa ms lenta:
- La segunda etapa: ES P + E, que es una reaccin de primer orden,
con una constante de velocidad, k2 ,o kcat con lo que:

v = kcat [ES] = kcat [Eo]/{ (Ks/[S]) + 1}

[S]
v = kcat [Eo] -------------
Ks + [S]
Ecuacin de Michaelis-Menten, ecuacin que indica el comportamiento de la
velocidad con respeco a la concentracin de substrato

* Debido a su importancia, posteriormente esta misma aproximacin o abordaje ha sido aplicada con xito a
numerosas enzimas, por lo que se les considera los creadores de la moderna Enzimologa, y a la ec. obtenida
se le da el nombre de Ecuacin de Michaelis-Menten,.
Condiciones de la Ecuacin de Michaelis-Menten

Formacin de un rpido equilibrio entre la enzima libre y el sustrato


inicial
La concentracin de substrato inicial es muy superior a la enzima
Complejo [ES] es despreciable como sumando frente a la [So]
La [S] que aparece en todas las ecuaciones es la inicial [So].
Las velocidades son siempre iniciales
Velocidad inicial es proporcional a la constante de catlisis y a la [ES]
Paso limitante de la reaccin total es el paso de ES P
Valor de la constante de catlisis kcat <<<k-1
2.2. APROXIMACIN DEL ESTADO ESTACIONARIO:
Tratamiento de Briggs-Haldane

* La formulacin o tratamiento de Michaelis y Menten se basa en


suponer la existencia de un equilibrio rpido para la primera etapa y en
suponer que la constante de velocidad para la segunda etapa es
despreciable frente a la constante de la reaccin inversa del equilibrio.

*Hay sistemas enzimticos estas condiciones no se cumplan


Kcat <<<k2

En 1925, Briggs y Haldane propusieron un nuevo modelo, ms general,


que inclua los dos anteriores:

No requiere la restriccin de rpido equilibrio


Condicin es la del estado estacionario
k1 k2
E + S == ES --- E + P
k-1
(Modelo de Briggs y Haldane)

- En este modelo tambin se cumple que:


[E] = [Eo] [ES]
y
d[ES]/dt = k1[E][S] k-1[ES] k2[ES]
* A diferencia de Van Slyke y Cullen, Briggs y Haldane proponen la
existencia de un estado estacionario en el que la concentracin de
cualquiera de las formas en que se encuentre la enzima, prcticamente es
constante, y por tanto:

d[E]/dt = 0 y d[ES]/dt = 0
Detengmonos un poco en el anlisis del trmino: estado estacionario
* En espaol traducimos los trminos ingleses: stationary state y
steady state, indistintamente, por estado estacionario.

- Stationary es una palabra de raz latina (stare --> estar de pie o estar
inmovil) y habra que traducirla al espaol como estado esttico o
estado fijo.
- Steady es una palabra de raz germnica y aade el matiz de flujo
continuo, duradero o estable, y si la podramos traducir por estado
estacionario, con el mismo sentido que lo utilizan los ingleses.

* La condicin, pues, de estado estacionario es aquella que nos dice que


la variacin de la concentracin de cualquier especie qumica en la que
pueda encontrarse la enzima, con respecto al tiempo es cero. O dicho de
otra manera, su concentracin permanece constante.
* En nuestro caso, como ya hemos indicado:
d(E)/dt = 0 y d(ES)/dt =0
- De acuerdo con el modelo expuesto, la condicin de estado
estacionario limita la resolucin de la ecuacin de velocidad inicial

Cuando se cumple la condicin de estado estacionario, al iniciarse la


reaccin transcurre un breve periodo pre-estacionario, en el que la
cantidad de enzima libre, E y de enzima ligada a la enzima, ES, alcanzan
un valor que permanece constante durante el tiempo que dure la reaccin.

