Universidade Federal da Bahia

Instituto de Cincias da Sade

Departamento de Biointerao

Produo e controle de
qualidade de vacinas

Tecnologia do Desenvolvimento de Vacinas

 PPaattggeennoo

Cultura
Atenuao
Purificao
Ag
Vacina Purificao Semente
Inativao

Cultura
Vacina
Vacina

Vacina
 Etapas na produo de vacinas
PPrroocceessssaammeennttoo
pprrimmrrioo
((UUpp-ssttrreeaamm))
SELEO DA LINHAGEM VACINAL (I)
 Padronizao da linhagem semente

Uma vez que a semente candidata foi selecionada

Antgenos devem passar por testes de identidade

Avaliao da sua aplicabilidade no produto final

Nveis satisfatrios quando cultivados em ovos

embrionados ou culturas celulares (vrus)

Estabiliade antignica aps passagens em meios de

cultura, e pelos processos de inativao e purificao
 Crescimento de microrganismos

Bulk production - produo a granel ou em escala

Cultivo do microrganismo em um fermentador equipado
com controle de parmetros como temperatura, pH,
oxignio dissolvido, etc.

Crescimento
dos Mos ao
nvel mximo
 Cultura Batch ou fechada (Bac)

MO cresce em um ambiente fechado

Todas matrias primas so adicionadas
ao fermentador ao incio e ento o MO
inoculado.

O sistema mantido fechado (uma

semana), at que tenha havido o
consumo dos nutrientes e gerao dos
produtos de interesse.

O fermentador esvaziado e o material

posteriormente separado.
 Cultura contnua (Bac)

Crescimento de Mos em sistema aberto

Cultura contnua mantm os Mos em
crescimento por tempo indeterminado.
Pode ser aplicado se:
Nutrientes frescos so continuamente
fornecidos

Clulas acumuladas e produtos / dejetos so

removidos na mesma taxa
 Cultivo celular para vrus (I)

Cultivo celular um processo complexo atravs do qual clulas crescem sob

condies controladas, geralmente fora do seu ambiente natural

Cultura primria (menos utilizada)

Clulas cultivadas diretamente dos tecidos hospedeiros (humano ou
animal) e podem ser subcultivadas por apenas 1 ou 2 vezes. Ex. Cultura
primria de clulas renais de macacos
Animais SPF

Cultura secundria
So derivadas de tecidos fetais humanos e podem ser subcultivadas por at
20 - 50 vezes. Fibroblastos diplides (MRC-5)
 Cultivo celular para vrus (II)

Linhagens celulares contnuas

Um tipo celular que pode ser propagado indefinidamente em cultura
Ex. Clulas Vero, Hep2

Seleo da linhagem celular:

Linhagem de acordo com o Sistema de Lotes de sementes
Histrico da linhagem celular obtida (origem, numero de passagens em
cultivo, meios de propago)
Linhagem capaz de multiplicar o vrus em grandes quantidades,
rapidamente, eficiente na expresso das molculas virais, e aplicvel a
outros tipos virais
Clulas deve sem primeiramente checadas aparncia, taxa de
crescimento, contaminao, mycoplasmas
 Propagao do cultivo celular (I)

Em sistemas de microcarreadores
Clulas dependentes de ancoragem e crescimento em superfcies
slidas (microcarreadores, microesferas)
Clulas crescem recobrindo as microesferasuniformemente
Grande superfcie rea/volume
Maiores densidadescelulares
 Propagao do cultivo celular (II)

Cultivo em suspenso
Clulas que no dependem de aderncia para o crescimento
Homogenizao contnua
Sistema fcil, sem limites de volume para a escala industrial
 Ovos embrionados para vrus

Ovos de origem certificada, SPF

Pode ser aplicado para diferentes vrus
Atualmente, utilizado para vrus da Influenza
Confeco de um orifcio na casca entre 5 a 14 dias aps
fertilizao
Incubao a 33 C por 2-3 dias, testes de viabilidade dos ovos e
recuperao do fluido alantideo
Regies de aplicao viral

Herpes
Herpessimplex
simplexvirus
virus
Pox virus
Pox virus
Rous
Roussarcoma
sarcomavirus
virus

Influenza
Influenzavirus
virus
Mumps
Mumpsvirus
virus

Influenza
Influenzavirus
virus
Mumps virus
Mumps virus
New
Newcastle
castledisease
diseasevirus
virus
Avian
Avianadenovirus
adenovirus

Herpes
Herpessimplex
simplexvirus
virus
 Recuperao e purificao viral

Aps propagao viral.

