Espectrometría

de Masas
 Referencia: Siuzdak Gary,

Cronología de la EM
Mass Spectrometry for
Biotechnology. Academic
Press, Inc., USA, 1996

Investigador (es) Año Contribución

J.J. Thompson 1912 Primer espectrómetro de masas

Dempster 1918 Electro-ionización y enfoque magnético

Stephens 1946 Analizador de Tiempo de Vuelo (TOF)

Nier-Johnson 1952 Instrumentos de doble enfoque

Paul, Steinwedel, 1953 Analizador cuadrupolar

Raether, Reinhard y
von Zahn -58
1955 Diseño avanzado del analizador de tiempo
Wiley y McLaren de vuelo (TOF)
Gohlke y 1956 Cromatografía de Gases/Espectrometría de
McLafferty Masas
Beynon 1956 Espectrometría de Masas de alta resolución

Munson y Field 1966 Ionización Química

Cronología de la EM

Investigador (es) Año Contribución

Dole, Mack, Hines, M. Ionización por

Ferguson y Alice 1968 Electro-spray (ESI)

McLafferty Cromatografía de
1973 Líquidos/Espectrometría
de Masas
Barber, Bordoli, Sedgwick, Bombardeo de
Tyler, Surman y Vickerman 1981 átomos rápidos (FAB)

Blakely y Vestal Ionización por

1983 Termo-spray

Yamashita, Fenn, Aleksandrov, Aplicación de la

Gall, Krasnov, Nikolaev, 1984 ionización por Electro-
Pavlenko, Shkurov, Dokl,
spray (ESI) en
Baram y Garacher
macromoléculas
Cronología de la EM
Investigador (es) Año Contribución

KARAS, BACHMANN, BAHR, Ionización MALDI (Matrix

HILLENKAMP, TANAKA, WAKI, 1987-1988 assisted laser desorption)
IDO, AKITA Y YOSHIDA

HENRY, WILLIAMS, WANG, E. Masas por Electrospray y

McLAFFERTY, 1989 resonancia de ion ciclotrón
SHABANOWITS Y HUNT

KATTA Y CHAIT Observación de cambios

1990 conformacionales de proteínas
ionizadas por electrospray

HENNION, GANEM, Complejos no covalentes

CHAIT Y KATTA 1991 observados con ionización
por electrospray
CHAIT, WANG, BEAVIS Y KENT Secuencia en proteínas con
PIELS, ZURCHER, SAHCR, MOSER, MALDI
1993
Secuencia en oligonucleótidos
FITZTGERALD, ZHU Y SMITH
con MALDI
J. J. Thomson, 1912
Joseph John
Thompson, 1912
Ventajas de la
Espectrometría de Masas
Capacidad de Identificación
Identificación inequívoca de casi cualquier tipo de substancia, desde átomos hasta
moléculas complejas de peso molecular elevado
Análisis cualitativo y cuantitativo
Identificación de una substancia en presencia de otras similares
Alta sensibilidad
Técnica universal y específica
Información isotópica
Información estructural, energías de enlaces, cinética,
fisicoquímica, etc.

Técnica rápida (análisis en línea en tiempos reales, control de

procesos enzimáticos, metabólicos, etc)
¿Por qué es importante la
Espectrometría de Masas?
Porque es una técnica analítica poderosa
utilizada para:
 Identificar compuestos químicos
 Cuantificar compuestos químicos
 Proveer información válida en áreas como la
química, física, astronomía, geología,
biología, criminalística, etc.
Algunas aplicaciones específicas
de la Espectrometría de Masas:

 Detectar e identificar el uso de fármacos de

abuso en atletas (antidoping)
 Detección de compuestos de tipo esteroidal
en productos cárnicos (beta-adrenergicos)
 Determinar capsaicina en productos
naturales.
Algunas aplicaciones específicas
de la Espectrometría de Masas:
 Caracterización de compuestos volatiles y
semivolatiles en mezcal y tequila
 Monitorear fermentaciones en línea
(industria biotecnológica, cervecera)
 Detectar contaminantes orgánicos en aire,
agua, suelo y alimentos
 Caracterización de compuestos volátiles y
semivolátiles relacionados con el aroma
en chiles
INTRODUCCIÓN
EM Diagrama General

