5991-5412ES Agilent LC Hardware Spanish

Fundamentos de la
cromatografía de
líquidos de alto
rendimiento (HPLC):
hardware
CONSTRUIMOS
UNA CIENCIA MEJOR
ENTRE AGILENT Y USTED
Exclusivamente para fines educativos

08 de enero de 2015
© Agilent Technologies, Inc. 2016
1
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May 9, 2018
2
Índice
Introducción Configuración de un sistema HPLC (continuación)
• ¿Cuál es la técnica de separación idónea para • Inyectores/muestreadores
cada compuesto? – Sistemas
• ¿Qué es la cromatografía de líquidos? – Parámetros básicos
• ¿Para qué se utiliza la HPLC? • Compartimento de la columna
• ¿Qué aspecto tiene un cromatograma? – Tipos de columnas
Aplicación de la HPLC – Materiales de relleno
• Ejemplo teórico: – Selección de columnas
separación y detección – Modos de separación
Configuración de un sistema HPLC • Detector
• Bomba – Detección espectroscópica
– Principio de funcionamiento – Detección del índice de refracción
– Parámetros básicos – Detección de fluorescencia
– Condiciones de gradiente frente a condiciones
isocráticas

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Introducción
¿Cuál es la técnica de separación idónea para cada compuesto?
Aminoácidos Iones inorgánicos
Hidrofílico
Ácidos Colorantes alimentarios Azúcares
carboxílicos Aldehídos Glifosato sintéticos
volátiles Cetonas Polialcoholes
Glicoles GP, GO, GD y Enzimas
Sulfonamidas fenoles
Aflatoxinas
Nitrilos BHT, BHA y BHQT
Antioxidantes Ácidos grasos Antibióticos
Polaridad Nitrosamina
Alcohol HPA Anabolizantes Flavonoides
Derivados TMS Pesticidas
del azúcar organofosforados Aminas aromáticas Colorantes alimentarios naturales
Bifenilos policlorados Vitaminas liposolubles
Epóxidos Aceites esenciales Monómeros poliméricos Triglicéridos Fosfolípidos
Hidrocarburos C2-C6 Ésteres metílicos de ácidos Ésteres aromáticos

Hidrofóbico grasos
Fase gaseosa volátil Fase líquida no volátil
Volátil Volatilidad No volátil

Índice
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Introducción
¿Qué es la cromatografía de líquidos?
La cromatografía de líquidos es una técnica de separación que conlleva

inyectar un pequeño volumen de muestra líquida en un tubo relleno de
partículas porosas (fase estacionaria). Los componentes individuales
de la muestra se transportan a lo largo del tubo relleno (columna) por medio
de un líquido que fluye por gravedad.
La separación de los componentes de la muestra se consigue gracias
a las diferentes interacciones químicas y físicas que se producen entre
sus moléculas y las partículas del relleno.
Tras la separación, los componentes se recogen a la salida de la columna
y se identifican por medio de una técnica de medida externa (como la
espectrofotometría, que mide la intensidad del color) u otro dispositivo
que permita su cuantificación.
Índice
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5
Introducción
¿Para qué se utiliza la HPLC?
La HPLC se utiliza para separar los componentes de compuestos químicos y biológicos
no volátiles.
Compuestos no volátiles típicos
• Fármacos como la aspirina, el ibuprofeno o el paracetamol (Tylenol).
• Proteínas como la ovoalbúmina
• Productos químicos orgánicos, como polímeros (por ejemplo, poliestireno o polietileno).
• Pesticidas o vitaminas presentes en alimentos.
• Muchos productos naturales, como el ginseng, las hierbas medicinales o los extractos
de plantas.
• Compuestos térmicamente inestables, como trinitrotolueno o enzimas.
NOTA: Para compuestos volátiles (como gases, fragancias o hidrocarburos presentes en la gasolina),
es mejor utilizar la cromatografía de gases como técnica de separación.
Índice
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Introducción
¿Qué aspecto tiene un cromatograma?
Cada uno de estos picos Compuesto B
cromatográficos representa
un compuesto específico
Punto de inyección Compuesto A Compuesto C

