Asignatura: Bacteriología Género Brucella.- Clasificación Dominio : Bacteria Filo : Proteobacteria Clase : Alfa Proteobacteria Orden : Rhizobiales Familia : Brucellaceae Género : Brucella Especie : B. abortus B. canis B. melitensis B. neotomae B. ovis B. suis B. pinnipediae B. cetaceae B. microti Género: Brucella Se conocen pocas especies de Brucella, y se diferencian ligera- mente en la especificidad de huésped: B. melitensis infecta cabras y ovejas, B. abortus infecta vacas, B. suis infecta cerdos, B. ovis infecta ovejas, B. neotomae B. pinnipediae, recientemente descubierta en mamíferos marinos
La brucelosis, es una enfermedad zoonotica
Es transmitida por: Ingestión de comida infectada, Contacto directo con un animal infectado Por inhalación de aerosoles. Por exposición ocupacional: exposición al ganado, ovejas, cerdos, pero también por el consumo de productos lácteos no pasteurizados Transmisión de Brucella Características del Género Brucella A la luz reflejada las colonias son brillantes, ligeramente opalescentes y de color gris azulado Colonias de Brucella melitensis-Agar sangre Continúa
En Agar sangre no produce hemólisis, en agar Mac Conkey
crecen poco y no fermentan la lactosa. Las cepas rugosas (R), en TSA, producen colonias semejantes en la forma pero varían considerablemente en tamaño, color, consistencia y textura En Medio TSI- hay ausencia de ácido y gas En agar Citrato, no emplea este substrato como fuente de carbono, por lo que no se modifica el color verde En Medio de SIM.- se observa la inmovilidad de las brucelas y la ausencia de indol y H2S En medio urea se mide el tiempo en que vira el medio a rojo, debido a la producción de ureasa. Brucella suis produce la mayor cantidad de ureasa en un tiempo muy corto comparada con las demás especies que producen menor cantidad. Crecimiento en presencia de colorantes: tionina y fucsina básica Estructura y composición química
La estructura celular de Brucella es semejante a la estructura
clásica de las bacterias Gram negativas. Al microscopio electrónico se distinguen, de fuera hacia dentro: La envoltura celular, integrada por: La membrana externa, El espacio periplásmico La membrana citoplasmática rodea al citoplasma, es una bicapa de fosfolípidos y proteínas de diversos tipos, es muy vulnerable a los cambios osmóticos del medio ambiente. Entre la membrana citoplásmica y la membrana externa se encuentra el espacio periplásmico y la capa de peptidoglucano. La región apolar (hidrofóbica) de la membrana con un grosor de 4.5 nm, forma una barrera estructural y funcional entre el periplasma y el exterior de la célula. Pared celular de Brucella Continúa
La supervivencia de la bacteria ya sea en el medio ambiente o
en el huésped, depende de la integridad de su membrana externa ya que si ésta sufriera algún daño, la bacteria no sobreviviría por mucho tiempo.
En la membrana externa (ME) de Brucella, se encuentra el
lipopolisacárido (LPS), abundante y antigénico, y se le conoce también como endotoxina
Las propiedades bioquímicas y biológicas de la célula son
diferentes a las del resto de bacterias Gram negativas, especialmente en cuanto al contenido de ácidos grasos del lípido A de la membrana extena. La endotoxina de Brucella presenta baja actividad endotóxica aunque conserva sus propiedades inmunogénicas. Continúa
Las cepas de B. melitensis, B. abortus, B. suis y las brucelas
marinas en fase lisa (S), poseen el S-LPS que está constituido de un lípido A, formado de diferentes ácidos grasos; una región central (núcleo) que contiene el ácido 2-ceto 3-desoxioctulosónico, glucosa, manosa y quinovosamina; y una cadena O, proyectada hacia el exterior de la ME, constituida de un homopolímero de alrededor de 100 unidades de 4-formamido-4,6-didesoximanosa (perosamina)
La estructura del LPS de cepas rugosas (R-LPS), es básicamente
similar al S-LPS, excepto por la cadena O, que está ausente o reducida a unos pocos residuos. Por lo que, la especificidad del R- LPS estará determinada por el polisacárido del núcleo. La falta de cadena O modifica la superficie bacteriana de tal modo que las brucelas no forman suspensiones estables y autoaglutinan Continúa
La existencia de otros polisacáridos: el hapteno nativo (HN) y el
polisacárido B (PB). Los antígenos polisacarídicos de impor- tancia serológica en Brucella son: los polisacáridos A y M y la forma libre de la cadena O.