Recuperao das clulas infectadas

Purificao das partculas virais
Inativao (calor , formalina, Triton X-100)
Purificao de subunidades

Mtodos empregados:
Centrifugao
Filtrao
Cromatografia
 Para vacinas inativadas / Mos mortos

Inativao Qumica
Beta-propiolactona (Lo Grippo, 1960; Gard, 1960).
Formalina (Weil & Gall, 1940; Kim & Sharp, 1967).

Inativao por Solventes e detergentes (S/D)

Vrus envelopados
Detergente tipicamente utilizado: Triton-X 100. Inativao
Trmica (Calor) : 56C por 30 minutos. Inativao por Luz
UV: Dimerizao de timinas vrus DNA
 Processo de produo da vacina inativada

Fig. 1. Schematics of the

inactivated polio vaccine
production process.
During upstream
processing cells are
expanded using two pre-
culture steps prior to cell
culture and virus culture.
The downstream
processing consists of
clarification,
concentration, size
exclusion
chromatography and ion
exchange
chromatography followed
by inactivation. To obtain
trivalent polio vaccine this
procedure is followed for
each polio virus type
separately prior to mixing
for end product
formulation.

Bakker et al., 2011

 Formulao da vacina
A formulao da vacina ocorre pela adio dos adjuvantes, estabilizantes,
conservantes, caso necessrios.

Componente Funo Exemplo Examplos de vacinas

Adjuvantes Melhorar a Sais de Diphtheria-pertussis-tetanus

resposta imune a alumnio Diphtheria tetanus (DT)
uma vacina DT combinada com Hepatite B
(HBV)
Haemophilus influenza B
Polio virus inativado (IPV)
Hepatite A (HAV)

Conservantes Prevenir contra Timerosal Diphtheria-tetanus-pertussis acelular

contaminaes (DTaP)
bacterianas e Hepatite B,
fngicas Haemophilus influenza type B (Hib).
 Exemplo de
Componente Funo Exemplo
vaacinas
Estabilizantes Proteo contra condies Gelatina, Glutamato 17D Febre Amarela,
adversas, congelamento, Monossdico (MSG) Raiva,Varicela
descongelamento,
aquecimento, mantendo a
potncia da vacina
Agentes inativadores Formaldedo Influenza virus,
Poliovirus,
-propiolactona
Diphtheria and
Glutaraldeido Tetanus toxins.
Rabies virus
Neomycin,
Antibioticos prevenir Acellular pertussis
Resduos do Streptomycin,
processo de contra contaminao Polymyxin B DTaP-IPV/Hib
fabricao bacteriana das culturas
Influenza, MMR
Protenas dos ovos
Influenza and yellow
Fluidos de suspenso de fever vaccines
microrganismos
Protenas de Vacina Hepatitis B
leveduras
 Controle de qualidade e liberao de lotes

Testes finais para a liberao do produto para comercializao

Teste Funo do teste

Esterilidade Demonstrar que no existem microrganismos vivos no produto
Pureza / Demonstrar que doses elevadas no proporcionam riscos sade
Segurana
Toxicidade Demonstrar que o produto no possui substncias que proporcionem
residual riscos
Potncia / Demonstrar que os antgenos do produto se enquadram em padres
Eficcia internacionalmente reconhecidos (quantidade e proteo)
Reverso da Emvacinas vivas, demonstrar que o microrganismo no apresenta
atenuao virulncia em passagens em aniamis de laboratrio

Interferncia Em produtos com 2 ou mais componentes antignicos, demonstrar que

antignica no h interferncia de componentes individuais na resposta protetora
dos outros componentes
Controle de qualidade

Garantia da qualidade