- El valor de la velocidad inicial vendr dado por la concentracin del


complejo [ES] en el estado estacionario, segn la ecuacin:

v = k2 [ES]

- Como ya hemos indicado anteriormente, d(ES)/dt = 0


Por lo que:
d ES
k1 E S k 1 ES k 2 ES 0
dt
k1 E S k 1 ES k 2 ES
k1 (Eo ES )S k 1 ES k 2 ES
k1 EoS k1 ES S k 1 ES k 2 ES
k1 EoS k1 ES S k 1 ES k 2 ES
k1 EoS ES (k1 S k1 k 2 )
Reordenando, obtenemos: k1 EoS
ES
k1 S k 1 k 2
-Sustituyendo este valor en la siguiente ec.
k2 es la Constante cataltica kcat
v= k2 [ES]= kcat [ES]
k1 EoS
v kcatES kcat
k1 S k 1 k 2
dividiendo por k1

v kcat
EoS
k 1 k 2 Km
S
k1

k 1 k 2
Km
k1

NOTA: La ecuacin de Briggs y Haldane, tiene la misma


estructura que la Michaelis-Menten
Curva de progreso de la reaccin S P

Enzimologa ser descrita con la condicin de estado estacionario


2.3. ECUACIN DE MICHAELIS Y MENTEN: Anlisis
* La ecuacin obtenida mediante el tratamiento de Briggs y Haldane la
podemos escribir de la siguiente manera:

v kcat
EoS
S Km
En la que hemos sustituido:
k2 por kcat, y k 1 k 2
Km o constante de Michaelis Km
k1
* Esta ecuacin, en honor a Michaelis y Menten, se denomina Ecuacin
de Michaelis-Menten y representa la ecuacin fundamental de la
cintica enzimtica.
Anlisis de la ecuacin de Michaelis-Menten

Curva definida por dicha ecuacin


La curva (v [S]), definida por la ecuacin:
Puede escribirse como una ecuacin de segundo grado y representa una
rama de hiprbola que pasa por el origen.

v Vmax

v V max
S
Km S

[S]
v V max
S
Informacin cintica Ecuacin Michaelis-Mentes Km S

v kcatEo
S
V max Km S
kcat
Eo
Kcat o nmero de cambio de una enzima:
Nmero de moles de substrato transformado por mol de enzima en la
unidad de tiempo (Unidades de t-1)

* Un nombre alternativo, para esta constante, es el de numero de


recambio (turnover number), que deriva del hecho de que sus
dimensiones son tiempo-1 y define el nmero de ciclos catalticos (o
turnover) que la enzima puede realizar por unidad de tiempo.

Condiciones de pH, temperatura y fuerza inica determinada, kcat es una


constantes caracterstica de la enzima.
Vmax
Cuando estamos estudiando una enzima, por lo menos al principio, es
prcticamente imposible conocer la concentracin inicial real de enzima,
[Eo], lo que complica el uso de la ec. de Michaelis-Menten en la forma:

v kcatEo
S
Km S
- Esta dificultad, generalmente, se supera combinando kcat y [Eo] en una
sola constante:

kcat[Eo] = Vmax
Permite obtener el valor de Kcat conociendo la enzima presente.
Vmax, o velocidad lmite, debido a su dependencia de la
concentracin de enzima no es una propiedad fundamental de la enzima.

- Por lo que, frecuentemente, es conveniente escribir la ec. de Michaelis-


Menten de la forma:
[S]
v = kcat[Eo] ----------------
Vmax Km + [S]

v V max
S
Km S
.
k 1 kcat
Km Km
k1

Valores de Km oscilan entre 10-3-10-6 M


Representan la concentracin de sustrato
Velocidad (inicial) igual a Vmax/2
Km So
Vmax
v V max
So v

So So
1
v V max
2

Km [S]
Condiciones de pH, temperatura y fuerza inica determinada, Km es una
constantes caracterstica de la enzima.
Constante de especicidad

v V max
S Eficacia cataltica
Km S
S<<<<Km

kcat
v
kcat
EoS Kesp Ver capitulo de
Km Km Termodinanica

* El valor mximo que la constante de especificidad puede alcanzar, viene determinado


por la velocidad de difusin de los dos reactantes, Eo y So, que han de chocar
eficientemente para producir la reaccin (bimolecular).

- Por muy eficaz que fuese una enzima nunca podra superar ese lmite, determinado por la
difusin de los reactantes, y que tiene un valor de 108 - 109 M-1 s-1.

