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OBJETIVO

o Conocer las caractersticas de los hongos

mediante tincin.
o Comprender y conocer la importancia de los
hongos que pueden crecer en los alimentos.
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En promedio, se han descrito unas

80,000 especies de ellos, pero poseen
importancia mdica menos de 400, y
menos de 50 especies ocasionan ms
de 90% de las micosis de humanos y
otros animales. Los hongos son
eucariotas, y por esa razn comparten
innumerables genes homlogos,
productos gnicos y vas, con sus
hospedadores humanos. Como
consecuencia, son pocos los puntos
de ataque particulares en que acten
quimioteraputicos y antibiticos
eficaces.
 C
4 omo las plantas, animales y protistas, los hongos son eucariotas,
organismos cuyos ncleos celulares estn contenidos en
membranas. No obstante, los hongos presentan una combinaci6n
de caractersticas que justifica su ubicaci6n en un reino
eucaritico separado.

Los hongos son reconocidos en el

laboratorio por su morfologa
macroscpica y microscpica, y de
acuerdo con ello se dividen en tres
grupos:
Hongos filamentosos
Hongos levaduriformes
Dimorfos
Medios de crecimiento
Agar Saboraud Dextrosa
Agar rosa de bengala
Agar Papa dextrosa

Tcnicas utilizadas para la

siembra.
Microcultivo
Vaciado en placa
Extensin en varilla
Estra cruzada
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HONGOS FILAMENTOSOS
La hifa o filamento es el elemento
primario de estos hongos; son
estructuras cilndricas parecidas a
tubos; pueden tener tabiques o septos
en nmero variable o no tenerlos y ser
aseptadas o cenocticas; poseen
poros pequeos. Segn la forma que
adopten pueden ser: vesiculosas,
nodulares, pectinadas, en raqueta, en
candelabro fvico y otras.
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SAFRANINA Tincin de Gram

til para el estudio de Tincin diferencial: Se emplea para teir: Productos

cultivos y productos biolgicos lquidos Exudados de lesiones Macerados
biolgicos lquidos. Los de biopsias. Todos los hongos son positivos a la
elementos fngicos se coloracin de Gram, excepto
tien de color rojo Cryptococcusneoformans.
intenso, y el resto del El de colorante alcohol acetona disuelve a los lpidos
campo toma un tono de la pared impidiendo la retencin del cristal violeta
incoloro oro saplido. en los organismos Gram negativos. Se forma un
complejo: lugol-cristal-violeta-ribonucleato
de magnesio Esta tcnica se basa en las diferencias
en el punto isoelctrico
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TINCIN DE AZUL DE ALGODN LACTOFENOL

La tincin de Azul de lactofenol se emplea para observar

hongos.
Es una tincin simple (un slo colorante) y como tal est basada en
la afinidad del colorante por componentes de las clulas, en este
caso por las estructuras fngicas.
El azul de lactofenol tiene tres caractersticas que lo hacen
especial para observar dichas estructuras en los hongos del tipo
moho obtenidos en los cultivos por aislamiento.
El fenol destruye la flora acompaante (algunas veces en los
cultivos, juntos a los hongos pueden crecer colonias de bacterias)El
cido lctico conserva las estructuras fngicas al crear, por decirlo
de algn modo, una pelcula que las protege provocado por un
cambio de gradiente osmtico entre el interior y el exterior de
dicha estructura.
El azul de algodn tiene la capacidad de adherirse a las hifas y
conidios de los hongos microscpicos.
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Preparacin de la impronta
1. Colocar el material necesario en la campana
de seguridad tipo .
2. Seleccionar las colonias para realizar las
improntas. 3. Cortar segmentos de cinta
adhesiva transparente aproximadamente de 1
cm2 .
4. Pegar los segmentos de cinta en un asa
micolgica. 5. Poner una gota de azul de
algodn en el portaobjetos.
6. Con el lado adhesivo de la cinta, tocar la
parte superior de hongo.
7. Colocar la cinta sobre la gota de azul de
algodn y poner otra gota de azul de algodn.
8. Poner un cubreobjetos sobre la preparacin.
9. Observar en 40x.
 BLANCO DE CARCOFLOUR
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Fundamento: El calcoflor es un flourocromo que se une a polisacridos