Sistema Sistema
de entrada de Cómputo

Cámara
de Detector
Ionización Analizador

Sistema de Alto Vacío

 Componentes principales de un
Espectrómetro de Masas
 Sistema de bombeo
 Sistema de entrada
 Fuente de Iones (Cámara de Ionización)
 Óptica Iónica
 Analizador Másico
 Detector
 Línea de transferencia (CG-EM)
Sistema de Bombeo
Tipos de Bombas de Vacío
Sistemas de Entrada

• Mezclas
 Cromatografía de Gases
 Cromatografía de Líquidos
 Electrocromatografía
 Electroforesis Capilar
 Extracción de Fluídos Supercríticos
Tipos de Ionización

Ionización en
Fase Gaseosa:

Electroionización (EI)
Ionización Química (CI)
IONIZACIÓN
ELECTRÓNICA
CÁMARA DE IONIZACIÓN
Ionización Electrónica
 Las moléculas de la muestra son ionizadas
por un haz de electrones (70 eV)
 Los iones son expulsados de la cámara y
dirigidos al analizador
 Se producen iones positivos y negativos:
90%
M. + 2 e-
- +
10% M+e
-.
M+ e- M
Ionización Electrónica

Excitación electrónica (similar a la teoría de UV) en

orden decreciente se ionizan preferentemente
los electrones:
n > p > s
.. .+
n R-O-R R-O-R
p R-CH :: CH-R R-CH : +. CH-R
s R-CH 2 : CH 2-R R-CH 2 . CH 2 -R
+
Ionización Electrónica

 70 eV de energía
 Produce el Ion Molecular y una gran cantidad de
iones con diferentes estados de energía
 Aquellos iones con gran cantidad de energía
interna (vibracional, rotacional y electrónica)
liberan esta energía por medio de la
fragmentación
Ionización Electrónica

 Los iones con baja energía permanecen

intactos (Ion Molecular)
 Es la técnica de ionización más común
 Es la técnica de ionización de la que se
obtiene más información
Ionización Electrónica

 Todas las bibliotecas comerciales disponibles

están basadas en los espectros obtenidos por
esta ionización
 Es la ionización que más se utiliza con el
sistema CG-EM
¿CÓMO SE GENERA UN
ESPECTRO DE MASAS POR IE?
Filamento

Analizador Detector

Cámara de Ionización

Espectro de Masas m/z

Ionización Electrónica
Metanol (CH3OH, P.M. 32)

12C 31
16O
29 32
1H

13C

15
30
17 33
Espectro de Masas por IE

Intensidad
(%)

Masa
Espectro de Masas por IE

? M-29

? 71 57 43 29

? 39 53 67 81
M-15

1-Octino
C8H14
P.M. 110
Análisis Elemental
(Combustión-Reducción)

La información obtenida
se reporta como
porcentajes de
elementos (C, H, N, S, y
O). Hay rompimiento
de todos los enlaces
Análisis por Espectrometría
de Masas

En Espectrometría de
Masas la energía
impartida por el haz de
electrones a la molécula
rompe algunos de los
enlaces. Porciones
grandes de la estructura
de la molécula
permanecen intactas
permitiendo la
identificación del analito.
Ionización Química

 Es una técnica de ionización

significativamente más suave que IE.