Una constante de velocidad de una reaccin de


segundo orden

Ni Vmax ni Km separadamente nos dan una idea de la eficacia cataltica de


una enzima
Por consiguiente, el valor del cociente kcat/Km o constante de
especificidad, es el mejor marcador del grado de evolucin adaptativa de
una enzima para conseguir la mxima eficiencia.

Constante de especificidad, kcat/Km, para algunas enzimas


kcat Km kcat/Km
Enzima Sustrato (s-1) (M) (s-1M-1)
----------------------------------------------------------------------
Aceticolinesterasa Acetilcolina 1,4 104 9,0 10-5 1,6 108
Anhidrasa carbnica CO2 1,0 106 1,2 10-2 8,3 107
Catalasa H2O2 4,0 107 1,1 3,7 107
b-Lactamasa Benzilpenicilina 2,0 103 2,0 10-5 1,0 108
Fumarasa Fumarato 800 5,0 10-6 1,6 108
NADH-deshidrgenasa NADH 43 4,3 10-5 1,0 106
Tiempo de especificidad
El recproco de Vmax/Km, es decir, Km/Vmax tiene dimensiones de tiempo:

Km mmol 1
1 1
min
V max mmol min
y suele denominarse tiempo de especificidad (specificity time), y
representa el tiempo que se necesitara para consumir todo el
sustrato si la enzima actuara bajo condiciones de primer orden,
manteniendo su velocidad inicial indefinidamente.

NOTA: Aunque esta es ms bien una definicin abstracta para las


condiciones de ensayo habituales, en el caso de la clula si que tiene
sentido, ya que en las clulas, la mayor parte de las enzimas actan bajo
condiciones de reaccin de primer orden y mantienen la velocidad
durante periodos ms o menos largos (debido a la reposicin de sustrato):
en estas circunstancias el tiempo de especificidad, es el tiempo
requerido para recambiar (turnover) el sustrato completamente.
2.4.ACTIVIDAD ENZIMTICA: UNIDADES
* En los casos en que la concentracin molar de enzima no pueda
medirse, bien porque la enzima no se haya purificado o porque
desconozcamos su peso molecular, es conveniente definir una unidad de
actividad enzimtica.
Tradicionalmente se ha definido la unidad internacional U o IU
como la cantidad de enzima capaz de transformar un mmol de
sustrato en producto por min, bajo condiciones standard de
reaccin.

1U = 1 mmol/min
* Esta unidad sigue utilizandose ampliamente ya que la unidad propuesta
por el SI, el katal: cantidad de enzima necesaria para catalizar la
transformacin de un mol de sustrato en producto en un segundo,
bajo condiciones standard de reaccin, es una cantidad excesivamente
grande y desde un punto de vista prctico resulta poco operativa.
- Sin embargo, sus submltiplos:
el mkat = 10-6 katal, y
el nkat = 10-9 katal
si resultan ms tiles.

Tarea
Deduzca las equivalencias existentes entre IU y katal y
viceversa.
REPRESENTACIN
2.5. PODER CATALTICO
* Uno de los parmetros ms interesante de determinar para una enzima, es el
denominado Poder Cataltico (P.C.)
* El P.C. se define como la razn entre la velocidad de la reaccin catalizada por la
enzima (vc) y la velocidad de la misma reaccin sin catalizar (vsc), a una misma
concentracin inicial de sustrato, [So].

kcEo
S
Km S
PC
vc

kc
Eo 1
vnc knc S knc Km S

- Donde, kc es la constante de velocidad de la reaccin catalizada y knc es la constante de la


reaccin sin catalizar.

:
El P.C. es mayor cuanto menor es la [So] --> conclusin a la que
tambin puede llegarse desde una aproximacin termodinmica.
A [So] muy bajas , [So] << Km => Km + [So] Km, y por tanto:

kc 1
P.C. = ----- ------- (Eo)
knc Km

KT

- Al producto (kc /knc) (1/Km), le llamamos KT y representa la


constante del equilibrio terico formado entre la enzima libre,
E, y el sustrato en su estado de transicin.

E + S# <===> ES#

kc
KT = ------------
knc Km
Equilibrio terico de la formacin del complejo enzima-substrato activado ES# a partir de la
enzima en el substrato elemental y del substrato en el estado activado S#.

