GENETICA MICROBIANA

Estructura Genética

Genes

Operones Simples

Grupo de genes regulados

por un mismo sitio operador
 El operón lactosa de Escherichia coli y sus genes reguladores

operón lac

genes
gen regulador
estructurales

DNA i p o z y a

promotor operador

El operón lac consiste en cinco genes localizados en una secuencia lineal a lo largo del
DNA. La región “p” (promotor) es el sitio al cual se une la RNA polimerasa para la
transcripción. La región o (operador) es el sitio al cual se une la RNA pol para regular
la transcripción. “z”, “y” y “a” son los genes estructurales involucrados en la
utilización de lactosa. El gen “i” es el gen regulador que codifica la síntesis del represor,
molécula regulatoria que se une a la región “o” y afecta la regulación de la expresión
del operón lactosa.
VARIACIÓN GENETICA

MUTACION

RECOMBINACION GENETICA
 MUTACION
“Cambio heredable en la secuencia de bases del DNA de un organismo”

WILD TYPE MUTANTE

Características:

1.- Heredable: se transmite a los descendientes

2.- Baja frecuencia: una de cada 108 muta a una característica

3.- Reversible: retromutación de cada característica mutada

4.- Azarosa: ocurre en cualquier parte del cromosoma

5.- Espontánea: ocurre independiente de la presión selectiva externa

Test de Fluctuación de Luria y Delbruck

TEST DE FLUCTUACIÓN

Enviar Test
 Selectivas: confiere ventaja Ej: Resist. a antibióticos
Mutaciones
No Selectivas: No confiere ventaja/desventaja
Ej: Pérdida pigmentación
 Naturaleza molecular de la mutación

Microlesiones Macrolesiones

Mutaciones puntuales; Afecta a uno o más pares de bases.

ocurre sobre una única base Incluso genes completos
 NATURALEZA MOLECULAR DE LA MUTACION

Pur Pur
TRANSICIONES: Pir Pir

SUSTITUCIONES (mantiene orden Pur-Pir)

MUTACION PUNTUAL (pb pb) Pur Pir

TRANSVERSIONES:
(Microlesiones) Pir Pur
INSERCIONES pb (orden Pur-Pir revertido)

DELECIONES pb

Wild Type Mutante

REVERSION
¿CUALES SON LAS CONSECUENCIAS DE ESTAS MUTACIONES?
EJ.:Sustitución: - Mutacion Silenciosa
- Mutación Sin Sentido
- Mutación por cambio de Sentido

Replicación normal

Transcripción

Traducción

Mutación Mutación Mutación Tipo

por cambio sin sentido silenciosa solvestre
de sentido
Inserciones y Deleciones:
- Frameshifts (Cambio en el Marco de Lectura)
MACROLESIONES:
- DELECIONES
- INSERCIONES
- DUPLICACIONES
- INVERSIONES

TIPOS DE MUTANTES Y SU DETECCION

RESISTENTES A ANTIBIOTICOS: Ej: Selección en Placa c/medio selectivo

AUXOTROFICAS: por un Factor de Crecimiento (mencionar PROTOTROFAS)
Ej: Réplica en Placa
CONDICIONALES: Ej: Temperatura Sensible
¿SE PUEDEN RECUPERAR ESTOS CAMBIOS?
- MISMO SITIO (VERDADEROS)
Mut. Puntuales son reversibles REVERTANTES
- SEGUNDO SITIO (SUPRESORAS)

MUTACIONES SUPRESORAS: mutaciones que compensan la mutación original

1.- Mut. en el mismo gen: ~ recuperan función Enzima
2.- Mut en otro gen podría recuperar el fenotipo wild type
3.- Mut . generan otra Enzima que reemplaza función de la mutante (x otras vías)

GRANDES DELECIONES posibles de recuperar sólo por RECOMB. GENETICA

GRANDES INSERCIONES reversibles por posteriores mutaciones

Otras Mutaciones a gran escala: TRANSLOCACION – INVERSION

TASAS DE MUTACION
Espontáneas (10-6 x generación)
Transposiciones (10-4 x generación)
Sin Sentido (10-6 – 10-8 x generación)

MUTACIONES EN RNA
1000 >> que en DNA; no tienen sistema correción-reparación (virus)
 ASPECTOS APLICADOS DE LA MUTACION

TEST DE AMES

Uso práctico de bacterias mutantes: Identificar químicos potencialmente dañinos

Import.: Mutágenos químicos gral% son también Carcinogénicos (animales y humanos)
“Si tasa de reversión de una mutante auxotrófica ha sido aumentada x un mutágeno sospechoso”
Se debe realizar en base a mutaciones puntuales
 AGENTES MUTAGENOS

