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Por: Bárbara Paula e Hemerson Pataxó
INTRODUÇÃO
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LEITE Cromatográficas e
Electroforéticas
RP - HPLC
Água, proteínas,
lactose, gordura α-lactalbumina (α-La) e β-
e compostos caseína (β-CN),
inorgânicos lactoglobulina (β-lg),kappa-
caseína (κ-CN) e αS -caseína
(αs-CN) 4
METODOLOGIA
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Preparo de Amostra
*:acetonitrilo, água e ácido trifluoroacético numa proporção de 100: 900: 1 (v / v / v). **: acetonitrilo, água e ácido trifluoroacético numa proporção de
900: 100: 1 (v / v / v).
Preparo de Amostra
Diluiu 2 mL de amostra O sólido foi acidificado com
em 20 mL Água com tampão de sódio/acetato
Amostras de leite in
tampão sódio/acetato com 1,0 µmol L-1 (pH 4,3)
natura e pasteurizado
pH 4,3 seguido de seguido de nova
centrifugação. centrifugação.
Às fracções de caseína
dissolvidos das amostras de Após pré-
Ao sólido novamente adicionou-se leite foram diluída em tratamento as
tampão de fosfato e a mistura foi diferentes soluções amostras foram
dissolvida num sonicador. (tampão fosfato; tampão injetadas em RP-
fosfato 0,1% TFA e mistura HPLC. 7
das soluções A e B)
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Comprimento de onda de
Fluxo 1,0 mL/min
detecção 220 nm
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Figura 1 - Os cromatogramas das caseínas obtidas do leite in natura diluídos com a mistura de
solventes A e B (70:30) (a), diluição com tampão de fosfato (b), e leite pasteurizado diluídos nas
soluções A e B (70:30) (C), diluição com tampão de fosfato (d). identificações de pico são 12
lactoglobulina.
Figura 3. Cromatograma de proteína do soro do leite diluição com solvente A e B (70:30) (a), e
sem diluição (b). Identificações dos picos mostrados: 1 = α-lactalbumina, 2 = β-lactoglobulina.
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Figura 4. Os cromatogramas obtidos a partir de leite desnatado na separação da caseína
diluídos com tampão fosfato (a), diluição com tampão de fosfato continha 0,1% de ácido
trifluoroacético (b), diluição com mistura do solvente A e B (70:30) (c). Identificações dos 15
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• Velocidade da separação (gradiente);
• Tratamento de amostra;
• Solubilidade das Proteínas;
• Separação da Caseína;
• Perspectivas;
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REFERÊNCIAS
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• Conselho Regional de Química IV Região (SP), 2010.
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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ
DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS EXTAS
BACHARELADO EM QUÍMICA
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Por: Bárbara Paula e Hemerson Pataxó