Biologia Celular Laboratorial

Organização:
Experiências de protocolo: coisas a observar e espécie escpolhida
Explicar escolha da espécie
Explicar tipo de corte e zona escolhida
Explicar coloração escolhida
Explicar coisas a identificar
Notas: dicas
Anabaena
Parede e Matriz Extracelular Vegetal
Observação de paredes celulares
• Espécie: Ruscus sp. – ocorre lenhificação
• Corte: Transversal de caule
• Coloração/Preparação: NaClO (30 min) (remoção de cor?), água acética (remoção de lípidos), azul de toluidina
(lenhina – rosa/roxo e verde escuro; celulose – azul/verde)
• Identificações:
Caule – diferentes camadas (periferia para centro) – cutícula, epiderme, córtex (parênquima), parênquima e
esclerênquima, xilema e floema, pith (parênquima)

Observação de cistólitos
• Espécie: Ficus sp.
• Corte: transversal da folha: dos sítios em que tem mais cutícula, pois, é das zonas da planta mais em contacto
com a luz solar, a chuva e outros constituintes do ambiente exterior
• Coloração/Preparação: vermelho sudão (cora cutícula), etanol
• Identificações: cutícula, epiderme, parênquima lacunar, mesófilo (parênquima esponjoso), cistólito, litocisto,
pedúnculo
• Dicas p/ descrição: cutícula - adaptação é evidenciada pela diferença entre a cutícula da página superior e
inferior da folha (+ cutícula em cima)
 Xilema

Xilema

Floema
(Esclerênquima) Parênq
uima
Epiderme

Esclerênquima

Cortex
(parênquima)
Observação de
• Espécie:
• Corte:
• Coloração/Preparação:
• Identificações:
• Dicas p/ descrição:
ECM animal
Observação de Plasmólise e Desplasmólise
• Espécie: epiderme interna de uma escama do bolbo de Allium cepa: porque
são células de grandes dimensões e alongadas;
• Corte: destaque
• Coloração/Preparação: vermelho neutro (corar vacúolo) + sacarose (meio
hipertónico) + H2O (meio hipotónico)
• Identificações:
• Plasmólise: vacúolo, núcleo, parede, citoplasma, tonoplasto;
• Desplasmólise: “ + filamentos de Hecht, membrana plasmática, espaço periplásmico
• Dicas p/ descrição: coloração: cora vacúolo  distinção entre citoplasma e
vacúolo: evidência de que movimento de água se dá ao nível do vacúolo
Vacúolo

