LABORATORIO DE QUIMICA ANALITICA - UNIVERSIDAD DEL VALLE

Juan Manuel Rodrguez cd.1628023 - juan.casas@correounivalle.edu.co

Angie Lorena Bustamante cd.1629336 - angie.bustamante@correounivalle.edu.co
Stiven Rogeles Morales cd.1628580 - stiven.rogeles@correounivalle.edu.co

06 de Mayo del 2017. Departamento de Qumica Universidad del Valle

La colorimetra se basa en la propiedad de determinadas sustancias solubles, de dar a un medio acuoso
coloraciones o tonalidades en relacin con el valor de su pH.

Las tcnicas colorimtricas se basan en la medida de la absorcin de radiacin en la zona visible por
sustancias coloreadas. Para aplicarlas hay que completar el equipo con una escala de colores, que permita
apreciar este valor por comparacin. Lo que mejor permite la comparacin es que esta escala de colores
tengan la misma calidad, es decir, que sean tambin soluciones; pero en este caso deben ser muy estables.

Todos los mtodos colorimtricos conocidos para la determinacin de fosfato son ligeros cambios en la
acidez y concentracin de los reactivos, y tienen presencia de sustancias interferentes (por ejemplo, fluoruros,
nitritos, etc.). Al realizar estos mtodos, La intensidad del color complementario transmitido es proporcional a
la concentracin de fosfatos.

Se va a realizar un experimento el cual es casi enteramente independiente de estos factores perturbadores, y

posee la ventaja aadida de ser ms sensible que los descritos anteriormente.
1) cido sulfrico 10 N (aprox.): 28% concentrado.

1) cido sulfrico 1N (aprox.): La solucin anterior diluida 10 veces.

1) Molibdato de amonio al 5%. Esta solucin debe guardarse en una botella, revestida interiormente con
cera de parafina, para prevenir la formacin de un compuesto de silicio de cido molibdico que produce
un color azul en reduccin.

1) Solucin de cloruro de estao : 10 g. Se disuelve el cloruro de estao en 25 ml concentrado con HCl

(se conserva en matraz mbar)

1) Solucin diluida de cloruro de estao: La solucin 4 se diluye 200 veces con la solucin 2 . Debe ser
fresco cuando se requiera.

1) Alcohol iso-butlico y etlico

1) Solucin de fosfato: 2.193 g. KH2PO4 en 500 ml de agua.

 Determinacin de fosfato en 10 mL de volumen total de fluido

- Para fsforos inorgnicos: Se miden 5 mL de sto en un embudo de decantacin y se aade lo siguiente:

0,5 ml de H2SO4 10 N, 2 mL de agua de destilada, 2-5 mL de molibdato de amonio al 5% y 10 mL de alcohol
isobutlico. Se agita durante 1 2 min y se desecha la capa acuosa. La solucin azul se vierte en un matraz
de 10 mL; El embudo de separacin se lava con alcohol etlico y la solucin se lleva hasta el enrase con los
lavados.

- Para fsforo inorgnico en fluidos biolgicos: Primero se eliminan las protenas mediante la adicin de
un volumen igual de cido tricloroactico al 12% y centrifugacin. A partir del lquido sobrenadante, se miden
5 mL en un embudo de separacin, y el procedimiento contina como se ha descrito anteriormente, con la
excepcin de que se aaden 0.3- 0.4 mL de H2SO4 10 N en lugar de 0.5 ml.

- Para el fsforo orgnico: A la muestra se le adiciona 1 mL de cido perclrico al 60% para la incineracin
del fsforo orgnico. La solucin incolora as obtenida se prepara hasta 5 mL y se somete a ensayo como se
ha descrito anteriormente, excepto que no se aade H2SO4 .
 Micro-determinacin de fosfato

Las siguientes sustancias se miden en un pequeo crisol por medio de micro pipetas: 0-0.5 ml de H2SO4 10
N, 0.25 mL de molibdato amnico al 5% y 0.5 mL de la solucin a ensayar. La mezcla se aspira en el
recipiente de mezcla, se enjuaga el crisol con 0.2 mL de agua de destilacin y sta se recoge tambin en el
recipiente, despus de lo cual se succiona 1 mL de alcohol isobutlico y se agita el recipiente, mantenindose
los extremos cerrados Con dos dedos. El procedimiento subsiguiente es similar al del macro-mtodo,
excepto que se usan aproximadamente 1 mL de H2SO4 10 N y 1 a 5 mL de agente reductor diluido
respectivamente y se completa el volumen final con alcohol etlico en un matraz de de 1 mL.

En la siguiente figura se muestra un recipiente de micro-mezcla adecuado para la micro-determinacin de

fosfatos, el cual consiste en un bulbo de aproximadamente 10 mL de capacidad con dos longitudes de tubos
capilares muy finos unidos. Uno de ellos est doblado y el extremo es molido hasta un punto fino, a travs
del cual se aspira el fluido dentro del recipiente, mientras que el otro se conecta a una embocadura mediante
un tubo de caucho.
 Con el fin de evaluar la utilidad del presente mtodo, se hicieron comparaciones con los dos mtodos
ms utilizados (Fiske- Subbarow y la de Kuttner-Cohen).

En cuanto a la sensibilidad y la intensidad del color desarrollado del presente mtodo, parra una cantidad
dada de fosfato se encontr que era al menos 4 veces mayor que la de Fiske y Subbarow, y del mismo
orden que la de Kuttner y Cohen

cuando sustancias pentavalentes, son actuados por un agente reductor en un cido, en presencia de
cido molibdico, se obtiene una solucin azul.

Los colores producidos por los otros mtodos mencionados tienen un tinte prpura, mientras que el
presente mtodo produce un azul mejor con mayor intensidad .
TABLA 1. Lmites de variacin seguros en la cantidad de reactivos

MTODO DE FISKE Y MTODO DE KUTTNER Y MTODO PRESENTE

SUBBAROW COHEN

REACTIVO CIDO
(H2SO4)
+200
30% 10% -90

MOLIBDATO DE AMONIO

+100
30 10 -90

CLORURO DE
ESTAO (AG.RED)
+100
30 30 -90
TABLA 2: Inhibicin de la produccin de color
Se realiz un mtodo mejorado para la determinacin colorimtrica del fosfato que consiste en la eliminacin
del cido fosfomolbdico reducible de la solucin acuosa por extraccin con alcohol butlico y su reduccin con
cloruro de estao. La cantidad de fsforo que se pudo determinar con precisin es de 1-100 por el mtodo
estndar y 0.1-1.0 por el micro-mtodo especialmente diseado, siendo as el mtodo de Fiske y Subbarow
casi completamente independiente de las sustancias interferentes.
 [1]. Berenblum & Chain (1938). Biochem. J. 32, 286.

[2]. Fiske and Subbarow (1925). J. biol. Chem. 66, 375.

[3]. King (1932). Biochem. J. 26, 292.

[4]. Kuttner & Cohen (1927). J. biol. Chem. 75, 517.