KT
E+ S# <===> ES#

KS# KES

Km
E + S <===> ES
Donde:
Keq = (ES)/(E) (S) = 1/Km => Km = (E) (S)/(ES)
KT = (ES#)/(E) (S#)
K #s = (S#)/(S)
KES = (ES#)/(ES)
* Si multiplicamos numerador y denominador de la ec que define
KT por (ES) y (S), obtenemos:

[ES#] [ES] [S] [ES #]] 1 1 KES


KT = ------------ ------------- = ----------- ------------ --------- = ----------
[E] [S#] [ES] [S] [ES] (E) [S] [S#] Km Ks#
--------- -------
[ES) [S]

As pues, el P.C. viene definido por:

KES
P.C. = ---------- Eo = KTEo
Km Ks#
Estudio Termodinmico
kc Sustituyendo el valor de las constantes de acuerdo a la
KT = ------------ ecuacin de Eyring
knc Km Gc#
kb T kb T
kc e RT
K es
h h
Gnc
#
kb T kb T
knc
RT #
e Ks
h h
kc Kes
#
knc K s
Confirma el valor que habamos obtenido antes para KT
Ecuacin que nos dice que el P.C. de una enzima es tanto
mayor cuanto mayor sea KT, es decir, cuanto mayor sea la
contribucin de la enzima a la estabilizacin el estado de
transicin.

NOTA: esto ya lo haba intuido Linus Pauling en 1948, ya que KT es una


constante de equilibrio terico de formacin del complejo-ES en el estado
de transicin a partir de la enzima libre en su estado elemental, E, y del
sustrato en su estado de activacin.

Como sabemos, el P.C. de una enzima puede llegar a vales


hasta 1020, aunque lo ms normal es que est entre 108 y 1018.
RESUMEN
Victor Henry llevo la primera aproximacin al estudio de la cintica enzimtica
al describir el comportamiento de la invertasa o sacarasa

Primera ecuacin cintica fue propuesta por Michaelis y Menten (1913). Ecuacin
de la velocidad inicial fue deducida a partir del equilibrio rpido de la formacin del
complejo enzima substrato ES y de la suposicin del que el paso limitante es la
descomposicin del complejo ES. La deduccin de la ecuacin de M-M supone que
la Kcat es mucho menor que la constante de velocidad de descomposicin del
complejo ES en sus componentes E y S.

Una serie de enzimas no seguan el supuesto anterior. Briggs y Haldane aadieron


una nueva condicin a la ecuacin de M-M , la condicin de estado estacionario-
Las ecuaciones cinticas estn deducidas en el supuesto que todas las formas
qumicas en las que pueda encontrarse la enzima sean invariables con
respecto al tiempo, estn en estado estacionario.

La ecuacin de M-M es una cnica, hiprbola que pasa por el centro de


coordenadas v:S La asntota paralela al eje de las abcisas representa la
velocidad mxima.
RESUMEN
La ecuacin de M-M define una serie de parmetros tiles del comportamiento de una
enzima.
Vmax indica aquella velocidad mxima alcanzable por una cantidad determinada de
enzima a concentraciones saturantes de substrato. La Vmax es igual al producto de la
constante de catlisis Kcat por la concentracin total de enzima presente [Eo], permite
obtener el valor de Kcat conociendo la enzima presente.

La constante de Michaelis, Km representa aquella concentracin de substrato para


la cual la velocidad incial es igual a la mitad de la velocidad mxima y es una medida de
la afinidad de la enzima por el substrato.
La razn Kcat/Km conocida como la constante de especificidad de una enzima,
define la eficacia cataltica y el grado de evolucin de una enzima.
Este valor no puede superar el lmite de difusin de dos substancias que van a
reaccionar que es de 108-109 M-1s-1.

El poder cataltico viene definido por la razn entre la velocidad de la reaccin


catalizada y la velocidad de la misma reaccin no-catalizada.
Se demuestra que el poder cataltico es proporcional a la cantidad de enzima y a la
constante KT.

KT define teoricamente la capacidad de estabilizacin por el enzima del estado de


transicin del substrato, de acuerdo con la intuicin inicial de Linus Pauling (1948)