Anda di halaman 1dari 22

BIOMARKER DALAM INFLAMMATORY BOWEL

DISEASES : STRATEGI IDENTIFIKASI STATUS DAN


PROTEOMIK TERKINI

FITRI HANDAYANI
PEMBIMBING : dr. DEDIYANTO, Sp.PD

KEPANITERAAN KLINIK SENIOR


FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS ABDURRAB
ILMU PENYAKIT DALAM
RSUD BANGKINANG
2017
LATAR BELAKANG
Inflammatory Bowel Diseases (IBD)
Gg. Gastrointestinal kronis & bentuk paling umum Crohn
Disease (CD) & Ulcerative Colitis
2013 prevalensi meningkat
Diagnostik dpt tertunda beberapa tahun setelah onset awal
e.c biomarker u/ CD & UC (-)
Biomarker u/ Dx dini penting ex : CD dg ulserasi ekstensif
5x risiko kolektomi
GENOMIC, TRANSCRIPTOMIC DAN PROTEOMIC
BIOMARKERS

Biomarker (NIH, 2001)

Karakteristik yang diukur dan dievaluasi secara objektif sebagai


indikator proses biologis normal, proses patogenik atau tanggapan
farmakologis terhadap intervensi terapeutik

Fx :

Diagnostik

Memantau prognosis penyakit

Pemantauan & prediksi penyakit


Cont....
Biomarker : Modifikasi Post Produk
Analisis DNA, Trabsional (PTMs) protein akhir
Kode u/ produk RNA &protein
gen yg
diekspresikan
(protein)

100.000 protein Transkrip DNA ke


berbeda transkrip RNA
Cont....

Biomarker u/ penyakit IBD >1 dekade teknik sekuensing


genomik ( lokus CD & UC)

Belum ada bimarker pasti u/ membedakan UC & CD

Sprektometri Mass (MA) bottom-up proteomik u/


identifikasi PTMs strategi berbasis rasio mass to-charge
(m/z)

m/z berat molekul peptida protein u/ identifikasi protein


& PTMs
Cont....

MS analisis menyeluruh kompleksititas protein jar. Usus u/


keadaan abnormal dan normal

Sampel biomarker darah atau feses

Antibodi identifikasi biomarker CD/UC o/ proteomik


immunoassay & immunohistokimia u/ evaluasi klinis marker tes rutin
> murah dr sekuens genom
DIAGNOSIS INFLAMMATORY BOWEL DISEASE DAN
Biomarker tunggalBIOMARKER
u/ YANG DIKETAHUI
membedakan dx UC & DC (-)

BIOMARKER UMUM SPESIFITAS FUNGSI


Biomarker Serum
ASCA 39% -79% pasien CD positif, 5% - 14% -18% kontrol diuji positif,
15% pasien UC [41-43] membatasi nilai diagnostik [44]
pANCA 20% -85% pasien UC positif, 2% - 32% kontrol diuji positif, membatasi
28% pasien CD [41,42,45] nilai diagnostik [44]
CRP Marker untuk inflamasi akut Tidak bisa membedakan CD dari
UC. Namun, dapat digunakan untuk
memantau status penyakit [48-50]
Biomarker Fecal
Calprotektin Marker sensitif untuk inflamasi usus Tidak bisa membedakan CD dari
[8,17,40] UC. Digunakan untuk memantau
status penyakit [17]
Laktoferrin Dapat membedakan IBD aktif dari Tidak spesifik untuk CD dan UC.
IBD yang tidak aktif dan irritable Namun, dapat digunakan untuk
bowel syndrom [60] memantau status penyakit [60]
Cont.... Gold standar (-) dx berdasar gejala, PF,
lab, radiologi & endoskopi dg histologi

CROHN DISEASE (CD) ULCERATIVE COLITIS (UC)

Inflamasi kronis di sal. Cerna Inflamasi terbatas colon


manapun Ileum terminal /
perianal rektum jarak proksimal
Tidak kontinyu Histologi :
Histologi :
Inflamasi superfisial
Submukosa tebal

Inflamasi transmural mukosa & submukosa


Ulserasi fissuring
Cryptitis & abses crypt
Granuloma non-kasein
Antibodi dan Biomarker Serum

Antibodi Anti-Saccharomyces Cerevisiae (ASCA)


AB dg afinitas u/ antigen di dinding sel ragi Saccharomyces Cerevisiae
> sering positif pd CD namun pasien kontrol sehat juga (+) spesifitas &
sensitivitas u/ CD relatif rendah

Antibodi Sitoplasma Antineutrofil (ANCA)


AB dg afinitas u/ granulosit neutrofil ditemukan dlm kondisi imun :
Granulomatosis Wegener dan Rheumatoid Arthritis (RA)
histologi >> (+) pasien UC dg warna perinuklear ANCA (pANCA)
namun pd kontrol sehat (+)
Antibodi dan Biomarker Serum

Protein C-Reaktif (CRP)