Las proteínas de membrana externa (OMPs) son de gran
interés porque las han relacionado con la protección. Estructura antigénica
Brucela, aglutina con sueros monoespecíficos.- Se emplean el suero
monovalente A y monovalente M. El R se utiliza solo cuando se sospecha de B. canis o de otra especie rugosa natural. Al realizar esta prueba es muy importante tomar en consideración lo siguiente:
• B. abortus, puede contener antígeno A (biovar 1,2,3 y 6) o antígeno
M (biovares 4, 5 y 9) en forma de antígenos dominantes o ambos antígenos A y M ( biotipo 7 ) en forma igualmente dominante.
• B. suis, puede tener antígeno A (biotipos 1, 2 y 3) como antígeno
dominante o ambos A y M (biotipo 4).
• B. melitensis, puede tener antígeno M (biotipo 1) o antígeno A (bio-
tipo 2) como antígenos dominantes o ambos A y M (biotipo 3). Por consiguiente, cualquier cepa que aglutine con suero mono específico M, no es necesariamente B. melitensis; éste es un error que frecuen- temente se comete, por desconocer la composición antigénica de los diferentes biovares de Brucella. MEDIOS DE CULTIVO Y CONDICIONES PARTICULARES DE CULTIVO
Como son bacterias intracelulares, necesitan requerimientos nutri-
cionales complejos para crecer. Hay Brucellas que se van a desa- rrollar bien en medios clásicos como AS y ACH.
Los medios de cultivo utilizados son:
Medios líquidos: Caldo tripcasa-soja; Caldo Brucella. Medios sólidos: Agar tripcasa-soja; Agar Brucella. Medios selectivos (contienen antibióticos) : Modificado Thayer- Martin. A todos los enfermos sospechosos de infección por Brucella se les debe realizar hemocultivos seriados, Las técnicas de hemocultivo son: Técnica de Castañeda: Se utiliza un medio bifásico (liquido- solido) en el mismo frasco. El medio liquido permite el enrique- cimiento de las Brucellas que se encuentran en la sangre y el medio sólido sirve para las resiembras Factores de Patogenicidad
Las especies de Brucella son patógenas intracelulares facultativas,
su virulencia está relacionada con la capacidad que poseen para: Adherirse, penetrar y multiplicarse en una gran variedad de células eucarióticas, Resistir el efecto bactericida de los componentes del suero normal tanto fagocíticas como no fagocíticas.
La localización intracelular las mantiene protegidas de los antibióti-
cos y de factores bactericidas del plasma como complemento y anticuerpos, lo que determina la naturaleza crónica de la infección. La capacidad de producir ureasa aparentemente juega un papel en la colonización del huésped. La enzima degrada la urea modifican- do el pH en el sitio en donde se encuentre la bacteria Continúa
Brucella se adhiere con cierta facilidad a la superficie de las
mucosas debido a su gran hidrofobicidad, ya que no posee ni fimbrias ni cápsula; ambas características favorecerían la colonización y la generación de la enfermedad.
Alguno de sus componentes celulares con función de adhesina,
promovería específicamente la adherencia a receptores moleculares específicos de la célula del huésped (FcR, C3bR y manosa). La unión sería necesaria para inducir una serie de señales Intracelulares, que faciliten la colonización e invasión celular, en este fenómeno estarían involucradas la actina y los microtúbulos. En el caso de los linfocitos humanos, Brucella se une a la membrana celular a través de moléculas semejantes a lectinas. Continúa
Cuando son fagocitadas por células polimorfonucleares (PMN) o por
células fagocíticas mononucleares, las brucelas se multiplican dentro de fagosomas, en el interior de los cuales, despliegan diversos mecanismos que bloquean o suprimen la respuesta bactericida de estas células.
B. abortus escapa a la muerte dentro de los PMN, al producir gua-nosina
5’ monofosfato (GMP) y adenina que inhiben la fusión fago-lisosoma, la desgranulación y la activación del sistema mieloperoxidasa y la producción del factor de necrosis tumoral. Además, Brucella produce Cu- Zn superoxido dismutasa, que probablemente participa en las fases tempranas de la infección intracelular.
Dentro del macrófago, la bacteria debe de enfrentarse a condiciones
adversas como el pH, falta de nutrientes y presencia de intermediarios reactivos del oxígeno. Brucella debe resistir estas condiciones de estrés, para poder establecerse en el retículo endoplásmico Infección de macrófago Continúa
La supervivencia de Brucella dentro del macrófago, se ha
asociado con la síntesis de enzimas antioxidantes (KatE y SodC) y proteínas de variados pesos moleculares: 17, 24, 28, 60 y 62 kDa.
La mayoría de los casos de brucelosis humana, están
relacionados al consumo de leche, queso fresco, crema y otros derivados sin pasteurizar. El periodo de incubación suele ser variable, en general, de 2 a 3 semanas, aunque puede prolongarse hasta algunos meses. éste depende de: la virulencia de la cepa de Brucella, la dosis y del estado nutricional e inmune del individuo.