de la muestra
en la columna
0 2 4 6 8 10 12 14 min
Tiempo transcurrido desde la inyección
Índice
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Aplicación de la HPLC
Ejemplo
En la industria farmacéutica, por ejemplo, resulta esencial controlar
la calidad de los principios activos ( ) de los fármacos.
La HPLC se utiliza para identificar posibles impurezas en los fármacos
( ) que pueden producirse durante la síntesis o debido a la
descomposición del principio activo.
El control de calidad garantiza la seguridad para los pacientes.
Índice
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8
Paso 1: Disolución del comprimido y liberación de la sustancia
Índice
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Paso 2: Separación
La separación de la sustancia tiene
Columna lugar en la columna de separación.
La columna está compuesta por un
tubo metálico relleno de gel
Fase estacionaria
de sílice, que forma lo que se conoce
como fase estacionaria.
Índice
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10
Paso 2: Separación
Se inyectan las sustancias disueltas
en la columna de separación.
Columna
Fase estacionaria
Índice
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11
Paso 2: Separación
Columna
Fase estacionaria
Índice
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12
Paso 2: Separación
Se aplica presión al líquido
(por ejemplo, una mezcla de
agua y metanol) para forzarlo
a atravesar la columna.
Fase móvil
Ese líquido recibe el nombre
de fase móvil.
Índice
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13
Paso 2: Separación
El líquido (fase móvil) fluye a
través del gel de sílice (fase
estacionaria) y arrastra las
sustancias con él.
Fase móvil
Cada componente se
desplaza a una velocidad
diferente por la columna.
Índice
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Paso 2: Separación
De esta forma, las sustancias
llegan al final de la columna
en distintos instantes.
Fase móvil
Índice
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Paso 3: Determinación cuantitativa de sustancias
Tras la separación, se utiliza luz ultravioleta para medir la cantidad de cada
sustancia presente en la muestra.
En función de la cantidad de sustancia, se absorbe más o menos luz.
La cantidad de luz absorbida es proporcional a la cantidad de sustancia
presente; es decir, si en una muestra hay el doble de sustancia que en otra,
la primera absorberá el doble de luz.
Índice
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16
El detector registra la intensidad
de la luz.
La reducción de la intensidad de la luz
produce en el detector una respuesta
denominada pico.
La altura de pico se corresponde con
la reducción de la intensidad de la luz
a causa de la luz absorbida por la
sustancia.
Detector
Índice
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Este cromatograma muestra la señal del detector medida a lo largo del tiempo.
La medida cuantitativa de la sustancia viene determinada por la altura de pico.
Índice
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18
Paso 4: Análisis cualitativo de sustancias
A primera vista parece que solo existe un pico, Sin embargo, al ampliar la imagen se pueden
lo que quiere decir que únicamente se detectó observar pequeños picos que indican la presencia
una sustancia. de impurezas.
Índice
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19
Configuración de un sistema HPLC
Como mínimo, una torre para HPLC incluye

cuatro módulos:
• Bomba
• Inyector
• Columna
• Detector
Estos módulos desempeñan diversas funciones
en el proceso de separación de sustancias.
Sistema 1200
Índice Infinity LC Agilent
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Bomba
La función de la bomba es impulsar el líquido para que
atraviese el cromatógrafo con una velocidad de flujo
específica, expresada en mililitros por minuto (ml/min).
• Las velocidades de flujo normales para HPLC están
en el rango de 1-2 ml/min.
• Las bombas estándar para LC pueden alcanzar
presiones de hasta 400 bar.
• Las bombas para UHPLC permiten alcanzar un rango
de presión entre 600 y 1500 bar.
Durante un experimento cromatográfico, la bomba puede
suministrar una fase móvil de composición constante
(isocrática) o con una variación constante de la composición
(de gradiente).
Las bombas isocráticas consiguen una composición constante
de la fase móvil.
Las bombas de gradiente permiten obtener una fase móvil
de composición variable.
Índice
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Bomba isocrática 1260 Infinity: principio de funcionamiento
AIV: Válvula de entrada activa