Observação de oxalato de cálcio

• Espécie: Ráfides: Alloe sp. (1); Drusas: Pelargonium sp.(2); Cristais prismáticos: Allium cepa(3);
• Corte: (1) longitudinal de folha; (2) destaque de epiderme da sépala; (3) destaque epiderme escama externa de bolbo;
• Coloração/Preparação: natural
• Identificações: parede, núcleo, ráfides, drusas, cristais;
• Dicas p/ descrição:
Observação de grãos de aleurona
• Espécie: Ricinus communis;
• Corte: corte transversal;
• Coloração/Preparação: azul de bromofenol, ácido acético, h2o
• Identificações: nothing special
• Dicas p/ descrição:
Observação de vacúolos corados (antocianinas)
• Espécie: Hibiscus sp.
• Corte: destaque epiderme adaxial de base da pétala;
• Coloração/Preparação: H2O + solução de nitrato de amónio ou hidróxido de sódio (solução alcalina)
• Identificações: same old, same old
• Dicas p/ descrição: referir antocianinas em vacúolo; Acumulação antocianinas é importante porque atrai polinizadores, assegurando assim a
perpetuação e expansão da espécie; meio mt alcalino: rutura de anel heterocíclico;
Observação de movimentos de ciclose
• Espécie: Elodea
• Corte: não há corte, folha: células são alongadas;
• Coloração/Preparação: nothing
• Identificações: cloroplastos
• Dicas p/ descrição: relacionar dimensões com movim. Ciclose
Observação de cloroplastos c/ pirenoides
• Espécie: Spirogyra
• Corte: sem corte
• Coloração/Preparação: Lugol (cora amido)
• Identificações: pirenoides (castanho) , cloroplasto (dimensão quase igual a
célula), parede
• Dicas p/ descrição:
Plastos
Observação de leucoplastos e cloroplastos
• Espécie: Tradescantia
• Corte: destaque epiderme de caule
• Coloração/Preparação: h2o + lugol
• Identificações: leucoplastos, núcleo, cloroplastos, estoma
• Dicas p/ descrição:
Observação de amiloplastos
• Espécie: batata
• Corte:
• Coloração/Preparação: h2o + Lugol (cora amido)
• Identificações: grãos de amido simples, semi-compostos e compostos, estrias, hilo, parede celular
• Dicas p/ descrição:
Observação de cromoplastos
• Espécie: Pyracantha e cenoura
• Corte: destaque epiderme fruto; transversal raiz
• Coloração/Preparação: h2o + lugol; h2o + NaOH; cenoura: h2o + lugol
• Identificações: cromoplastos fibrilhares e globulares, coroa de cromoplastos à volta de núcleo, parede, núcleo
• Dicas p/ descrição:
Observação de
• Espécie:
• Corte:
• Coloração/Preparação:
• Identificações:
• Dicas p/ descrição:
 Total de cenas identificadas
Cutícula
• Constituído por cutina – insolúvel, lipófila
• Função: regular hidratação, limita lixiviação de chuva, defesa, impermeabilidade
• Cutícula frequentemente coberta por ceras - aumentam a impermeabilidade da epiderme
• Tricomas – células epidérmicas; função protetora (tricomas de cobertura) ou secretora (tricomas glandulares) (essência secretada é acumulada entre a parede celular e a cutícula – espaço sub-cuticular);
• Local: epiderme;

Impregnação de carbonato de cálcio

• Observam-se nas folhas de Ficus elastica e de Humulus lupulus; Acanthaceae, Curcurbitaceae; famílias Moraceae e Urtica; Momordica
• Litocisto (acumulação de carbon. Ca), cistólito (célula especializada com litocisto), pedúnculo;

Oxalato de cálcio: resposta a excesso de Ca no exterior; defesa contra herbivorismo

• Drusas: epiderme da sépala; folhas e caules;

• Ráfides
• Mecanismo de defesa contra predadores
• Localizados em células especializadas – idioblastos; Pistia e Colacasia; parênquima de folhas

• Prismas
• Epiderme de bolbo
• 1 em cada célula, geralmente;
• Folhas Nerium oleander e Cynanchum acutum;

• Leucoplastos – epiderme, tricomas glandulares, raízes, bolbos, tubérculos;

• leucoplastos diferenciados não têm ribossoma; membrana interna do invólucro pode invaginar-se, formando um reticulado interno.
• Atenção: leucoplastos em tricomas glandulares possivelmente participam na secreção de óleos essenciais e resinas;
• FAZER DESENHO COM TRICOMA E ZONA TIPO COM LEUCOPLASTO E FAZER DESCRIÇÃO

• Amiloplastos - caules subterrâneos, raízes tuberculosas e sementes

• Abordar polimorfia e grande diferença de dimensões em descrições
• Tonalidade com reagente Lugol é determinada por proporção entre amido e amilopectina

• Cromoplastos - xantofilas (amarelo), carotenos (laranja), licopenos (vermelho)

• células epidérmicas de pétalas(gladíolos, amores-perfeitos, chagas, túlipas, calêndulas), pericarpo de frutos (tomate, fruto da roseira), raízes tipo cenoura
• Fibrilhares – carotenos, licopenos; globulares - xantofilas

• Mitose e Meiose

• Pirenóides

• Cloropl Movimentos de ciclose astos:

