CROMATOGRAFIA

Es una tcnica que separa los componentes de las

mezclas, a medida que son transportadas por una
fase fluida mvil a travs de una fase estacionaria
slida o lquida.
La separacin de las molculas se logra porque
la movilidad de cada soluto depende de un
equilibrio en la distribucin entre la fase mvil
(lquida o gaseosa) y la estacionaria (slida o
lquida).
Esta separacin se puede realizar en funcin de sus
cargas, masas, tamaos moleculares, la polaridad
de sus enlaces, sus potenciales redox.
 Fase estacionaria
Consiste en partculas, generalmente
slidas, pequeas y con una superficie
microporosa, de forma que presenta un
amplio desarrollo superficial.
Las partculas estn empaquetadas en
forma de columna o extendidas en forma de
capa.
El poder de adsorcin depende de la
naturaleza qumica de la superficie y del
rea superficial.
 Fase mvil
La fase mvil puede ser un lquido o un
gas, y su funcin es transportar a los
componentes de la mezcla a travs del
sistema cromatogrfico.
Entre los lquidos estan: el eter de
petrleo, tetracloruro de carbono,
tolueno, benceno. Cloroformo, eter.
 Fundamento del Proceso de
Separacin Cromatogrfico
En el proceso de separacin se produce una
competencia, entre la fase mvil y la fase
estacionaria, por el componente. A ste
proceso se le denomina particin del
componente distribuido entre las dos fases.
Se establece un equilibrio entre la
concentracin del componente, presente en
la fase mvil y la concentracin presente en
la fase estacionaria.
Coeficiente de Particin o de Reparto (K)

Se define como el cociente entre la concentracin

de componente presente en la fase estacionaria y la
concentrecin de componente presente en la fase
mvil:

Cs: concentracin del componente presente en la fase

estacionaria
Cm: concentracin del componente presente en la fase
mvil.
Coeficiente de Particin o de Reparto (K)
El valor de K representa el valor de la pendiente de
la recta que se obtiene al representar Cs frente a
Cm .
 Clasificacin de las tecnicas
cromatogrficas
Se clasifican de acuerdo a dos criterios: el mecanismo
de separacin y el estado de la fase mvil.
Considerando el mecanismo de separacin se divide
en cuatro grandes grupos:
C. de reparto: separa los solutos basndose en la
solubilidad.
C. de adsorcin: se basa en la afinidad de
adsorcin.
C. de exclusin: separa solutos segn el peso
molecular.
C. de intercambio inico: separa solutos segn la
carga inica.
 Clasificacin de las tcnicas
cromatogrficas
Clasificacin segn el estado de la fase mvil :
1. C. de gases: la fase mvil es un gas y pueden
ser dos sistemas:
C. gas-liquido
C. gas-slido
2. C. lquida: la fase mvil es un liquido y puede
ser:
C. liquido-liquido
C. liquido-slido
C. de exclusin
C. de intercambio ionico
 Cromatografa lquida
La cromatografa lquida puede llevarse
a cabo por cuatro tcnicas analticas:
. C. En papel
. C. En capa fina
. C. en columna
. C. Lquida de alta resolucin . HPLC .
Cromatografia en Capa
Fina
La cromatografa es un sistema de
separacin dinmica, porque
continuamente se producen equilibrios
entre los componentes de la mezcla a
separar y las fases mvil y estacionaria.
Cromatografia en Capa
Fina
La cromatografa en capa fina (CCF) es una
forma de cromatografa de adsorcin slido-
lquido que constituye una tcnica importante
en Qumica Orgnica para el anlisis rpido
de muestras que en algunos casos puede
estar en el rango de los 10-9 g.
Frecuentemente se usa para el seguimiento
de la evolucin del progreso de una
reaccin, o para el control y seguimiento de
las separaciones que se producen mediante
una cromatografa en columna preparativa.
Fundamentos de la Separacin en
capa fina
La separacin se basa en que las sustancias
investigadas se reparten de modo diferencial entre
una fase estacionaria y otra mvil: en la TLC el
eluyente (fase mvil) se desplaza por una fina capa
del sorbente (fase estacionaria), transportando as
los componentes individuales de la mezcla de
sustancias, ms o menos lejos dependiendo de su
solubilidad y/o de su comportamiento frente a la
adsorcin. El recorrido particular de cada sustancia
se emplea as para su identificacin.
Identificacin de los componentes
en ccf
La identificacin de cada uno de los
componentes se realiza de acuerdo con
su color.
De acuerdo con el valor rf (factor de
retencin es decir, el cociente entre el
recorrido de la sustancia (X) y el del
eluyente (Y).
Identificacin de los componentes en
ccf
La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera
de expresar la posicin de un compuesto sobre una placa. Se
expresa, como una fraccin decimal. Mide la retencin de un
componente. Se define como:

distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente

desde el centro de la mancha. Para que los RF sean
reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones
(Espesor de la placa, fase mvil, fase estacionaria, cantidad de
muestra). El mximo valor de RF que se puede alcanzar es de
1, lo ideal es un RF entre 0.65 y 0.7.
 Desarrollo de la cromatografa en
capa fina, ccf
Para realizar el anlisis de una muestra por CCF se utiliza
un adsorbente slido como gel de slice (SiO2. H2O) o
almina (Al2O3), unido a una placa rectangular de de vidrio
o plstico. El adsorbente sirve de fase estacionaria.
La muestra se aplica en disolucin con un capilar de vidrio
en un extremo de la placa, pero no sobre el mismo borde.
A continuacin se introduce la placa en un tanque cerrado
conteniendo un disolvente o mezcla de disolventes (fase
mvil), de manera que la placa quede apoyada sobre el
fondo y el punto con la muestra, por encima del nivel del
lquido. El tanque contiene una atmsfera saturada en el
disolvente.
La fase mvil asciende por capilaridad, de forma que se
produce el mayor o menor avance de los componentes de
de la mezcla, segn su polaridad.
Desarrollo de la cromatografa
Desarrollo de la cromatografa
 Cromatografa en columna
Fue la forma original de cromatografa
lquida realizada por primera vez en 1906
por Tswett. La fase estacionaria
normalmente se encuentra dentro de una
columna de vidrio de 5 a 30 mm de
dimetro. Se utilizan muchas clases de
materiales de empaque que van desde la
almina, gel de slice, tierra de diatomeas,
hasta resinas sintticas y derivados
polisacridos.
 Cromatografa en columna
La fase mvil es lquida y la fase estacionaria
consiste en un slido. La fase estacionaria ser
un componente polar y el eluyente ser por lo
general menos polar que la fase estacionaria, de
forma que los componentes que se desplacen
con mayor velocidad sern los menos polares.
Polaridad de los compuestos orgnicos en
orden creciente: hidrocarburos < olefinas < fluor
< cloro < nitro < aldehdo < ester < alcohol <
cetonas < aminas < cidos < amidas
Cromatografa en columna