OBV: Válvula de bola de salida
Consulte las notas para

obtener más información
Índice
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22
Bomba binaria 1260 Infinity: principio de funcionamiento
Amortiguador
Salida de Válvula Mezclador
la bomba de purga
Al sistema
de residuos Cámara de
Válvula mezcla Válvula
de salida de salida
Válvula de
entrada Válvula de entrada
De la botella De la botella
de disolvente Sello Sello de disolvente
Pistón Pistón
Cabezal de bombeo A Cabezal de bombeo B

Consulte las notas para
obtener más información
Índice
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Parámetros básicos de la bomba
Velocidad de flujo: Volumen suministrado por unidad de tiempo (el rango depende
del tipo de bomba).
Presión máxima: Se puede definir una presión máxima para evitar posibles daños
en el sistema (por ejemplo, si utiliza una columna sensible). Tenga en cuenta que
no se puede ajustar la presión en sí misma, sino que es una consecuencia de la
resistencia al flujo de los componentes de la ruta de flujo, como la columna o las
conexiones capilares.
Composición/gradiente: Porcentaje de cada disolvente en función del tiempo
(para bombas binarias o cuaternarias).
Embolada: Volumen de disolvente comprimido (en el rango de 20 a 100 µl)
suministrado por un movimiento del pistón 1. Cuando menor es el volumen de
embolada, más se reducen las variaciones de la presión. Para conseguir caudales
altos se necesitan volúmenes de embolada elevados.
Compresibilidad: Al aplicar presiones elevadas, como sucede en la HPLC, incluso
los líquidos pueden comprimirse hasta cierto punto. Se define la compresibilidad (κ)
como la variación de volumen (ΔV) dividida entre el volumen inicial (V) y la diferencia
de presión aplicada (Δp).
Índice
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Condiciones de gradiente frente a condiciones isocráticas
Isocráticas
La composición del disolvente de la fase
móvil no varía con el tiempo.
• Idóneas para separaciones sencillas.
• Se utilizan frecuentemente en
aplicaciones de control de calidad que
sirven como soporte de un proceso de
fabricación y están estrechamente
relacionadas con él.
De gradiente
La composición del disolvente de la fase
móvil varía con el tiempo.
• Idóneas para analizar muestras
complejas.
• Se usan frecuentemente en el desarrollo
de métodos para mezclas desconocidas.
• Los gradientes lineales son los más
utilizados.
Índice
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¿Por qué se utilizan gradientes en la HPLC?
Separación de herbicidas en una columna ZORBAX StableBond-C18
Elución isocrática Columna: ZORBAX SB-C18 Elución con gradiente
70 % de agua y 30 % 4,6 x 150 mm, 5 µm 20–60 % acetonitrilo/agua
de acetonitrilo Fase móvil: A: H2O con un 0,1 % de
1,2
1,2 4 TFA (pH = 2)
5
4 B: Acetonitrilo 4
5
4
5 Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
5
Temperatura: 35 °C
88
Muestra: 1. Tebuthiuron Nota:
2. Prometon Último pico eluido
3. Prometrina aprox. a los
4. Atrazina 28 minutos y más
5. Bentazona 22 pronunciado
3
3 6. Propazina 3
3
7. Propanil
8. Metolacloro 66
11
66 Nota:
Último pico 88 7
7
7
7 eluido aprox. a
los 70 minutos
00 25
25 50
50 75
75 00 5
5 10
10 15
15 20
20 25
25 30
30
Time (min) Time (min)
Tiempo (min) Tiempo (min)
Índice
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Sistemas inyectores
Inyector:
• El inyector sirve para introducir la muestra disuelta en la corriente
de flujo de la fase móvil.
– Los volúmenes de muestra típicos están
entre 0,1 y 20 microlitros (µl).
– El inyector también debe ser capaz de soportar las
elevadas presiones del sistema de líquidos.
Inyección manual con una jeringa

