Indice de contenido
Definicin
Elementos que intervienen en un anlisis
cromatografico
Tipos de cromatografa
Cromatografa
Fase Estacionaria
Fase Movil
Muestra
Como interaccionan?
En general, una cromatografa se realiza permitiendo que la
mezcla de molculas que se desea separar (muestra)
muestra
interaccione con un medio o matriz de soporte que se denomina
fase estacionaria.
estacionaria Un segundo medio (la fase mvil)
mvil que es
inmicible con la fase estacionaria se hace fluir a travs de sta
para "lavar" (elur) a las molculas en la muestra.
La fase estacionaria
Slidos muy porosos con capacidad adsorbente:
Gel de slice (SiO2); Almina (Al2O3)
La superficie del gel de slice interacciona con los
compuestos orgnicos mediante interacciones de
carcter polar, Puentes de hidrgeno,
Interacciones electrostticas.
Los compuestos ms polares interaccionan ms
fuertemente con la slica.
La fase mvil
En cromatografa de lquidos (columna, capa fina,
HPLC) la fase mvil es una mezcla de disolventes:
ELUYENTE
En cromatografa de gases la fase mvil es el GAS
PORTADOR
En el proceso de cromatografa la fase mvil fluye
arrastrando los compuestos que estn retenidos en la
fase estacionaria.
En cromatografa de lquidos la naturaleza del
eluyente tiene una gran importancia
ELUYENTES
Eluyentes polares:
Rompen ms eficazmente las uniones de los
compuestos con la fase estacionaria.
Arrastran ms rpidamente a los compuestos.
Eluyentes no polares:
No rompen las uniones de los compuestos con
la fase estacionaria.
Arrastran muy lentamente a los compuestos.
ELUYENTES
Para conseguir el poder de elucin deseado
se utilizan mezclas de disolventes
Descendente Ascendente
Cromatografa en Papel
Tcnica de mediana resolucin en el cual una mezcla de solutos sembrada
sobre papel de filtro logra separarse entre si basndose en:
El Rf de una sustancia
en el mismo soporte y
con el mismo
eluyente siempre
es constante: Rf A
(SiO2, Hex: AcOEt, 5:
1) = 0.47
Una propiedad que
permite identificar
sustancias en una
mezcla.
Cromatografa en Capa Delgada
FUNDAMENTOS
Cuando una solucin de solutos atraviesa el gel filtrante, las molculas de
menor tamao al del dimetro de los poros de las esferas penetran dentro de
las mismas debiendo recorrer mayor distancia que aquellas que no lo pueden
hacer (molculas de mayor tamao) retrasndose con respecto a estas y
escurriendo de la columna al final de la elucin.
elucin
De todos los geles, el mas usado es el
que resulta del entrecruzamiento de
Dextrano por la accin de la
Hepicloridina. Cuando este material
(Sephadex) es humectado se
transforma en gel, el volumen total (Vt)
que ocupar este gel en una columna
ser igual a la suma de Vo+Vi+Vg
O sea Donde
Vt= Volumen total
Vo= Volumen de lquido que ocupa los espacios extra
Vt= Vo+Vi+Vg esferoidales
Vi= Volumen de imbibicin de las partculas
Vg= Volumen de la matriz del gel
VENTAJAS
Disminuye el tiempo de anlisis, aun incluso en mezclas muy complejas
(productos biolgicos).
Permite el anlisis de sustancias termolbiles que no podran ser manejadas por
vaporizacin en un cromatgrafo de gases (se descomponen al vaporizarse).
Dilisis
Ultrafiltracin
Dilisis
Se utilizan membranas semipermeables de Colodion (nitrato de
celulosa) o Celofn con la particularidad de poseer poros de dimetro
estable y conocido lo que les permite actuar como verdaderos filtros
entre molculas de diferente tamao
Ultrafiltracin
Se basa en el mismo fenmeno que la dilisis pudindose utilizar
tambin membranas de colodion o celofn pero adems se utilizan
papeles de filtro, de nitrocelulosa o del tipo Millipore