Anda di halaman 1dari 22

REKAYASA GENETIKA

PENGERTIAN REKAYASA GENETIKA

3
PROSES REKAYASA GENETIKA
TRANSFER VEKTOR
Cara memasukkan suatu gen ke dalam sel
melalui pembawa (carrier) khusus.
Vektor yang digunakan antara lain plasmid,
bakteriofag, kosmid, dan vektor ulang-alik
Secara kimiawi, vektor tersebut adalah
molekul DNA
SIFAT SEBAGAI VEKTOR MOLEKUL DNA
PLASMID
Contoh plasmid yang terdapat pada E. coli
misalnya pSC101 (58 M dal), ColE1 (4,2 M dal),
RSF2124 (7,4 M dal), Pbr322 (4363 kb), dan
Puc19 (2686 kb).
Plasmid terbentuk secara alami in vivo.
Rincian sifat dari tiga plasmid yang
terbentuk secara in vivo pada E. coli
PLASMID pBR322
Plasmid pUC19
BAKTERIOFAG
Bakteriofag yang banyak digunakan dalam
teknologi DNA rekombinan pada E. coli adalah
fag .
Berkenaan dengan derivat fag lebih dari 100
derivat yang dimanfaatkan sebagai vektor
Genom fag dalam kondisi tidak
sirkuler
KOSMID
Kosmid adalah vektor yang dibuat di
laboratorium dengan memanfaatkan urutan
cos dan fag yang berguna untuk pemasukan
kromosom ke dalam kepala fag dan yang
memanfaatkan pula urutan untuk fungsi
resistensi terhadap antibiotik serta replikasi.
Kosmid dirakit dari plamid dan fag ,
contohnya plasmid pBR322.
Bagan kromosom fag Bagan kosmid
VEKTOR ULANG-ALIK (SHUTTLE
VECTOR)
Vektor ulang alik adalah vektor pengklon
berupa plasmid khusus yang sudah direkayasa
materi genetiknya sehingga dapat
memasukkan molekul DNA rekombinan ke
dalam dua atau lebih makhluk hidup inang.
INJEKSI MIKRO DAN FUSI
PROTOPLAS
Injeksi mikro: menggunakan jarum
mikroskopis untuk memasukkan DNA melalui
membran sel sasaran termasuk ke dalam inti
sel.
Fusi protoplas: pelarutan dua membran sel
dari sel-sel yang berbeda sehingga dua sel
dapat digabung menjadi satu
ELEKTROPORASI & KOPRESIPITASI
KALSIUM FOSFAT DAN ENDOSITOSIS,
Pada teknik elektroporasi digunakan listrik
untuk menciptakan lubang kecil di membran
sel yang akan dimanfaatkan untuk
pemindahan DNA ke dalam sel
Teknik kopresipitasi kalsium fosfat dan
endositosis merupakan cara umum
memasukkan suatu DNA ke dalam sel-sel
mamalia, sekalipun tingkat keberhasilan teknik
antara 1-2%.
PROYEKSI MIKRO
Pada teknik proyeksi mikro, DNA ataupun
RNA ditembakkan ke dalam sel
Teknik ini merupakan suatu cara yang sama
sekali baru untuk memasukkan asam nukleat
ke dalam sel tumbuhan memanfaatkan
kecepatan tinggi.
Bagan senapan penembak proyektil
mikro yang berselubung DNA
PROSEDUR DASAR TEKNOLOGI DNA
REKOMBINAN
1

6
PERAN ENZIM ENDONUKLEASE
RETRIKSI
Enzim yang dibutuhkan untuk memotong
molekul DNA dalam teknik DNA rekombinan
Enzim retriksi dapat memotong molekul DNA
unting ganda pada urutan pasangan
nukleotida spesifik yang dikenal sebagai tapak
retriksi.
TIPE ENZIM RETRIKSI
Tipe I mengenali suatu urutan pasangan
nukleotida yang spesifik pada DNA dan
memotong DNA pada suatu tapak tidak
spesifik jauh dari urutan pasangan
nukleotidanya.
Tipe II memotong DNA justru di dalam urutan
pasangan nukleotida yang spesifik sehingga
bermanfaatan dalam pembentukan molekul
DNA rekombinan.
Contoh urutan pengenalan enxim
endonuclease restriksi (EcoR1) pada DNA
Enzim endonuklease retriksi tipe II memiliki sumbu simetri yang memiliki titik tengah
urutan pengenalan. Dalam hal ini urutan basa 5 -> 3 pada unting DNA sama dengan
urutan basa 5 -> 3 pada basement nya sehingga disebut twofold rotational symmetry.