PROTEÍNAS RECOMBINANTES

Alumno: Miguel Gakiya Teruya

Curso: Microbiología industrial
Profesor: Mg. Juan Carlos Woolcott Hurtado
 El descubrimiento de la estructura y el mecanismo de
replicación del ADN han permitido el desarrollo de
técnicas biomoleculares para su manipulación, gracias
a estos avances es posible sintetizar proteínas en
organismos en los que no se encuentran de manera
natural. A las proteínas producidas de esta manera se
les conoce como proteínas recombinantes (PR).
 Las PR pueden tener características estructurales y
funcionales muy similares a las proteínas naturales y
por lo general se producen con alta eficiencia. Sin
embargo, algunas PR no son funcionales o sufren
problemas de plegamiento, formando agregados
moleculares que se conocen como cuerpos de inclusión.
 La coexpresión con otras proteínas, como las
chaperonas o el uso de cepas modificadas para la
sobreexpresión, son algunas de las estrategias
utilizadas para evitar la formación de agregados.
Técnica de ADN recombinante : significaron una revolución para la
fabricación de este tipo de compuestos. Permite alterar los genes y
expresarlos de tal manera que se puedan obtener proteínas con
propiedades funcionales mejoradas o corregir defectos genéticos.
LOS VECTORES
 Los vectores son unidades de ADN que pueden
replicarse en forma autónoma y dentro de los
cuales pueden insertarse otros fragmentos de
ADN. Los vectores más comúnmente usados son
plásmidos que son moléculas de ADN circular
doble cadena extra cromosomal que se
encuentran en bacterias en forma natural.
 Los plásmidos naturales tienen la capacidad de
replicarse autónomamente y únicamente dentro
de la célula hospedadora adecuada. Estos
vectores poseen un tamaño pequeño que facilita
su entrada a la bacteria y además, habitualmente
portan genes que le confieren al la misma
resistencia a antibióticos como ampicilina.
ENZIMAS DE RESTRICCION
 Las enzimas de restricción, o endonucleasas de
restricción, reconocen secuencias de bases
específicas en el ADN doble hélice y cortan en
lugares concretos ambas hebras que contienen
las secuencias reconocidas.
 Las enzimas de restricción reconocen secuencias
específicas en el ADN de entre 4 a 8 pares de
bases e hidrolizan un enlace fosfodiéster en cada
hebra de la región reconocida.
 Con la ayuda de las tecnicas de ADN
recombinante algunas compañías farmacéuticas
han empezado ya la producción de polipéptidos
humanos por bacterias o levaduras. Un ejemplo
de estos polipéptidos producidos son hormonas
como la insulina, hormona del crecimiento,
glucagon, interferón, factores de la coagulación,
factor VIII, etc.
 El primer paso para lograr esta producción de
proteínas es el clonado de un ADN en un vector
de expresión. Un vector de expresión es un
plásmido que debe tener las secuencias que
permitan la transcripción y traducción del ADN
insertado en dicho vector permitiendo de esta
manera la expresión de la proteína.
 Para expresar una proteína humana en una
célula o sistema procarionte como la Escherichia
coli(E. coli) se necesita obtener la secuencia
codificante de dicha proteína. Esto se puede
realizar mediante la técnica de RT-PCR que
consiste en transcripción reversa y PCR. Se
obtiene el ADNc a partir del ARNm
correspondiente, por transcripción reversa y
mediante cebadores específicos se amplifica por
PCR la secuencia de ADN de la proteína de
interés.
PCR (REACCIÓN EN CADENA DE LA
POLIMERASA)
TRANSCRIPCION REVERSA
 Los ARN mensajeros (ARNm) transcriptos en un
tejido determinado pueden ser usados como
molde por la enzima transcriptasa reversa, la
cual produce una copia de ADN a partir del ARN.
A diferencia de los fragmentos de ADN clivados a
partir del genoma por enzimas de restricción, el
ADN producido por la transcriptasa reversa,
debido a que usa ARNm maduro como templado,
no contiene intrones.
 La aplicación de las técnicas de ADN
recombinante en la fabricación de insulina ha
disminuido sustancialmente el precio de dicha
hormona. Dicha insulina difiere ligeramente en
su secuencia de aminoácidos de la insulina
humana, y aunque la mayoría de dichas insulinas
controlan los principales síntomas del diabético,
pueden presentarse efectos secundarios, como el
deterioro renal y de la retina; y generar alergias
u otro tipo de reacciones inmunológicas.