- ANALOGOS DE BASE (efecto en Replicación no en copiado)

QUIMICOS - AGENTES ALKILANTES (mutaciones a altas frecuencias)
- AGENTES INTERCALANTES (ej: Acridine Orange)

RADIACION IONIZANTE (+ poderosa; Ej rayos X, gamma, cósmicos)

ionizan agua: radical libre: .OH efecto DNA gen
FISICOS de alta penetración Ej: vidrio y otros materiales

RADIACION NO IONIZANTE (luz UV) bases pu; py absorben 260 nm

alg. proteínas absorben a 280
UV 260 nm DIMEROS DE PIRIMIDINA: aumentan errores en
replicación
BIOLOGICOS - Mutagénesis por transposón (Ej: fago Mu)

Los agentes alquilantes, junto con la luz ultravioleta son los

agentes mutagénicos más potentes.
Agentes mutágenos

1.- Químicos

Análogos de Bases: se parecen estructuralmente a las bases púricas y

pirimídicas. Actúan mediante la incorporación durante la replicación. A
veces ocasionan la incorporación de una bases equivocada en la cadena
copiada.
Agentes alquilantes: Son moléculas que reaccionan directamente
con el ADN, el cual no está replicándose, ocasionando cambios
químicos en las bases lo que provoca apareamientos incorrectos.
Ej,: Etil Metano Sulfonato (EMS), Metil Metano Sulfonato (MMS), Dietil
Sulfato (DES), Moztasa Nitrogenada, Aflatoxinas, etc

Agentes intercalantes: Son moléculas planas que se insertan entre

dos pares de bases del ADN, separándolas entre sí. Durante la
replicación, esta conformación anormal puede conducir a inserciones o
deleciones en el ADN, originando mutaciones por corrimiento de lectura.
Las sustancias más características de este grupo son las acridinas
(Naranja de Acridina), Bromuro de Etidio, Proflavinas.
VARIACIÓN GENETICA

MUTACION

RECOMBINACION GENETICA
 RECOMBINACION GENETICA

Intercambio físico de material genético entre elementos genéticos

RECOMBINACION HOMOLOGA

Intercambio genético entre SECUENCIAS HOMOLOGAS de DNA de dos fuentes

diferentes
RECOMBINACION HOMOLOGA
 RECOMBINACION HOMOLOGA

 extrema importancia
 alta% compleja (Ej: 25 genes en E. coli)
 existen varias vías redundantes

En procariotas la Recombinación se observa debido a que fragmentos de DNA

homólogos de un cromosoma donador son transferidos a una célula recipiente
por uno de tres procesos:

1.- Transformación
2.- Transducción
3.- Conjugación

Es solamente después de la transferencia, cuando el fragmento de DNA está en

la célula recipiente, que la recombinación homóloga puede ocurrir.
 TRANSFORMACION

DNA LIBRE es incorporado dentro de una célula recipiente

cambio genético

Hay cepas (especies) NATURALMENTE TRANSFORMABLES (Bacterias, alg.

Archaeas)

Lisis Trozos DNA (1000 nucleótidos: ~ 15 genes)

sólo incorporación 1 o pocos genes

 COMPETENCIA

COMPETENTE: Cél. capaz de tomar DNA y ser transformada

 Sólo ciertas cepas

 propiedad heredable
 En Naturalmente Transformable es REGULADA
 Hay proteínas especiales para toma y procesamiento del DNA
(proteínas de unión del DNA; autolisinas de pared; nucleasas)

INCORPORACION DE DNA:

Lo que se integra al genoma (recombina) es DNA lineal

Transformación con DNA plasmidial ocurre en ausencia de recombinación plásmido-cromosoma

TRANSFECCION: Cuando DNA incorporado proviene de virus bacteriano

CALCIO + FRIO

COMPETENCIA INDUCIDA ARTIFICIALMENTE

ELECTROPORACION
TRANSFORMACION
 TRANSDUCCION

 Transferencia de DNA de una célula a otra por medio de un virus

 Se ha encontrado en una variedad de procariotes: Bacterias y Archaeas

 No todas las bacterias son transducibles ni todos los fagos pueden transducir
TRANSDUCCION GENERALIZADA
TRANSDUCCION ESPECIALIZADA
 PLASMIDOS

Elemento genético extracromosomal

Se replican independientemente del cromosoma hospedero

No tienen una forma extracelular (difer. a virus)

