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COLORACION DE GRAM

Vaginosis Bacteriana VB
Punteo de Nugent
Licda. María José Luna Boza

12 Agosto 2015

Información proporcionada por :Licda. Zandra Jiménez de Fuentes


Examen microscópico directo
 Con microscopio observamos morfología
bacteriana.
 Manera eficiente de estudiar presencia de
bacterias
 Aporta información útil para el diagnostico
 Contribuye a establecer la enfermedad
 Ayuda al tratamiento inmediato
Preparación del Frotis
 Portaobjetos esmerilados, limpios y
desengrasados
 Lápiz grafito para realizar identificación
de la muestra
 Rotar el hisopo de izquierda a derecha,
realizando 2 líneas paralelas sobre el
portaobjeto.
 No raspe el hisopo sobre el portaobjeto
Cont…
 Deje secar la muestra completamente al
aire
 Fije el frotis pasando tres veces el
portaobjeto con la muestra hacia arriba ,a
través de la llama de un mechero
 Dejar enfriar
 Aplicar tinción.
Reactivos para la coloración de
Gram
 Cristal violeta modificado por Hucker

 Lugol -Solución de Yodo de Gram.

 Alcohol-Acetona

 Safranina
TECNICA
1. Cristal violeta : 1 minuto
cubrir el frotis con cristal violeta
completamente, dejar reposar por un
minuto, enjuagar con agua corriente y
escurrir
1. Lugol : 1 minuto
cubrir el frotis con Lugol completamente,
dejar reposar por un minuto, enjuagar
con agua corriente y escurrir
cont…

3.Alcohol-Acetona (paso critico)


Aplicar gota a gota hasta que no salga más
cristal violeta, enjuagar con agua y escurrir
4.Safranina = 30 segundos
cubrir el frotis con Safranina dejar reposar por
30 segundos, enjuagar suavemente con agua
corriente, dejar secar al aire libre o en
incubadora, examinar al microscopio con lente
de inmersión (100X)
Principio de la reacción de tinción
1. El color violeta tiñe todas las bacterias de
violeta intenso
2. Lugol fija el color violeta más o menos
firmemente a las bacterias
3. Alcohol-Acetona decolora ciertas bacterias
cuando el Lugol no ha fijado firmemente el
cristal violeta, no decolora otras bacterias si el
Lugol ha fijado firmemente el cristal violeta.
4. Safranina tiñe de color rosa las bacteria que
han sido decoloradas, no tiene efecto sobre
las demás bacterias que quedan color violeta
oscuro.
Frotis
Principio
 “La muestra a examinar se extiende, en
capa fina, sobre un porta objeto, se deja
secar completamente , se fija por calor y
se colorea.”
Mecanismo de tinción basado en la
estructura y composición de la pared celular
 Bacteria con pared celular delgada y alto
contenido de lipidos aumentan porosidad
y permeabilidad dejando salir el complejo
cristal violeta-lugol:Gram negativo
 Bacteria con pared celular gruesa y bajo
contenido de lipidos disminuye
permeabilidad y no deja salir el complejo
cristal violeta-lugol:Gram positivo
Reporte o Informe
 Mencionar primero las bacterias
observadas, empezar por las más
frecuentes, indicar agrupación y cantidad
 Luego muy importante informar la
presencia de polimorfo nucleares y/o
linfocitos
 Indicar la presencia y cantidad de
levaduras o micelios de hongos, células
epiteliales
Causas de Error
 Reacción Gram positivo falsa:
-El frotis se fijo antes de estar seco
-El frotis quedo demasiado grueso
-El cristal violeta tenia sedimento
-El Lugol no escurrió completamente
-El alcohol –acetona no actuo suficiente
tiempo
-La Safranina se dejo por más tiempo
Causas de Error
 Reacción Gram negativo falsa:
No se dejo actuar suficiente tiempo el
Lugol
El alcohol-acetona se dejo demasiado
tiempo y no se lavó adecuadamente
Grupos de bacterias que pueden
observarse al microscopio
 Cocos Gram positivo en racimos, cadenas
pares, tetradas
 Diplococos Gram negativo en pares semejando
granos de café o formando racimos dentro del
citoplasma de un leucocito
 Bacilos Gram positivo con o sin esporas
 Bacilos y Cocobacilos Gram negativo
 Levaduras y actinomicetos
 Espiroquetas
Guía para puntaje en frotis para
VAGINOSIS BACTERIANA (VB)
Descrito de acuerdo al criterio Nugent
Glosario
 Célulaclave: célula a la que se le han
adherido bacterias, oscureciendo sus
bordes.
No se usan en el calculo numérico, pero
su presencia es un indicador de VB
Glosario
 Lacto bacilo: bacilo grueso Gram positivo

 Gram variable : bacilos delgado que


pueden ser positivos o negativos
(Gardnerella)
Bacilos curvos: bacilos delgados
de forma curva Gram negativo (
mobiluncos)

Levaduras en Semillas, gemando,


hifas)
TABLA N° 1
TABLA N° 2
Tabla para interpretar puntaje final
de VB
Tabla para reportar células clave y
semilla
TABLA N° 1 TABLA N° 2
HOJA DE PROTOCOLO PARA USO DE
LABORATORIO
Informe emitido al medico
 informe al medico deberá contener de la
siguiente información:
 Positivo, Intermedio o Negativo a Vaginosis
Bacteriana
 describir la presencia o ausencia de células
claves hifas ,levaduras y polimorfonucleares con
criterio de cantidad
Positivo a Vaginosis Bacteriana, Células Clave moderadas, ausencia
de Hifas y Levaduras, Polimorfonucleares Escasos

Intermedio a Vaginosis Bacteriana, Ausencia de Células Clave, Hifas y


Levaduras, Polimorfonucleares Escasos.