Cuando es necesario analizar un gran número de muestras o no
resulta práctico realizar la inyección de forma manual, se puede
utilizar un muestreador automático para llenar los viales o las placas
de pocillos automáticamente.
Bandeja para muestreador automático
Índice
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Parámetros básicos del inyector
Rango de volumen de inyección: Con muestreadores de loop variable
normalmente se pueden inyectar entre 0,1 y 100 µl de muestra, aunque se puede
ampliar este rango si se utilizan kits de extracción múltiple o cabezales analíticos
más grandes. En los muestreadores automáticos de loop fijo se pueden instalar
loops de diferentes tamaños.
Vaso de inyección: Vial, placa de pocillos o ambos.
Arrastre: Compuestos de un análisis anterior. Para reducir el arrastre, lave la aguja.
Capacidad de muestras: Cantidad de muestras que puede almacenar el
muestreador automático.
Duración del ciclo: Intervalo de tiempo necesario para completar el proceso
de inyección.
Precisión: Reproducibilidad de los volúmenes de inyección.
Exactitud: Exactitud de un volumen de inyección absoluto.
Linealidad: Precisión a lo largo de un rango definido de volúmenes de inyección.
Índice
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Compartimento de la columna
La columna se ubica en el compartimento termostatizado de
columna. La temperatura se puede ajustar entre 10 y 100 °C.
Columna colocada en el
bloque calentador
La columna actúa como "corazón" del cromatógrafo.

La fase estacionaria de la columna separa los componentes de
interés de la muestra en función de distintos parámetros físicos
y químicos.
• Las pequeñas partículas del interior de la columna son la
causa de la elevada retropresión con velocidades de flujo
normales.
• La bomba debe aportar un fuerte impulso para que la fase
móvil pueda avanzar por la columna; esta resistencia
genera una elevada presión dentro del cromatógrafo.
Índice
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29
Columna
Es crucial seleccionar una columna idónea.
Tipos de columnas para HPLC

• Analítica: diámetro interno (d.i.): 1,0–4,6 mm;
longitud: 15–250 mm.
• Preparativa: d.i.: > 4,6 mm; longitud: 50–250 mm.
• Capilar: d.i.: 0,1–1,0 mm; diferentes longitudes.
• Nano: d.i.: < 0,1 mm; en ocasiones, definida como < 100 µm.
Materiales de fabricación de los tubos

• Acero inoxidable (el más habitual; es capaz de soportar altas presiones).
• Vidrio (principalmente para biomoléculas).
• Polímero PEEK (biocompatible y químicamente inerte con la mayoría de los disolventes).
Índice
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Columna: materiales de relleno
Las columnas están rellenas de partículas porosas
de pequeño diámetro.
Los tamaños más habituales son 5, 3,5 y 1,8 μm.
Las columnas se rellenan a alta presión, para garantizar

que permanezcan estables durante su uso. Material de relleno de
La mayoría de los usuarios adquieren columnas preempaquetadas una columna para LC
para sus cromatógrafos de líquidos.
Las partículas porosas de la columna normalmente tienen
en su superficie una fase ligada químicamente, que interactúa
con los componentes de la muestra para separarlos.
Por ejemplo, una fase ligada muy común es la C18.
El proceso de retención de los componentes de la muestra (denominados
frecuentemente analitos) se regula mediante la selección del relleno
de la columna y de la fase móvil que llevará los analitos a través
de la columna empaquetada.
Índice
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Selección de la columna en función del disolvente y el modo
Disolvente Modo
Fase normal con sílice sin tratar (adsorción)
Hexano
Fase normal con sílice con fase ligada
MeOH/MeOH:H2O Fase reversa
Orgánico
o HILIC (para conseguir una retención débil en fase
ACN/ACN:H2O reversa)
THF Permeación en gel (moléculas pequeñas)
Peso molecular < 2000
Fase reversa
No iónico HILIC (para conseguir una retención débil en fase
reversa)
Acuoso Fase reversa con control de ionización
Fase reversa con agente de emparejamiento iónico
Iónico
Fase reversa con sílice sin tratar
Intercambio iónico
Orgánico Permeación en gel
Permeación en gel
Peso molecular > 2.000 Intercambio iónico con material con tamaño de poro
Acuoso grande
Fase reversa con material con tamaño de poro
grande
Índice
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Diagrama de flujo para la selección de una columna para HPLC de fase reversa
Moléculas pequeñas Moléculas grandes
PM < 3000 PM > 3000
80–120 Å Tamaño de poro del relleno 300 Å

