Permeabilización con Detergentes

Este método de lisis celular consiste en la solubización de lípidos en la

membrana celular, aun pH alto con un agente alcalino, en presencia de un
detergente. Siendo el papel del detergente solubilizar la membrana
celular, eliminando las interacciones interfaciales no covalentes entre
proteínas y lípidos, provocando la liberación de todos los componentes
intracelulares.

Detergentes mas utilizados:

-Detergente aniónico: Liberan una carga negativa (anión) en solución acuosa.

-Detergente catiónico: Liberan carga positiva en solución acuosa.
-Detergente no-iónico: Carecen de carga por no disociarse en agua
 Ejemplos de Detergentes aniónicos:
• Dodecil Sulfato de Sodio (SDS)
• Sulfanato de Sodio
• Colato de Sodio

Ejemplos Detergentes Catiónicos:

• Bromuro de Catiltrimetil Amonio (CTAB)

Ejemplos Detergentes no iónicos:

• Trito X-100
• Tween
• Spam
Consideraciones:
• A bajas concentraciones no se produce la degradación de
lípidos.
• Si está a alta concentración se produce una degradación que
resulta lineal a la concentración de detergente, junto a una
variable que altera la tensión superficial de la solución.
Procedimiento

1- Se coloca un determinado volumen de detergente concentrado por un volumen

de células. Generalmente la mitad de volumen de detergente por volumen de
células.

2 - El detergente rompe la membrana celular

3 - La suspensión resultante se centrifuga para remover fragmentos de células y se

pasa por una serie de etapas de extracción para aislar el producto.
 Ultrasonificación
Se realiza por medio de frecuencias de >20 KHz produciendo una
serie de vibraciones que provocan el fenómeno de cavitación.
La cavitación es un fenómeno físico, mediante el cual un líquido,
en determinadas condiciones, pasa a estado gaseoso y unos
instantes después pasa nuevamente a estado líquido.
-Se produce en zonas de baja presión en el liquido
-El liquido se transforma en gas formándose pequeñas burbujas
-Las burbujas colapsan debido a los cambios de presión
-Se producen fuertes esfuerzos de corte en el liquido que
rompen las células

Desventajas
• Producción de radicales libres
• Destrucción de producto por ondas
• Destrucción por temperatura
• Altos niveles de energía
• Altos costos