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Automatización en

Bacteriologia Clínica
Automatización y métodos rápidos
 Estudia la mejora de los métodos
 Aislamiento
 Detección precoz
 La caracterización (identificación) y
 La enumeración de los microorganismos y sus
productos
 En muestras
 Clínicas
 De alimentos
 Industriales y ambientales
Métodos
Automatizados Rápidos
 Detección de  Para identificación y
crecimiento diagnóstico
 Turbidez
 Sistemas manuales
 Metabolitos radiactivos
 Impedeancia eléctrica  Sistemas mecanizados
 Bioluminiscencia  Sistemas
 Identificación inmunológicos
 Colorimetria  Sistemas moleculares
 Cromatografía para Ag
y metabolitos  Otras técnicas
 Métodos inmunológicos
 Antibiograma
Turbidez
 Por densidad óptica
 Por nefelometría o dispersión de la luz
 Como indicador de crecimiento y desarrollo
 Determinar si existe microorganismos en muestras
 Medicamentos estériles
 Orinas (detección de infección clínicamente
significativa)
 Indicador de crecimiento
 En presencia de inhibidores específicos
 Sensibilidad a Antibióticos
 Formato cubetas microdilución
 Agitador incubador

Métodos radiactivos
 Producción de metabolitos
radiactivos
 Un ejemplo Biotec
 Producción de CO2 radiactivo gaseoso
 Por microorganismos que metabolizan
sustancias marcadas con 14 C : glucosa,
aminoácidos y alcoholes
 Hemocultivos
 Se analiza producción de 14C
Impedancia eléctrica
 Se mide los cambios de impedancia
 Las variaciones en el flujo de corriente
eléctrica que atraviesa el medio en el cual se
esta incubando la muestras
 Rápido y automático
 Control contínuo
 Primer signo de variación

 No requiere manipulación
manual ni técnica (industria alimentaria)
Bioluminiscencia
 Basado en luciernagas (reacción química)
 Conversión del sutrato luciferina en
oxiluciferina y luz
 Catalizada por la enzima luciferasa con energía
proveniente de la desfosforilacóon de ATP
 Luminómetro (similar al fotómetro)
 Mide la luz generada por esta reacción
 Cantidad de luz producida
 Es directamente proporcional al ATP presente
Bioluminiscencia

 Gen Reporter
 Detección de viabilidad del crecimiento bacteriano
por bioluminescencia (Luciferasa)
 También se ha observado variación de la intensidad
de luz producida por cepas sensibles y resistentes

TM4 luciferina

FÓTON

ATP
Colorimetría

 Pruebas bioquímicas convencionales


 Cambios de color de los indicadores de pH

 Presencia de productos finales del metabolismo

 Célula fotoeléctrica
 Mide cambios de color

 Combinación colorimetría + nefelometría


 Combinación identificación + antibiograma
Un ejemplo VITEK
 Automatización total / rapidez 2-6
hrs
 Cartuchos o placas
 30-45 micropocillos con sustratos
 Varios cartuchos
 Gram negativos 90 especies
 Gram positivos 49 especies
 Anaerobios 80 especies
 Neisseria y Haemophylus 30
especies
 Antibiogramas
 MIC varias configuraciones
 Varios modelos
Cromatografía
 Diagnóstico de enfermedad infecciosa
 Mediante identificación de constituyente
antigénico
 Mediante identificación de productos del
metabolismo bacteriano
 Cromatografía en fase gaseosa
 Anaerobios
 Comatografia líquida de alta performancia
(HPLC)
Identificación inmunológica
 Anticuerpos monoclonales
 Métodos automatizados
 Contrainmunoelectroforésis
 Nefelometría
 RIA (Radioinmunoanalisis)
 ELISA
 Ampliamente utilizado

 Para detectar Ag- Ab

 Para virus, bacterias, hongos y parásitos


Rápidos

Para identificación y diagnóstico

 Multiples pasos
 Identificación convencional
 Código numérico
 Sistema unitario
 Más rápido
 API 20E (Enterobacteriaceae)
 20 pruebas bioquimicas
 Sustancias deshidratadas
 En 5 – 8 h pérfil de cifras
Biochemical reactions:

API 20E Enterobacteriaceae +


18-24 h
Generate profile #
Biochemical reactions:
ENTEROTUBE II
12 tests
O/N
MICRO-ID & MICRO-ID Listeria*
15 tests
4h
Identificación automatizada

 VITEK (2 – 6 h)
 300 especies clínicas
 Biolog
 Microplacas
 Cataboliza 95 fuentes de C
 Tetrazolium: indicador de
BD Crystal™ Autoreader: Lector
actividad microbiana automático de paneles Cristal.
 BBL® cristalTM Gram positivo ID Kit
 121 G +
 Entericos y no fermentadores,
identificacion de bact Gram –
aerobias y bacilos gram negativos
no fermentadores de glucosa
Kits inmunológicos rápidos

 Más útiles cuando


 No es posible cultivar (Treponema)
 Es peligroso (Rickettsias)

 Es demasiado complejo (Mycobacterium)

 Fácilde usar
 Rápidos

 Sensibles

 Específicos
Ejemplos de detección de Ag

 Estreptococo grupo A en frotis faríngeo


 Culturette Group A Strep ID kit, Directige
 Virus sincitial respiratorio en frotis
nasofaríngeo
 VHS (Virus Herpes Simple) en 1-2 minutos
 En LCR Neisseria meningitidis,
Streptococcus pneumoniae, Haemophilus
influenzae
 Bactigen, Directigen
 Detectar y confirmar Staphylococcus aureus
 Staphaurex en 30 segundos
Ejemplos de detección de Ac.

 Ac. contra VIH


 SUDS HIV-1 en 10 minutos
 Ac.contra Helicobacter pylori en
suero
 Quick Vue H pylori Test en 7 minutos
 LINKª H. PYLORI en 5 minuto

 LINK2ª H. PYLORI en 1 minuto


Inmunocromatografia
 Microesferas latex 
 coloreadas (azul)
 Ligadas a sustancia
(250)
 Ag o Ac (Ac Listeria)
 Reaccionan con
muestra
 complejo Ag-Ac
 migración lateral
 Ac inmovilizado
 retiene complejo Ag-Ac
 evidencia línea de color