• Células de grandes dimensões;
• Cloroplastos;
• Parênquima
• Informação base:
• Função:
• Local:
• Zonas de identificação:
• Esclerênquima
• Informação base:
• Função:
• Local:
• Zonas de identificação:
• Anabaena
• ECM animal - Cartilagíneo: condrócitos, lacuna, rede polisacarídica gelificada; Ósseo: osteócitos, rede gelificada com fosfato de cálcio; Conjuntivo: fibroblastos, fibras de colagénio
e elastina; Epitelial: tecido colunar ou pavimentoso;
• Plasmólise: parede, vacúolo, tonoplasto, citoplasma, núcleo, filamentos de Hecht – prolongamento de plasmodesmos, espaço periplásmico, membrana
• Grãos de aleurona
• Antocianinas - vacúolo
• Dfd
• Informação base:
• Função:
• Local:
• Zonas de identificação:
Zonas de interesse
• Raíz: ráfides,
• Caule: drusas, amiloplastos
• Folha: drusas, ráfides
• Frutas: ráfides, cromoplastos, amiloplastos;
• Semente: grãos de aleurona, amiloplastos;
• Tubérculos: amiloplastos;
• Bolbos: células alongadas, cristais prismáticos, movimentos de
ciclose;
Corantes
Lugol

• Pirenóides: amido - castanho;

• Cloroplastos;

• Amiloplastos: amido – azul escuro/preto;

• Cromoplastos;

Eppendorf

• Ácidos nucleicos;

Azul de Toluidina

• Distinção lenhina e celulose;

• ECM animal;

Vermelho Sudão IV

• Cutícula;

Vermelho Neutro

• Conteúdo vacuolar;

Azul de Bromofenol

• Grãos de aleurona: azul claro;

Orceína acética

• Cromossomas: vermelho

Reagente de Schiff

• Polissacáridos: rosa

Vermelho Sudão III

• Lípidos: vermelho;
• Descrição paredes celulares:
Introdução: células de caule globulares com
diferentes dimensões cujas paredes têm espessuras
diferentes; observação de parênquima e esclerênquima;
Desenvolvimento:
Externamente: Epiderme com cutícula, células compactas; Parênquima a constituir o
córtex, menor densidade celular e células de maiores dimensões em comparação à epiderme,
células com cor roxa (natur. Celulósica);
No centro: vasos condutores: paredes mais espessas; xilema (esclerênquima): cor verde –
natureza lenhificada; vasos mais largos; floema (parênquima): cor azul – natureza celulósica; vasos
mais delgados
Medula: parênquima: cor roxa – natureza celulósica;
Conclusão: lenhificação dos vasos xilémicos permite transporte de água e confere estrutura e
rigidez à planta
 A observação feita foi de um corte transversal da folha de Ficus sp.. O corte
observado constitui diferentes camadas com células de diferentes dimensões.
Na zona externa inferior e superior, é possível observar a cutícula corada
graças ao Vermelho Sudão IV e células epidérmicas, relativamente achatadas e
compactas umas às outras.
Mais internamente à epiderme, está presente o parênquima em paliçada na
zona superior, cujas células constituintes são alongadas, e o parênquima esponjoso
na zona inferior, no qual a matriz extracelular tem um maior volume.
A cutícula da face superior da folha é mais espessa do que a cutícula da
face inferior da folha, pois, está mais exposta a condições desfavoráveis do
ambiente exterior.
No parênquima em paliçada, estão presentes impregnações de carbonato
de cálcio que formam o litocisto em células especializadas, cistólitos.
Tricomas
• Definição: expansões epidérmicas pluricelulares;
• Tipos: proteção e glandulares;
• Proteção: proteção epiderme e células estomáticas; dissuadores de
herbivoria
• Glandulares: associados a leucoplastos cuja função de síntese de
óleos essenciais; Óleos essenciais dão aroma a plantas  atração de
polinizadores;
 Structures and distributions of glandular trichomes in Vitis. (A–C) Glandular trichomes of V.
romanetii: (A) glandular trichomes on stems; (B,C) structures of glandular trichomes and simple
trichomes on the epidermis of stalks of glandular trichomes (arrow). (D,E) Glandular trichomes
on the stems of V. adenoclada: glandular trichomes on stems and some of these trichomes form
complexes (arrow) (D). (F–H) Glandular trichomes of V. chunganensis: glandular trichomes on
basal parts of veins of abaxial leaf surfaces (F) and nodes (H). (I,J) Glandular trichomes on stems
of V. shenxiensis. Abbreviations: e, epidermal cells; p, parenchymatic cells; h, head; s, stalk. Scale
bars: (A,D,F,H,I) = 1 mm; (B,C,E,G,J) = 100 μm.

