ELISA

Tiara Mayang Pratiwi Lio

Patologi 091514653004
Klinik Magister Ilmu Forensik
Pascasarjana UNAIR
Forensik 2016
ANTIGEN (Ag) : adalah bahan yang dapat memicu respon
imun atau dapat bereaksi dengan Antibodi
ANTIBODI (Ab) : adalah protein yang dihasilkan sel
limfosit B sebagai respon tubuh karna kontak dengan Ag
 IMMUNOASSAY
Teknik analisis dengan menggunakan pereaksi yang
dihasilkan oleh sistem imun yaitu ANTIBODI (Ab)
Tujuan : Tes atau uji yang digunakan untuk
mengukur adanya antigen atau antibodi pada
sampel (spesimen bilogikal)
 Prinsip IMMUNOASSAY
Sifat Ab yang mengikat Ag spesifik
Prinsip analisis secara immunoassai
berdasarkan reaksi Ag-Ab spesifik
terhadapt Ag tersebut bentuk kompleks
ikatan Ag-Ab
 PRINSIP IMMUNOASSAY
Utk deteksi Antigen : digunakan
Antibodi (monoklonal ataupun
polikonal ) sehingga membentuk
kompleks Imun (Ag-Ab)
Utk deteksi Antibodi : digunakan
Antigen sehingga membentuk
kompleks Imun (Ag-Ab)
 MACAM-MACAM IMMUNOASSAY
Terdapat beberapa metode yang digunakan utk
mendeteksi Ag-Ab, antara lain :
Immunoassay tak Immunoassay berlabel :
berlabel : a. Berlabel Flouresens
a. Uji Presipitasi b. Berlabel Radioisotop
b. Uji Aglutinasi c. Luminescent Assay
c. Uji (LIA)
Hemaglutinasi d. Berlabel Enzim
d. Lisis Imun
e. Uji Netralisasi
 ELISA
Enzyme Linked Immunosorbent Assay

Adalah teknik biokimia yang menggunakan prinsip immunologi untuk

mendeteksiAb atauAg dalam sampel
Prinsip menggunakan reaksi perubahan warna
(Colorimetric assay)
Enzim yg ditambahkan akan bereaksi dengan substrat
memproduksi produk yg berubah warna
 Alat dan Bahan
Bahan Alat
Antigen 96-wells microplate
Antibodi Micropipet
Blocking Buffer ELISA rest Kit
Sampel Serum
Conjugate (2nd Antibodi + enzim)
Substrate
Stop Sol
 ELISA
QA iMark Microplate
Absorbance Reader

Micro-plate reader

Positive result

96-well micro-plate
 Macam-Macam ELISA
Direct ELISA deteksi Antigen
Indirect ELISA deteksi Antibodi
Kompetitif ELISA deteksi Antigen
Sandwich ELISA deteksi Antigen
 Direct ELISA

Lapisi sumur dengan Ag

Inkubasi dengan Ab labeled Enzim
Tambahkan dengan Substrat
anlisis
Indirect ELISA
Indirect ELISA melalui 5 (lima) tahapan proses yaitu :
1. Melapisi (coating) 96-well polysterene ELISA plates dengan
antigen.
2. Blocking unbound sites (antigen non target) untuk
mencegah terjadinya hasil false positive.
3. Penambahan antibodi pimer (contoh : rabbit monoclonal
antibody) dalam well.
4. Penambahan antibodi sekunder yang dikonjugasikan
dengan enzim (contoh : GOAT anti-rabbit IgG berenzim AP
atau SA-HRP).
5. Ditambahkan substrat yang akan bereaksi dengan enzim
dan akan menghasilkan warna. Hal ini menunjukkan bahwa
terjadi reaksi antara antigen dengan antibodi (positive
reaction).
ELISA KOMPETITIF
Sandwich ELISA
Terimakasih....