La elección del tamaño de poro del relleno se basa, en primer lugar, en el tamaño de las moléculas que deban analizarse. Las moléculas pequeñas
convencionales pueden difundirse fácilmente hacia el interior y el exterior del material de relleno con poros estándar de 80-120 Å, pero es posible que los
péptidos y las proteínas de mayor tamaño no puedan hacerlo. Por esta razón, se recomienda utilizar rellenos con poros de 300 Å (300SB) para
separaciones isocráticas o de gradiente de péptidos y proteínas.
Eclipse Plus C18 o Fase ligada inicial de la columna StableBond 300SB-C18

Poroshell 120 EC-C18
Se recomienda utilizar C18 como fase ligada inicial de la columna para la mayoría de las muestras, ya que maximiza la retención de compuestos desde
moderadamente polares hasta no polares. Si no se puede optimizar la resolución con una fase C18 o se están analizando proteínas de mayor tamaño o
compuestos muy hidrofóbicos, difíciles de eluir de la fase C18 con disolventes de fase reversa convencionales, se deberían considerar el uso de fases de
cadenas más cortas. Puede comenzar con una columna Poroshell 120 EC-C18 o Eclipse Plus RRHT/RRHD para obtener un análisis rápido mediante LC.
Moléculas pequeñas Moléculas grandes

PM < 3000 PM > 3000
Análisis estándar Análisis rápido Análisis estándar Análisis rápido

Eclipse Plus C18 Poroshell 120 EC-C18 ZORBAX RRHD ZORBAX 300SB-C18
4,6 x 150 mm, 3,5 µm 4,6 x 100 mm, 2,7 µm 300SB-C18 4,6 x 50 mm, 3,5 µm
Poroshell 120 EC-C18 ZORBAX RRHD 4,6 x 150 mm, 5 µm Poroshell 300SB-C18
4,6 x 75 mm, 2,7 µm Eclipse Plus C18 2,1 x 75 mm, 5 µm
2,1 x 50 mm, 1,8 µm
Índice Fuente: Guía de selección de columnas HPLC Agilent

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Modos de separación
Para separar la mayoría de los compuestos se utilizan cuatro modos

principales:
• Cromatografía de fase reversa.

• Cromatografía de fase normal y adsorción.
• Cromatografía de intercambio iónico.
• Cromatografía de exclusión por tamaño.
NOTA: La selección correcta del relleno y la fase móvil de la columna