• SEM micrographs of ribbon and simple trichomes. (A,B) Ribbon trichomes on abaxial leaf surfaces of a young leaf in V. wilsoniae. (C–
F) Simple trihcomes: (C) young simple trichomes on veins of V. romanetii; (D,E) simple trichomes on veins of young leaves in V.
davidii; (F) simple trichomes on adaxial leaf surfaces of V. retordii. Scale bars: (A) = 500 μm; (B,E) = 50 μm; (C) = 20 μm; (D,F) =100 μm.
• SEM micrographs of glandular trichomes of Vitis. (A,B) Glandular trichomes and μm; (I) = 50 μm.
simple trichomes on abaxial leaf surfaces (A) and petioles (B) of V.
romanetii. (C) Simple trichomes on the epidermis of stalks of glandular trichomes
of V. romanetii. (D) Trichome complexes of glandular trichomes (arrow) of V.
romanetii. (E) Complexes (arrow) of prickles on petioles of V. davidii. (F) Glandular
• SEM micrographs of development of glandular trichomes of V. romanetii. (A–C)
trichomes with hooked stalks on stems of V. adenoclada. (G,H) Emerging cell
masses (G) and a glandular head without stalk and an obvious stoma (arrow) on the Glandular heads without apparent stalks. (D) Young glandular trichome with
top of glandular head (H) in V. shenxiensis. (I) A glandular trichome on nodes of V. short stalk. (E) Mature glandular trichome with long stalk. Scale bars: (A) = 20
chunganensis. Scale bars: (A,B,E) = 500 μm; (C) = 100 μm; (D,F) = 200 μm; (G,H) =20 μm; (B) = 50 μm; (C) = 20 μm; (D) = 50 μm; (E) = 100 μm.
Plastos
bicamada lipídica, próprio genoma, ribossoma 70S
Leucoplastos: Plasto, não tem ribossoma 70S, 2 membranas, sem pigmentos; pode conter amido
Amiloplastos: leucoplastos com grãos de amido
Plastids found in nongreen cells that convert sugar into starch granules stored for future energy use.
Tipos: Em fase de transição: não estão cheios
Permanentes: estão cheios de amido
Observações: grãos de amido: estrias, hilo;
Cromoplastos: plastos com pigmentos
Tipos: globulares e fibrilhares;
Pigmentos: carotenos (laranja), licopenos (vermelho), xantofilas (amarelo)
Cloroplastos: pigmentos, grana;
Vacúolo
Antocianinas – pigmentos; 2 núcleos benzénicos ligados a anel heterocíclico
central; perda cor: rutura anel heterocíclico; cor depende de pH; ácido:
vermelho, básico: azul; nível de vacúolo; atração polinizadores
Grãos de aleurona – resulta de desidratação de vacúolos com substâncias de
reserva acumuladas em sementes muito desidratadas;
Observações: cristalóide (azul + escuro): proteína em estrutura cristalina;
susbt. fundament.(azul – escuro): proteína estrut. amorfa; Globóide
(incolor): sal;
OC:
• Ráfides - folha
• Drusas - incolor;
• Prismas – encostado a parede, única estrutura rígida;
Mitose e Meiose
• Reagente de Loeffler/Corante de Newman-Lampert – geral azul
• Vermelho Sudão III/Vermelho Sudão – lípidos
• Soluto de Lugol – amido
• Azul Mercúrico de Bromofenol – proteína azul
• Orceína acética – cromossomas vermelho
• Reagente de Schiff – polissacáridos rosa
• Azul de Toluidina – celulose – roxo; lenhina – verde/azul; polissacáridos
rosa; rosa azulado – matriz com + proteoglicanos; áidos nucleicos – violeta
• Vermelho Neutro – conteúdo vacuolar
• Reagente de Lofler/Corante de Newman-Lampert – geral azul
Vacúolo: Vermelho Neutro
Lípidos: Vermelho Sudão III/Negro Sudão
