Sondas de ARN antisentido

Estas sondas se sintetizan mediante transcripción in vitro y puede ser sustituido por sondas
de ADN en casi todas las aplicaciones. En la construcción de la plantilla de transcripción, el
ADNc a transcribir es generalmente ligada entre dos promotores de ARN polimerasa
diferentes de bacteriófago, que flanquea un sitio de clonación múltiple y se colocan en
orientaciones opuestas.
• Esta construcción se linealiza con una enzima de restricción apropiada antes de iniciar la
reacción de transcripción, favoreciendo la producción eficiente de grandes cantidades de
sonda continuamente etiquetada de longitud uniforme.
• Una parte integral de la preparación de las sondas de ARN es la transcripción, antisentido
y sentido a partir de la misma construcción de plantilla.
 Características de las sondas de ARN
1. Las sondas de ARN son de cadena simple.
2. Todas las moléculas de sonda de ARN están disponibles para la hibridación.
Porque son monocatenarios, no pueden renaturalizarse como en el caso de
ADN.
3. Las sondas de ARN se etiquetan continuamente a medida que se transcriben,
generando así sondas con un alto grado de incorporación de etiquetas.
4. Las sondas de ARN muestran una mayor estabilidad termodinámica con ADN
y moléculas diana de ARN.
5. Las sondas de ARN se sintetizan mediante transcripción in vitro en una
plantilla modelo.
6. Grandes cantidades de sonda pueden ser sintetizadas en una sola reacción in
vitro de transcripción.
 Síntesis de la sonda de ARN
• Debido a que el ARN es lábil y susceptible a la degradación de RNasa, las
sondas de ARN deben tratarse con el mismo cuidado que cualquier otra
preparación de ARN.
• Los sistemas de transcripción in vitro están disponibles en forma de kit de
muchos proveedores y contienen todos los reactivos necesarios (excepto los
isótopos). https://www.ibiantech.com/sintesis-dna-rna/
 Transcripción in vitro
• La transcripción in vitro es el único método confiable para generar sondas de ARN. Se
pueden generar grandes cantidades de sondas marcadas eficazmente de longitud uniforme
mediante la transcripción de una secuencia de ADN ligada junto a un promotor de ARN.
• Una estrategia excelente es clonar el ADN para transcribir entre dos promotores en
orientaciones opuestas. Esto permite que cualquier cadena de la secuencia de ADN clonada
se transcriba para generar ARN sentido y antisentido para estudios de hibridación.