Fluorescent In Situ Hybridization

FISH
 Tcnica de laboratorio para detectar y localizar una Fish se utiliza cuando
secuencia especfica de ADN en un cromosoma. La no se detectan con
tcnica se basa en exponer los cromosomas a una anlisis citogentico
(cariotipo) las
pequea secuencia de DNA llamado sonda que tiene
anomalas gnicas
una molcula fluorescente pegada a ella.

FISH Tecnologa utiliza

Anomalas
genticas o Sondas de
cromosmicas ADN

Detectar o marcadas
confirmar Fluorocromo
 Qu es una sonda?

Una sonda es un cido nucleico (ADN o

ARN) cuya secuencia de nucletidos es
complementaria a la del cido nucleico
de inters
 La tcnica FISH puede realizarse a los cromosomas en:

Metafase Interfase

Para detectar micro deleciones especficas ms Para determinar el nmero de copias de uno o varios
all de la capacidad de resolucin de la cromosomas, as como para detectar algunas
citogentica de rutina, o para identificar material reorganizaciones especficas que son caractersticas
extra de origen desconocido. de ciertos tipos de cncer.
Los cromosomas que son usualmente utilizados por FISH
13 (Sndrome de patau)
18 (Sndrome de Edwards)
21 (Sndrome de Down)
X (Sndrome de Turner)
Y (Sndrome del superhombre)

Se empleaban sondas de carcter

radiactivo, pero estas fueron
reemplazadas por los fluorforos
por mayor seguridad y facilidad.
Tcnica de FISH
Un protocolo de la tcnica de FISH incluye 4 pasos:

1. Fijacin y permeabilizacin de la muestra

2. Hibridacin

3. Lavado

4. La deteccin de las clulas marcadas a travs del

microscopio de fluorescencia o confocal
1. La muestra de DNA (cromosomas
metafsicos o ncleos en interfase)
se desnaturaliza, proceso que
separa las hebras complementarias
de la estructura bicatenaria en doble
hlice del DNA.
2. A la muestra desnaturalizada se le
aade entonces la sonda de inters,
que se asociar al DNA de la
muestra en el sitio diana, en el
proceso denominado hibridacin,
donde se vuelve a formar una doble
hlice.
3. La sonda est unida
covalentemente (marcada) con un
fluorforo, que emite una seal
observable mediante un
microscopio de fluorescencia.
Aplicaciones de FISH
 APLICACIONES DE FISH

IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS
DETECCIN DE ANOMALAS
CROMOSMICAS Diversas tcnicas de diagnostico molecular en
conjunto con FISH han logrado identificar
Aneuploidas rpidamente los microorganismo de
importancia medica que generan infecciones
internas en rganos.
MAPEO DE GENES
CARIOTIPO ESPECTRAL
Ubicar la posicin relativa de
los genes en un cromosoma Imagen de los cromosomas
determinado. coloreados, implica FISH
utilizando mltiples formas de
muchos tipos de sondas.
 CARIOTIPO VIRTUAL PLANTAS DE TRATAMIENTO

Usa miles a millones de sondas en Trabajos empleando FISH se enfocaron

una sola matriz para detectar a determinar la cantidad de
cambios en el numero de copias, en microorganismos presentes en las
todo el genoma, con una resolucin aguas residuales de las plantas de
sin precedentes. tratamiento.

AMBIENTES ACUATICOS
Posteriormente se orient su uso a
FISH permite detectar los evaluar la relacin entre el volumen
microorganismos individuales en su de lodos activados y la presencia de
microhbitat sin ningn paso de bacterias filamentosas.
purificacin selectiva o
amplificacin.
BIORREMEDACION

El uso de FISH en procesos de

tratamiento de aguas de desecho
con residuos txicos y
recalcitrantes como los
compuestos fenlicos.
Evaluar los procesos metablicos SIMBIOSIS
que realizan ciertas bacterias
empleadas en la oxidacin de Algunos microorganismos son difciles
hierro y el uso de bacterias de aislar en cultivos puros y FISH se
magnetotcticas. convierte en una herramienta que
facilita la identificacin de
microorganismos asociados a plantas,
ya que permite la localizacin del
microorganismo dentro del husped.
Ejemplos de FISH
FISH- BICOLOR