DNA ds circular superenrrollado (alg. lineales)

1-1000 kb; 1/20 tamaño cromosoma

Número de copias (1-100); alg. h. diferentes tipos de plásmidos
Tipos de plásmidos:
Conjugativos ; Ej: plásmido F; dirigen su transfer. cél-cél: Conjugación
Resistencia (R)
Toxinas y virulencia (Ej: hemolisinas, enterotoxinas)
Bacteriocinas

Pueden llevar uno a muchos genes

requisitos:
No deben interferir con su propia replicación
No deben interferir con la sobrevivencia del hospedero

Incompatibilidad
(pérdida de plásmido preexistente por Inc; tb. por “curamiento”)
 Replicación
Gram negativas:

Similar a cromosoma
(h sitio inicio replic. y replic. bidireccional: intermediario Theta)
Proceso rápido: 1/10 del ciclo de división celular.
Gram positivas:

Por Mecanismo de Círculo Rodante

 Plásmido F

¡¡ Ojo con esta región !!

Plásmido RP1
 CONJUGACION

necesita CONTACTO cél-cél: ~ movilizar: Plásmidos – Cromosomas

Implica: cél Donadora (h. plásmido) y cél Receptora (no lo h.): TRANSCONJUGANTE
“Macho” “Hembra”

Genes q` controlan la Cjg en región tra (tb. relac. a Pili Sexual)

Ej. plásmido F codifica para Pili F

PILI RETRACCION PUENTE CONJUGATIVO (fusión membr.?)

Mecanismo Replicación x CIRCULO RODANTE

Donador Receptor : (“Donador”) Receptor DISEMINACION

CONJUGACION
Alteraciones por Presencia de Plásmido en una Célula:

1.- Capacidad para sintetizar Pili F

2.- Movilizar DNA para transferirlo a otra célula
3.- Alternancia de Receptores de Superficie (donador receptor)
MOVILIZACION DE CROMOSOMA

Episoma
Integrados al cromosoma
F+ F-

X
cruce

F?
Ocasionalmente un plásmido integrado se puede excindir del
cromosoma llevando consigo genes cromosomales:

Plásmido F`

F` diferente a F porque tiene genes cromosomales

IDENTIFICABLES y se transfieren a altas frecuencias (similar
a Transducción Especializada)

F´
F´ F-

X
cruce

F?
 Conjugación:

Transfer genes DNA cromos

ALTA FREC. DE RECOMBINACION : Hfr

Hfr F-

X
cruce

F?
 ELEMENTOS TRANSPONIBLES

 Secuencias de Inserción

RTI
 Transposones

- Virus especiales (Ej.: fago Mu)

 APLICACIONES
EN
BIOTECNOLOGIA
INFECCION DE UNA PLANTA POR
Agrobacterium tumefaciens
PLASMIDO Ti DE Agrobacterium tumefaciens
 Mecanismo de transferencia de T-DNA

a)

b)
Vir D es una
endonucleasa
c)

d)
Vir B actúa como
puente conjugativo
PRODUCCION DE PLANTAS TRANSGENICAS
UTILIZANDO Agrobacterium tumefaciens

Transferencia por
Transferencia por
Conjugación
Transformación
Transferencia por
Conjugación
 APLICACIONES
EN
BIOTECNOLOGIA VEGETAL
Producción de plantas transgénicas usando Agrobacterium tumefaciens ha sido
exitosa en plantas herbáceas (dicotiledóneas)
Ej: tomate, patata, tabaco, soja, alfalfa y algodón.

En gramíneas (monocotiledóneas) ha sido más difícil; por lo que se ha recurrido a

otros métodos (electroporación; bombardeo con partículas)

RESISTENCIA A HERBICIDAS
Glyphosate

RESISTENCIA A INSECTOS
Proteína tóxica de Bacillus thuringiensis: Toxina-Bt
- En bacteria de vida normal en la planta
- En genoma de la planta

RESISTENCIA A VIRUS
Protección contra infección vírica
Por producción de proteínas cápsides vírales

CRECIMIENTO EN CONDICIONES ADVERSAS

Salinidad
Aridez
Frío
 RETRASO DEL DETERIORO
Ej.: tomate

SINTESIS DE PRODUCTOS
Proteína humana interferón
Anticuerpos animales (“planticuerpos”)
Gránulos de poliéster para la elaboración de plásticos

Vacunas: - Producción de antígenos (Ej.: contra Plasmodium; paludismo

- Vacunas comestibles

CONCENTRACION DE METALES PESADOS

Eliminación de contaminantes del suelo