es el factor más importante para llevar a cabo la HPLC con éxito.
Índice
08 de enero de 2015
34
Modos de separación: cromatografía de fase reversa
La cromatografía de fase reversa es el modo
más habitual con diferencia, ya que lo utilizan
más del 90 % de los cromatografistas.
Se trata de una técnica muy versátil que puede
usarse para moléculas no polares, polares, ionizables
e iónicas.
Para las muestras que contienen una amplia variedad
de compuestos, se utiliza frecuentemente la elución
con gradiente:
• Se empieza con una fase móvil
predominantemente acuosa y se va añadiendo
disolvente orgánico a medida que pasa el
tiempo.
• El disolvente orgánico hace aumentar la fuerza
de la mezcla de disolvente y eluye los
compuestos fuertemente retenidos en el relleno
de fase reversa.
El relleno de la columna es no polar (por ejemplo, Diez sulfamidas analizadas mediante
C18, C8, C3 o fenilo) y la fase móvil está compuesta cromatografía de fase reversa
por agua (tampón) y un disolvente orgánico miscible Fuente: Manual técnico de LC
con agua (por ejemplo, metanol o acetonitrilo).
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35
Modos de separación: cromatografía de fase normal y adsorción
Las separaciones de fase normal se realizan
en menos del 10 % de las ocasiones.
Es una técnica útil para:
• Compuestos sensibles al agua.
• Isómeros geométricos.
• Isómeros cis-trans.
• Separaciones por clases.
• Compuestos quirales.
En este modo, el relleno de la columna es
polar (por ejemplo, de gel de sílice o ligado
con cianopropilo o con grupos amino) y la
fase móvil es no polar (por ejemplo, hexano,
isooctano, cloruro de metileno o acetato de
etilo).
Análisis de tolazamida
Fuente: Nota de aplicación n.º 5991-0395EN
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36
Modos de separación: cromatografía de intercambio iónico
La cromatografía de intercambio iónico la
utilizan aproximadamente el 20 % de los
cromatografistas de líquidos.
Es una técnica idónea para:
• Separar aniones y cationes inorgánicos
y orgánicos en disoluciones acuosas.
• Separar colorantes iónicos, aminoácidos
y proteínas mediante intercambio iónico,
ya que se encuentran disueltos en forma
de sales en las salmueras.
En este modo, el relleno de la columna
contiene grupos iónicos (por ejemplo, grupos
sulfónicos o tetraalquilamónicos) y la fase
móvil es un tampón acuoso (por ejemplo,
un fosfato o un formiato).
Análisis de proteínas básicas con intercambio
catiónico fuerte (-SO3)
Fuente: Manual técnico de LC
Índice
08 de enero de 2015
37
Modos de separación: cromatografía de exclusión por tamaño (SEC)
Esta técnica la utilizan entre el 10 y el 15 % de
los cromatografistas, principalmente para la
caracterización de polímeros y proteínas.
Existen dos modos:
• No acuoso (denominado en ocasiones
cromatografía de permeación en gel).
• Acuoso (denominado en ocasiones
cromatografía de filtración en gel).
En ninguno de estos modos debe existir
interacción entre los compuestos de la muestra
y el material de relleno de la columna. En su
lugar, las moléculas se difunden en los poros
de un medio poroso.
Las moléculas se separan en función
de su tamaño en comparación con el tamaño
de poro. Cromatograma de permeación en gel de un polímero
de polibutadieno en una columna SEC no acuosa (GPC);
los monómeros se eluyen después del polímero. Fuente:
Manual técnico de LC
Índice
08 de enero de 2015
38
Detector
El detector puede "ver" (detectar) las moléculas
individuales que salen (se eluyen) de la columna.
• Mide la cantidad de esas moléculas, lo que
permite al analista determinar cuantitativamente
los componentes de la muestra.
• También envía una señal de salida a un sistema
de registro u ordenador, lo que permite generar
el cromatograma de líquidos (es decir, una
representación gráfica de la respuesta del
detector).
Los tipos de detectores más habituales se basan en las
siguientes técnicas:
• Detección espectroscópica.
• Detección del índice de refracción.
• Detección de fluorescencia.
Índice
08 de enero de 2015
39
Detección espectroscópica: absorción ultravioleta (UV)
• Se dirige un haz de luz ultravioleta de
forma que atraviese una celda de flujo;
un sensor mide la luz que pasa a través
de la celda.
• Si un compuesto se eluye de la
columna que absorbe esta energía
lumínica, la cantidad de energía
lumínica que llega hasta el sensor
cambiará. Esquema de un detector de longitud de onda variable (VWD)
• El cambio producido en la señal
eléctrica se amplifica y se dirige hacia
un sistema de registro o de datos.
• En ocasiones también se genera un
espectro ultravioleta, lo que puede
ayudar a identificar un compuesto o una
serie de compuestos.
Esquema de un detector de diodo array (DAD)