 Se utiliza cuando en el espectro por IE no

aparece el ion molecular, para confirmar el ion
molecular o para aumentar la intensidad de
algunos iones fragmento a masas altas.
Ionización Química

 Se utiliza un gas reactivo (metano, isobutano,

amoníaco, etc.) que es ionizado por IE. Los
iones resultantes reaccionan con las moléculas
del analito que se encuentran en la fuente, con
transferencia de carga (protón) las moléculas
neutras del analito se transforman en iones.
Ionización Química

 Algunos iones moleculares son demasiado

inestables para permanecer intactos aún
utilizando esta técnica.
Ionización Química
Reacciones

CH4 + e - CH4
+ . + 2 e-

. +
.
CH4+ + CH4 CH5 + CH3
+
CH5 + M MH +
+ CH4
analito Protonación
Ionización Química
Ejemplo

IE IQ

Malatión
(Pesticida)
P.M. 330
ANALIZADORES
 El objetivo del analizador de masas es resolver los iones
después de que fueron formados en la fuente de
ionización.
 La diferencia entre GC/MS y LC/MS son las técnicas de
ionización utilizadas (no el analizador)
 Analizadores más utilizados:
Sector Magnético
Cuadrupolo
Trampa de Iones
Tiempo de Vuelo
Sector Magnético

Magneto

Cámara
Cámaradedeionización
Ionización

Detector
Sector Magnético

•Ventajas:
–Excelente resolución de masa
–Excelente exactitud de masa
–Excelente sensibilidad

•Desventajas:
–Precio: Sistemas de alto costo
–Adquisición espectral lenta
(tiempos de análisis largos)
Cuadrupolo
Cuadrupolo
Un valor
de m/z
sale

-
+
Todos los
valores de m/z +
entran -

Separación basada en la estabilidad del valor de m/z dentro

de los campos de RF y CD sobre las barras cuadrupolo
Cuadrupolo
 Cuadrupolo
•Ventaja:
–Precio: un sistema muy accesible del mercado
–Poco mantenimiento
–Limite bajos de deteccion cerca de ppbs

•Desventajas:
–No resuelve Isomeros
Trampa de
Iones
 Trampa de Iones
•Ventajas:
–Limites bajos de detección
–MS/MS
•Desventajas:
–Reacciones ion-molécula.
–Rango de masas limitado
–Mayor mantenimiento que Cuadrupolo
Tiempo de Vuelo (TOF)
Con Reflectrón
Cámara de Espejo de Iones
ionización (Reflectrón)

Detector

•Los iones con mayor energía cinética penetran más el espejo de iones
•Los iones recorren el doble de la distancia del tubo de vuelo
Tiempo de Vuelo (TOF)
•Ventajas:
–Potencial para rangos de masas más grandes
–Buena resolución y exactitud de masas
–Excelente sensibilidad
–La mas rápida adquisición espectral (los tiempos más cortos
de análisis)
•Desventaja:
–Precio: tiende a ser más caro que los
sistemas cuadrupolares y algunas trampas
de iones pero menos costoso que los de
sectores
Sistema CG/EM

En el sistema MS las abundancias de los iones permanecen

constantes a través de todo el pico cromatográfico. Esto es la clave
de los algoritmos automatizados que permiten “descubrir”
señales de compuestos que coeluyen.
Algoritmo de Detección
Automática de Picos

El software identifica automáticamente las posiciones de los picos

en el cromatograma aún aquéllos que esten bajo la línea base.
Enmascaramiento y Coelución

Propylene Glycol
Enmascaramiento y Coelución
Enmascaramiento y Coelución
Enmascaramiento y Coelución
Enmascaramiento y Coelución
Enmascaramiento y Coelución
Enmascaramiento y Coelución
Enmascaramiento y Coelución
Malas condiciones, mala resolucion
 M+. M+.

Detectores
M+. M+.

Fotomultiplicador

Channeltron

Dínodos contínuos
Detectores

Channeltron

Fotomultiplicador MCP (Micro-Channel Plate)

Sensibilidad

• Es una medida de la respuesta del

instrumento para iones de un compuesto
en particular
Sensibilidad

• Indica el valor de la corriente iónica

detectada en el colector
• Siempre debe estar referida a un
compuesto determinado (relación señal-
ruido)
Sensibilidad

• Disminuye al aumentar la resolución y la

velocidad de barrido
• Está determinada por la eficiencia de la
ionización, eficiencia de la transmisión y
respuesta del detector
Sensibilidad de los
Detectores para CG
DETECTORES