con los en la cesbeta1-3 y beta1-4 presentes en polmeros tales como
celulosa y la quitina. El colorante fluorece cuando se expone a una fuente
de luz ultravioleta de onda cortao capaz de producir la luz azul (longitud
de onda 410-450 nm). Es un mtodo de alta sensibilidad para definir
claramente los elementos micticos con microscopio de fluorescencia.
 ANARANJADO DE ACRIDINA
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Se utiliza para la deteccin de bacterias y hongos en
muestras clnicas Puede utilizarse un microscopio con
accesorios fluorescentes como el de Reichert Zetopan.
El microscopio ordinario puede equiparse con
filtros para filtracin fluorescente (BG12, de 4 mm
de espesor). Se colocan filtros amarillos de modo
de barreras filtrantes.
Fundamento: El pigmento se intercala en el cido
nucleico (nativo y desnaturalizado). Con pH neutro,
las bacterias, los hongos y el material celular se tien de
naranja rojizo. Con pH cido, las bacterias y los hongos
se mantienen de color naranja rojizo, pero el material de
fondo se tie de amarillo verdoso.
Composicin:
Alcohol absoluto
cido actico
Anaranjado de acridina
Buffer de fosfatos
Cloruro de calcio.
 TINCIN ZIEHL NEELSEN (CIDO-ALCOHOL-RESISTENTES)
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Es el procedimiento utilizado para colorear aquellos organismos que son

difciles de colorear con colorantes bsicos, porque se muestran impermeables
a la coloracin. El contenido lipdico de estos organismos est
compuesto principalmente por ceras y fosfolpidos que alcanzan hasta
un 40% de su peso seco total.

La cido-alcohol-resistencia es la capacidad de ciertos materiales biolgicos

para formar complejos con algunos colorantes y que luego de la exposicin al
alcohol-cido no ocurre de coloracin Se cree que el cido miclico es
responsable de cido- alcohol-resistencia. til en algunos microorganismos
cido resistentes como N.Asteroides, N.Brasiliensis y otros actinomicetes.
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El fenol desactiva las enzimas lticas en la clula e impide que esta se
rompa. Adems acta como mordiente cuando se usa en combinacin
con colorantes.

El cido lctico preserva las estructuras fngicas.

El azul de algodn en un colorante acido, que tie el citoplasma y la

quitina recent en las clulas fngicas.

La fucsina acida tie el citoplasma de las clulas

 DERMATOFITOS

Son un grupo de hongos queratinoflicos

Son causantes de las dermatofitosis o tias (Tinea) son micosis superficiales.
 Trichophyton,
Cabello, piel y uas

Microsporum y
Cabello, vello y piel

Epidermophyton.
Piel y uas
 Los mtodos usados para la visualizacin fngica difieren en
algunos aspectos de los de las bacterias, el mayor tamao de
los hongos hace generalmente innecesarios la tincin de frotis
secos, en su lugar son ms utilizadas las preparaciones directas
en fresco con o sin lquidos de montaje y clarificacin.
La mayora de los hongos se pueden detectar sin tincin.
 KOH

El procedimiento consiste en poner el material a examinar sobre un portaobjetos, aadir 1 2 gotas

de la solucin de KOH, poner un cubreobjetos y calentar suavemente la preparacin durante un
minuto.
La observacin microscpica de las formas fngicas se
realiza con K(OH) al 20% y azul de lactofenol tanto con
escamas como con pelos.

Tambin se puede usar Tinta Parker diluda cinco veces

con K(OH) al 10%. El K(OH) calentado suavemente
permitir disgregar los restos celulares, sin que se
afecten los elementos fngicos
 KOH-Dimetilsulfxido (DMSO):
La adicin de DMSO acelera la clarificacin, evita la necesidad del
calentamiento y la cristalizacin
 Tincin negativa
Para la deteccin de la cpsula
polisacardica extracelular de algunos
hongos se utilizan suspensiones coloidales
de partculas de carbn. Las ms utilizadas
son la Tinta China y la Nigrosina. Es la
tcnica de tincin negativa ms
ampliamente recogida en la literatura
Tinta China
Procedimiento
Depositar sobre un porta limpio y desengrasado una gota de LCR y
una de tinta china, mezclarlas bien evitando formar burbujas y
colocar el cubre. La preparacin debe ser fina y su color marrn,
no negro.
Nigrosina (similar a tinta china)
 Tincin con fluorocromos

Tambin se puede usar tcnicas de fluorescencia de blanco de calcofuor.

Esta tcnica se basa por una parte en la propiedad que tienen determinadas sustancias qumicas de
emitir fluorescencia al ser activadas por la luz ultravioleta y por otra a la afinidad que dicha sustancia
tiene por la quitina de la pared celular de los hongos.
La importancia de esta tincin radica en que es ms sensible que la microscopa clsica con solucin
de K(OH) pero exige el uso de un microscopio de fluorescencia.
 Los medios de cultivo habitualmente utilizados Diagnstico de
las dermatofitosis en el perro y el gato. toman como base el
agar glucosado y peptonado de Sabouraud.
 http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/micologia/dermatofitosis.html
https://ddd.uab.cat/pub/clivetpeqani/11307064v11n4/11307064v11n4p219.pdf
http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/file.php/118/MATERIAL_2012/TEORIAS_APUNTE/D
ermatofitosis_TEORIA.pdf
https://books.google.com.mx/books?id=WB3lngLAYjAC&pg=PA136&lpg=PA136&dq=
tincion+de+hongos+dermatofitos&source=bl&ots=Tvtxa4nfyb&sig=tKg2lR1c2vWMuoM
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