Rekayasa Produksi Metabolit

Sekunder Tanaman Secara In Vitro

Oleh :
1. Anisa Esti Rahayu (01311540000076)
2. Tita Nur Aziza Al Muanisa (01311640000010)

Dosen Pengampu :
Dini Ermavitalini, S.Si., M.Si.
 Latar Belakang

1-5 mg/100 g

Malus domestica Flavonoid

quercetin
3-glycosides
flavan-3-ols

Kudis apel  Venturia inaequalis Flavonols

 Latar Belakang

Akumulasi
antosianin

Respon adaptif
terhadap
Stres kekeringan
 Tujuan Penelitian

Memodifikasi jalur flavonoid pada buah apel dengan

mengoverekspresi faktor transkripsi MdMyb10 untuk
memvalidasi hipotesis efek peningkatan resistensi
tanaman terhadap penyakit
 Metode Penelitian
Persiapan Strain
Persiapan Transformasi
Agrobacterium
Tanaman dan Vektor Biner dan Regenerasi

Uji konfirmasi PCR

Uji konfirmasi Southern Blot
Uji konfirmasi RT-PCR
Uji konfirmasi qRT-PCR
Analisis HPLC
 Persiapan Tanaman

Kultur tunas

Kultur In Vitro Apel Medium MS + Vitamin + 2% Sukrosa + 3,1 uM

‘Holsteiner Cox (HC)’ dan ‘Gala’
BAP + 0,5 uM NAA + 2,8 uM GA3 + 0,8% Agar
 pH 5,7
 suhu 25C
 fotoperiod 16/8-h (day/night)
 subkultur setiap 4 minggu
Persiapan Strain Agrobacterium dan Vektor Biner

Agrobacterium tumefaciens strain GV3101

Gambar Peta T-DNA dari Transformasi pJan-MdMyb10

MdMyb10 : Faktor transkripsi gen Malus domestica
Ocs 30-T : Octopine synthase 30 region terminator A. tumefaciens
NptII : Neomycin phosphotransferase Selectable Marker
35 S-P : Cauliflower mosaic virus (CaMV) 35 S promoter
 Transformasi dan Regenerasi

Tunas In Vitro Dipotong berbentuk

4 minggu Strip

Agrobacterium tumefaciens dalam YEP Medium MS

 Transformasi dan Regenerasi

MS + Tetracycline Medium Induksi Pucuk Sub Kultur

+ Tetracycline + Kanamycin

Aklimatisasi
 Verifikasi Interaksi Transgen
- PCR
- Southern Blot
- RT PCR
- qRT- PCR

Analisis Metabolit
-HPLC
 Hasil dan Diskusi

Analisis PCR untuk mendeteksi jalur transgenik pada HC dan Gala menggunakan primer
MdMyb10
1 & 5 (plasmid Myb10 ) : Kontrol positif
2 (Holsteiner Cox) : Kontrol negatif
3 (Holsteiner Cox) : Jalur Transgenik HC-1
4 & 11 (Holsteiner Cox & Gala) : Kontrol air
6 (Gala) : Kontrol negatif
7, 8, 9, dan 10 (Gala) : Jalur transgenik Ga-1, Ga-2, Ga-3 dan Ga-4
 Hasil dan Diskusi

Analisis PCR untuk mendeteksi jalur transgenik pada HC dan Gala menggunakan primer
nptII
1 & 5 (plasmid Myb10 ) : Kontrol positif
2 (Holsteiner Cox) : Kontrol negatif
3 (Holsteiner Cox) : Jalur Transgenik HC-1
4 & 11 (Holsteiner Cox & Gala) : Kontrol air
6 (Gala) : Kontrol negatif
7, 8, 9, dan 10 (Gala) : Jalur transgenik Ga-1, Ga-2, Ga-3 dan Ga-4
 Hasil dan Diskusi

Gambar Multiplex RT-PCR dari garis transgenik HC dan

Gambar Analisis gDNA dengan BamH1
Gala Menggunakan Primer MdMyb10 dan Rubisco
Dari tanaman transgenik Gala
yang ditransformasi pJan-MdMyb10 1&5 : pJan-Myb10 sbg kontrol positif
1 : Tanaman kontrol Gala 2 : kontrol negatif HC
2,3,4,5 : gala transgenik 3 : HC transgenik
6 : Blank 4 & 11 : kontrol air
7 : Kontrol positif plasmid pJan-MdMyb10 6 : Kontrol negatif Gala
7,8,9,10 : Kontrol negatif Gala
 Gambar Ekspresi gen MdMyb10 pada
Gala non transgenik dan Gala transgenik

Gambar Ekspresi gen MdMyb10

Pada Tanaman HC dan HC transgenik
Gambar Perubahan fenotipik pada Holsteiner Cox (HC) menggunakan vektor biner
pJan-MdMyb10

A = eksplan pada media regenerasi

B = tunas regenerasi in vitro
C = daun tanaman aklimatisasi (kiri, kontrol; kanan, tanaman transgenik)
D = planlet berakar (kiri, kontrol; kanan, tanaman transgenik).
Gambar Perubahan fenotipe pada Gala
menggunakan vektor biner pJan-MdMyb10

A = sampel ada di media regenerasi

B = sampel tanaman pada kondisi in vitro
C = daun tanaman aklimatisasi
(kiri, kontrol; kanan, tanaman transgenik).
Gambar Jalur Biosintesis Flavonoid Pada Apel Yang Diregulasi Gen Mdmyb10
 Kesimpulan dan Saran
• Peningkatan senyawa flavonoid pada tanaman apel setelah
dilakukan overekspresi gen faktor transkripsi MdMyb10
• Penelitian ini dapat dijadikan referensi dalam strategi
meningkatkan flavonoid untuk ketahanan tanaman melalui
modifikasi genetik
• Penelitian lebih lanjut  apel transgenik diberikan tekanan
biotik dan abiotik
 Daftar Pustaka

Rihani, K.A.L., Hans, J., Thomas, H.Wilfried, S., dan

Fathi, H. 2017. Metabolic engineering of apple by
overexpression of the MdMyb10 gene. Journal of
Genetic Engineering and Biotechnology. 15 : 263-
273.
Terima kasih