Lenhina: Carmim aluminado/verde iodo/Azul toluidine
Polissacáridos: azul de toluidina; Lugol; reagente de Schiff
Ácidos nucleicos – orceína acética/azul de toluidina
Proteína – azul mercúrico de bromofenol
Tudo de Laboratório – teórica + descrição
Corantes
Iluminação de Kohler
Verificar legenda microscópio
Eletrónica – ver parte teórica
Identificar componentes de célula: núcleo (eucromatina, heterocromatina, nucléolo, invólucro),
mitocondria (cristas, membranas), cloroplastos(tilacoides, grana, amido), RE, complexo de Golgi
(face cis e trans, vesículas), parede, plasmodesmos, membrana, vacúolo, peroxissomas,
leucoplastos, amiloplastos, cromoplastos, tricomas, estomas, citoesqueleto, matriz (colagénio,
elastina);
Relacionar variação componentes com especialização célula
Rever tipos de células ósseas e variação de matriz
Rever procedimentos feitos e perceber passos
Assinalar pontos cruciais em cada tópico
• Reagente de Loeffler/Corante de Newman-Lampert – geral azul
• Lenhina – verde iodo/carmim aluminado/azul de
toluidina/floroglucinol (meio acido)
• Polissacáridos – azul de toluidina/reagente de Schiff
• Cutícula – Vermelho Sudão III/Negro Sudão
• Ácidos nucleicos – Azul de toluidina/Orceína acética
• Amido – Lugol
• Proteína – Azul Mercúrico de Bromofenol
 Lenhina
Definição: Impregnação de parede celular
Constituição: natureza fenólica, lipófila; Local: esclerênquima;
Função: impermeabilização: proteção e condução seiva bruta;
Processo: lenhificação consiste na maturação de células esclerênquima que
perdem funções vitais, células mortas, cuja função é transporte vascular;
Corante: Azul de toluidina
Descrição: Nesta experiência, foi observado um corte transversal do caule de
uma planta vascular. No caule estão presentes diferentes tipos de tecidos
com células diferentemente especializadas e diferentes dimensões.
À periferia, está a epiderme simples com cutícula
Observações
• Corte transversal folha: cutícula, câmara estomática, cistólito, ráfides
• Corte transversal caule: lenhina, prismas e drusas (córtex)
• Corte transversal semente mt desidratada: grãos de aleurona
• Corte transversal tubérculo: amiloplastos e leucoplastos
• Pericarpo tomate: cromoplastos + antocianinas
• Preparações definitivas ECM
• Raíz bolbo: mitose
• Espirogira
• Grãos de polén: meiose
• Superfície folhas (EM): tricomas glandulares
• Observação de escama de cebola, irrigação vermelho neutro: plasmólise, ciclose
 Núcleo
• Eucromatina – menos densa; ocorre transcrição de genes
• Heterocromatina – mais densa; não ocorre transcrição de genes;
• Nucléolo – síntese de rRNA
Interfase:
• G0 - diferenciação
• G1 – crescimento organitos; aumento volume citoplasma
• S – replicação DNA;
• G2 – divisão organitos (mitocôndrias); formação de fuso acromático; divisão de centríolos e deslocação p polos
• Mitose
• Profase – condensação cromossomas, desaparecimento nucléolos e invólucro nuclear, formação microtúbulos do fuso acromático; espiralação cromossomas; alinhamento cromossomas;
• Metafase - centrómeros são duplicados
• Anafase - ascensão dos cromossomas; início citocinese;
• Telofase
Meiose
• Profase I
• Metafase I
• Anafase I
• Telofase I
• Profase II
• Metafase II
• Anafase II
• Telofase II