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MÉTODO DE DIFUSIÓN EN DISCO

(BAEUR-KIRBY)
ANTIBIOGRAMA: MÉTODOS

Cuantitativos:
• Resultados en términos de Concentración Mínima
Inhibitoria (CMI).
• Técnicas:
 Dilución en caldo o agar
 E-test
Cualitativos:
• Resultados en forma de diámetros de halos de inhibición
• Técnica: Difusión con discos.
MÉTODO DE DIFUSIÓN EN DISCO
(BAEUR-KIRBY)

• Es el mas difundido.
• Prueba la inhibición o resistencia de los microorganismos, enfrentándolos con
los medicamentos que se encuentran impregnados en pequeños discos.
CLASIFICACIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS

• ß-lactámicos: Penicilinas, Monobactam.


• Glicopéptidos:Vancomicina.
• Aminoglicósidos: Gentamicina, Amikacina.
• Macrólidos: Eritromicina, Azitromicina,
• Claritromicina.
• Quinolonas: Ciprofloxacino, Levofloxacino.
• Tetraciclinas
• Sulfonamidas y trimetoprim: Bactrin ,Exazol.
MEDIO DE CULTIVO UTILIZADO

Mueller Hinton
 En primer lugar es un medio no selectivo y
no diferencial.
 Es un agar suelto, lo que permite una mejor
difusión de los antibióticos, por lo que se
observarán las zonas de inhibición
verdaderas.
 Además, contiene almidón, que absorberá las
toxinas liberadas por las propias bacterias, de
modo que no interfieran con los antibióticos.
FACTORES QUE INFLUYEN EN EL AGAR

pH: El rango de pH va de 7,2 a 7,4.


variación de cationes divalentes: Ca y Mg: Afectan los halos de inhibición para
aminoglucósidos y tetraciclinas en Pseudomonas aeruginosa.
Profundidad del Agar: La profundidad recomendada de la capa de agar es de 3 a 5
mm.
PREPARACIÓN DEL INÓCULO

Se prepara el inoculo con ajuste a la turbidez McFarland 0,5


que corresponde aun diámetro de1.5 x10UFC/ML, directo
en caldo de colonias frescas en agar no selectivo.
INOCULACIÓN DE LA PLACA

Con un hisopo estéril en tres direcciones inocular toda la placa (giros de 60°).
APLICACIÓN DE SENSIDISCOS

 Separación: Los discos deben de


estar separados 24 mm (del
centro de un sensidisco al otro
más cercano).
 Cantidad: 12 unidades en placas
de 150mm y 5 unidades en
placas se 100mm.
LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS
RESULTADOS

Categorías de interpretaron:
 Sensible: El microorganismo presenta un gran área de inhibición causada por
el fármaco. 95% éxito
 Intermedio: Se presenta un halo de inhibición mas reducido.
 Resistente: Presenta muy poco o casi nada de halo.
MEDICIÓN DE LOS HALOS

Después de incuba las placas del


antibiograma se procederá a la
lectura de este.
Se usa una regla y se mide el
radio del halo de inhibición
partiendo de desde donde está el
disco de antibiótico hasta donde
se inhibió el crecimiento.
La longitud obtenida después se
compararán con estándares que
nos dirán si el medicamento será
efectivo o no en el tratamiento.
MÉTODO DE DILUCIÓN EN AGAR
DILUCIÓN EN AGAR

• Es un método bien establecido para la determinación de la sensibilidad a los


antimicrobianos.
• Se preparan varias placas de medio de cultivo solido en base agar Mueller-
Hinton cada una con una concentración de antimicrobiano y se hace crecer el
microorganismo.
• Tiene buena reproducibilidad de los resultados de sensibilidad permite buen
crecimiento de la mayoría de patógenos.
Inoculación en placas

Determinación
de CIM al
encontrar la
concentración
Concentración de antibiótico (mg/L) más baja sin
producir
crecimiento
INTERPRETACIÓN

1. La CMI será la concentración de antibiótico contenida en el agar de la


primera placa sin colonias bacterianas.
2. Si el microorganismo crece en todas las placas, la CMI es superior a la mayor
concentración de antimicrobiano estudiada.
3. Si no crece en ninguna de las placas, la CMI es inferior a la menor
concentración de antimicrobiana estudiada.