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08 de enero de 2015
40
Detección espectroscópica: espectroscopia de masas (MS)
• En la espectrometría de masas,
para detectar los compuestos
eluidos de la columna de HPLC,
en primer lugar, el detector los
ioniza y, a continuación, mide su
masa o divide la molécula en
fragmentos más pequeños que
son característicos del compuesto
(o bien realiza ambas acciones).
• En ocasiones, el detector del
espectrómetro de masas puede
identificar el compuesto
directamente, ya que su espectro
de masas es como una "huella
dactilar" específica de dicho
compuesto.
Espectro de masas de atorvastatina degradada por oxidación
con algunas impurezas. Fuente: Nota de aplicación n.º 5991-
4404EN
Índice
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Detección del índice de refracción (RI)
La capacidad de un compuesto o disolvente
para desviar la luz ofrece un modo de
detectarlo.
• El índice de refracción es una medida de
la capacidad de una molécula para desviar
la luz cuando está en una fase móvil que
atraviesa una celda de flujo, en comparación
con una fase móvil estática contenida en una
celda de flujo de referencia.
• El grado de desviación producido es
proporcional a la concentración.
• Aunque el detector de índice de refracción
(RI) se considera un detector universal,
no es muy sensible.
• Los detectores de índice de refracción (RI)
únicamente pueden utilizarse para realizar Esquema de un tipo de detector de índice de
refracción por desviación
análisis isocráticos.
Índice
08 de enero de 2015
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Detección de fluorescencia
En comparación con los detectores UV-Vis,
los detectores de fluorescencia ofrecen una
sensibilidad y una selectividad mayores, lo que
permite cuantificar e identificar compuestos
e impurezas presentes en concentraciones
extremadamente bajas en matrices complejas
(análisis a nivel de trazas).
Los detectores de fluorescencia únicamente
detectan sustancias fluorescentes.
Esquema de un detector de fluorescencia
Índice
08 de enero de 2015
43
Más información
Para obtener más información sobre los productos de Agilent,

visite los sitios web www.agilent.com y www.agilent.com/chem/academia.
Tiene alguna consulta o sugerencia en relación con esta presentación?
Escriba a academia.team@agilent.com
Publicación Título N.º pub.
Manual técnico The LC Handbook 5990-7595EN
Guía Guía de selección de columnas HPLC Agilent 5991-0165EN
Vídeo Introduction to ion-exchange chromatography (5 min)
Vídeo Vídeo de demostración de funcionamiento: Tecnología de chips HPLC (6 min)
Nota de Transfer of a USP method for tolazamide from normal phase HPLC to SFC using
5991-0395EN
aplicación Agilent 1260 Infinity Hybrid SFC/UHPLC system
Nota de Screening and identification of potential genotoxic degradation impurities using Q-TOF
5991-4404EN
aplicación LC/MS with advanced software solutions
CHROMacademy (acceso gratuito a los cursos online para estudiantes y personal
Sitio web
universitario)
Índice
08 de enero de 2015
44
GRACIAS
POR SU
ATENCIÓN
Índice 5991-5411ES
Etiqueta de confidencialidad
08 de enero de 2015
45

5991-5412ES Agilent LC Hardware Spanish

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5991-5412ES Agilent LC Hardware Spanish

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Fundamentos de la

Exclusivamente para fines educativos

Este conjunto de diapositivas ha sido preparado por Agilent

Exclusivamente para fines educativos

Exclusivamente para fines educativos

Bifenilos policlorados Vitaminas liposolubles

Epóxidos Aceites esenciales Monómeros poliméricos Triglicéridos Fosfolípidos

Hidrocarburos C2-C6 Ésteres metílicos de ácidos Ésteres aromáticos

Fase gaseosa volátil Fase líquida no volátil

Volátil Volatilidad No volátil

La cromatografía de líquidos es una técnica de separación que conlleva

Punto de inyección Compuesto A Compuesto C

Como mínimo, una torre para HPLC incluye

AIV: Válvula de entrada activa

Consulte las notas para

Cabezal de bombeo A Cabezal de bombeo B

Inyección manual con una jeringa

Bandeja para muestreador automático

La columna actúa como "corazón" del cromatógrafo.

Tipos de columnas para HPLC

Materiales de fabricación de los tubos

Las columnas se rellenan a alta presión, para garantizar

80–120 Å Tamaño de poro del relleno 300 Å

Eclipse Plus C18 o Fase ligada inicial de la columna StableBond 300SB-C18

Moléculas pequeñas Moléculas grandes

Análisis estándar Análisis rápido Análisis estándar Análisis rápido

Exclusivamente para fines educativos

Para separar la mayoría de los compuestos se utilizan cuatro modos

• Cromatografía de fase reversa.

NOTA: La selección correcta del relleno y la fase móvil de la columna

Esquema de un detector de diodo array (DAD)

Esquema de un detector de fluorescencia

Para obtener más información sobre los productos de Agilent,

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