Protein yang meningkatkan serum pd IBD fase akut

Produksi di hepar stimulasi o/ IL-6, TNF-, IL-1 di produksi di


tempat inflamasi

CRP meningkat inflamasi (+) namun tidak spesifik u/ CD a/ UC

Bimarker serum lain :

Jumlah sel darah putih, trombosit, dan albumin,


Biomarker Fecal

Kotoran a/ feses tempat biomarker paling jelas e.c bersentuhan


langsung dg area usus

Biomarker fecal sgt berguna u/ dx CD e.c inflamasi tidak merata


yg mungkin terlewat saat kolonoskopi

Host mikroba tertentu pd IBD :


Sering: Enterobacteriaceae, Ruminococcus gnavus & Desulfovibrio

Jarang: Faecalibacterium prausnitzii, Lachnospiraceae & Akkermansia


Biomarker Fecal

Calprotectin

Protein pengikat kalsium & zinc dlm jumlah besar dlm granulosit
neutrofil 5% protein

Marker yg sgt stabil + tahan degradasi bakteri kolon

Marker sgt sensitif u/ inflamasi usus e.c konsentrasi calprotectin


feses sebanding sel infiltrasi sel neutrofil mukosa usus

Namun tidak spesifik u/ CD + UC e.c calprotectin meningkat pd


kondisi lain
Biomarker Fecal

Lactoferrin
glikoprotein pengikat besi yg diekspresikan o/ neutrofil aktif

Tahan degradasi & proteolisis biomarker ideal u/ inflamasi


usus tapi tidak spesifik u/ CD + UC

Hanya membedakan IBD aktif & non aktif serta Irritable Bowel
Syndrom
PROTEOMI BIOMARKER YANG DIKENAL UNTUK
INFLAMMATORY BOWEL DISEASE

Beberapa penelitian proteomik berhasil ditujukan u/ identifikasi


biomarker IBD untuk :
Etiologi
Diagnosis UC dan DC
Platform proteomik identifikasi ribuan protein dengan PTMs

Sampel biomarker feses dan darah


Namun belum ada yang diimplementasikan dalam pemakaian
sehari-hari
Beberapa perkembangan penelitian biomarker

Barcelo-Batllori et al, 2002

Proteomik profil protein sel sebelum & sesudah terpapar sitokin

Pemisahan protein dr sel dg two-Dimensional Polyacrylamide Gel


Electrophoresis (2D-PAGE) efektif u/ identifikasi calon marker

Identifikasi peptida protein dg Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization-


Time Of Flight (MALDI-TOF) MS isolasi sel epitel UC & DC

Proteomil skala besar Electrospray Ionization (ESI) + Liquid


Chromotogrhapy (LC)

Marker ini memberi informasi > baik u/ etiologi


Cont....
Hardwidge et al, 2004
Proteomik profil protein pd sel epitel usus Human Caco-2 pre & post
infeksi E. Coli
Teknik ESI LC-MS signifikan u/ pre & post infeksi t.u dlm
penanganan

Hsieh et al, 2006


Analisa etiologi & patogenesis UC dg biopsi kolon
MALDI-TOF MS disfungsi mitokondria pd UC
Meuwis et al, 2007

Profiling serum proteomik dg SELDI-TOF MS pd IBD dpt


membedakan UC & DC dg sensitivitas 85% (51/60) & spesifisitas
95% (57/60)

Identifikasi : MALDI-TOF MS, Western Blotting, dan ELISA assay

4 kandidat biomarker : Platelet Aggregation Factor 4 (PF4), Myeloid


Related Protein 8, Fibrinopeptide A dan Haptoglobin Alpha-2
Subunit marker inflamasi akut IBD
Hatsugai et al, 2010
Studi pertama yang berhasil mendiskriminasikan UC dari CD
sepenuhnya

Analisa sel mononuklera dg pemisahan protein o/ 2D-PAGE

Presley et al, 2012

35% dpt membedakan penyakit dg SELDI-TOF MS dan MALDI-TOF


MS
Gazouli et al, 2013
18 pasien CD terhadap pengobatan infliximab berkorelasi dg
biomarker serum

Sampel serum dianalisis dg : 2D-PAGE, dan 240 protein +


identifikasi protein MALDI-TOF MS
MODIFIKASI POSTTRANSLATIONAL SEBAGAI
BIOMARKER

PTMs mewakili target u/ penelitian penemuan biomarker

PTMs utama Glikosilasi

PTMs terlibat respon inflamasi + etiologi IBD


KESIMPULAN
Dx Uc & Dc tetap sulit t.u awal penyakit & dx IBD dini penting
Biomarker menjajikan pd feses, serum & jaringan
Analisa proteomik jar. Usus dg ESI LC-MS, ELISA, PTMs
memungkinkan u/ Biomarker IBD
identifikasi & kuantifikasi protein dg menggunakan spektrometri
massa (MS) memegang banyak harapan untuk identifikasi
biomarker diagnostik dan prognostik baru untuk IBD