Negativo a Vaginosis Bacteriana, Ausencia de Células Clave, Hifas y


Levaduras, Polimorfonucleares Escasos
Flora normal habitual del tracto
genital
 Tracto genital femenino: varia de acuerdo al Ph
y a la concentración de estrógenos en la
mucosa, la cual depende de la edad de la
paciente
Mujeres prepúberes y postmenopáusicas
albergan principalmente Staphylococcus y
Corinebacterium
Mujeres en edad reproductiva pueden albergar
enterobacterias como
(E.coli,Klebsiella,Proteus)Streptococcus.Entero-
coccus,Staphylococcus,Lactobacillus
Flora cont…
 Los lactobacillus se asocian con un estado
saludable del epitelio vaginal.
 La uretra anterior tanto femenina como
masculina esta colonizada por Streptococcus
viridans,Staphylococcus coagulasa negativa
,corinebacterium y varios anaerobios.
 La vulva y el pene pueden alvergar
Mycobacterium smegmatis,proteus spp,y
bacterias Gram positivo
Flora patógena en la infancia
 Haemophilus influenzae, Streptococcus
pyogenes, Staphylococcus aureus,
Gardnerella vaginalis, flora anaerobia y
Mobiluncos
 en niñas Shigella flexneri causa
vulvovaginitis acompañada de sangrado
genital,sin embargo son muy pocos los
pediatras y microbiólogos que toman en
cueta este agente etiológico.
Niños
 Con uretritis purulenta: Streptococcus beta
hemoliticos principalmente A y
B,Staphylococcus aureus y Haemophilus
influenzae.
Agentes de Transmisión sexual
 Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis,
Haemophilus ducreyi, Clamydia trachomatis
 En niños y niñas es en su mayoría por abuso
sexual.
 Las muestras deben tratarse con sumo cuidado,
asegurándose que es verdaderamente del
paciente indicado
 Reportar todos los microorganismos aislados
debido a las implicaciones medico legales
 Tener muy en cuenta que este tipo de muestra
es irrecuperable
Infecciones del tracto genital en
edad adulta
 Todo individuo en edad adulta con vida sexual activa
puede adquirir infecciones por los siguientes
microorganismos, considerados de transmisión sexual:
-Chlamydia trachomatis (ITS claramente asociada a
enfermedad pélvica inflamatoria, infertilidad y
nacimientos pretermino)
-Gardnerella vaginalis
-Neisseria gonorrhoeae
-Micoplasma hominis
-Ureaplasma urealyticum
-otros de menor frecuencia.
Síndrome Vaginosis Bacteriana
(VB)
 Cuando es ocasionado por Gardnerella,
Bacteroides, Mobiluncos y otros
anaerobios suelen debutar con abundante
secreción vaginal de mal olor (olor a
pescado por las aminas presentes)
 Implicado en labor de parto prematuro y
bajo peso del recién nacido
Enfermedades que cursan con
secreciones vaginales y uretrales
 Gonorrea
-Mujeres va desde asintomática (uretritis, disuria,
poliaquiuria), hasta complicaciones sistémicas
(cervicitis que es la afectación del cuello uterino
es muy frecuente (leucorrea),salpingitis,
enfermedad inflamatoria pélvica, que puede
llevar a esterilidad)
 Dx. requiere cultivo además de tinción de Gram.
Enfermedades que cursan con
secreciones uretrales

 Gonorrea
- Hombres la uretritis cursa con secreción uretral
abundante y francamente purulenta, disuria e
irritación del meato urinario
- Dx.por medio de frotis teñido por
Gram,observando polimorfonucleares
abundantes y diplococos intra y extracelulares
en forma de granos de café.
Secreción vaginal en la mujer
adulta
 Infecciones de vulva y vagina son muy
frecuentes
 El examen de la secreción vaginal es muy
útil para determinar agente etiológico de
vulvovaginitis y vaginosis bacteriana
(condición no invasiva)
 Útil para detectar levaduras y
pseudomicelios
Agentes etiologicos de la infeccion
vulvovaginal
Agente etiológico Manifestación clínica Dx.Lab
Candida albicans prurito vaginal,flujo fresco
Candida glabrata blanquecino, espeso, Gram
inodoro, cultivo
Trichomonas prurito,irritacion va- fresco
Vaginalis ginal,flujo espumoso cultivo
gris/amarillo verdoso
Mobiluncos flujo homogéneo, fresco
Gardnerella pegajoso, blanco/ Gram
Bacteroides grisaceo,olor a pescado cultivo
Gracias!!!