TRADICIONALES
PROF. EVELYN GUTIÉRREZ OPPE
BIOPROCESOS ANAERÓBICOS
• Producción de etanol
• Producción de ácido láctico
• Producción de acetona-butanol
PRODUCCIÓN DE ETANOL
https://www.youtube.com/watch?v=l3B2IhGIOnY
(equipos biotecnológicos
PRODUCCIÓN DE ÁCIDO
LÁCTICO
• El ácido láctico tiene dos formas ópticamente activas llamados D- y L-ácidos lácticos. El principal uso del ácido L-láctico
se encuentra en los alimentos (más del 50%) como un acidulante y conservante, también se usa como producto químico
intermedio. Cerca del 50% del mercado está en aplicaciones de alimentos y bebidas. incluyen polímeros biodegradables,
solventes y agentes de limpieza. Los principales productores de ácido láctico son Estados Unidos, Japón, Bélgica, los
Países Bajos, España y Brasil. China e India también son productores.
• Las bacterias productoras son: homoláctico (Lactobacillus sp. Streptococcus sp., Pediococcus sp.) y heterolacticas
(algunas Streptococcus sp., Leuconostoc sp.). Las especies Homolactic de Lactobacillus y Streptococcus se utilizan
generalmente para la producción de ácido láctico.
• La bacteria Homolactic puede producir ácido láctico de pentosas, así como hexosas distintas de la glucosa. Por lo
general, los ácidos láctico y acético se producen a partir de la fermentación de pentosas. El rendimiento del producto
con respecto a la glucosa suele ser superior a 0,9 g / g. Los organismos crecen a temperaturas superiores a 40 ° C y pH
entre 5 y 7.
• La fermentación heterolactica es indeseable debido a la formación de subproductos, sin embargo, puede ocurrir
dependiendo de la flora microbiana, la disponibilidad de energía y las condiciones de fermentación. El rendimiento
teórico de ácido láctico es 0,5 gramos por gramo de glucosa.
• La materia prima ideal debe ser económica, dar altas tasas con alta los rendimientos de los productos, no formar
subproductos ,no requerir un pretratamiento significativo, y estar disponible todo el año. La sacarosa de jugo de caña
de azúcar o remolacha azucarera, lactosa de suero de queso, y maltosa o dextrosa de almidón hidrolizado se utilizan
como materias primas en la industria.
CONDICIONES DE PROCESO
• Los fermentadores están hechos de acero inoxidable y están equipados con bobinas de transferencia de calor. Los recipientes son
esterilizados a vapor. Se da una agitación lenta para evitar la sedimentación del carbonato de calcio. Las condiciones de fermentación
generalmente están en el rango de T = 45-60 ° C y pH = 5-6.5 para L. delbrucki; T = 43 ° C, pH = 6-7 para L. bulgaricus; y T = 30-50 ° C,
pH <6 para Rhizopus. El tiempo de fermentación es de 1 a 2 días para una fuente de azúcar al 5%, como suero, y de 2 a 6 días para una
fuente de glucosa o sacarosa al 15%. En condiciones óptimas, el tiempo de procesamiento puede reducirse a 1-2 días.
• La tasa de formación de ácido láctico depende de temperatura, pH, azúcar, nitrógeno y concentraciones de ácido láctico. El ácido láctico
producido debe neutralizarse, generalmente mediante la adición de carbonato de calcio o hidróxido de calcio. CO2 se libera
continuamente durante la fermentación, lo que crea condiciones anaeróbicas en el fermentador.
• Las productividades de formación de ácido láctico están en el rango de 1-3 kg / m3 h. El rendimiento de ácido láctico al final de la
fermentación es 90-95% de la concentración inicial de azúcar. La productividad y rendimiento (100 kg / m3) de ácido es más alta en
reactores continuos que discontinuos. La eliminación continua del ácido láctico de los cultivos por membranas de diálisis aumenta las tasas
de producción.
• La recuperación de ácido láctico del caldo de fermentación constituye una parte importante de costo de producción. El primer paso es
aumentar la temperatura del fermentador a 80-100 ° C y el pH a 10-11. Este procedimiento mata los organismos, coagula las proteínas,
solubiliza el lactato de calcio y degrada algunos de los azúcares residuales. El líquido se filtra para eliminar la biomasa y se agrega ácido
sulfúrico para obtener ácido láctico. El sulfato de calcio se elimina por filtración y el ácido luego se concentra, se puede lograr con
precipitación de lactato. El lactato de calcio se cristaliza luego y se separa del licor madre. Estos tratamientos incluyen blanqueamiento con
carbón activado, intercambio iónico, electrodiálisis, extracción con solvente, y esterificación. El ácido láctico comestible es incoloro y
contiene 50-65% de ácido láctico. Las aplicaciones farmacéuticas requieren más del 90% de ácido láctico puro.
PRODUCCIÓN DE ACETONA-
BUTANOL
• La acetona se usa como solvente para grasas, aceites, ceras, resinas, lacas y plásticos de caucho. El butanol
se usa en la producción de lacas, rayón, detergentes y líquidos de frenos; y como solvente para grasas, ceras
y resinas. El butanol es un mejor aditivo de combustible que el etanol por su baja presión de vapor, baja
solubilidad en agua y completa solubilidad con combustible diésel. La acetona y el butanol (A / B) se
producen a partir de productos intermedios de la industria petroquímica.
• Las especies de Clostridium se usan para la producción de acetona-butanol. Tiene enzimas amilolíticas y
sacarolíticas para hidrolizar el almidón gelatinizado a glucosa y maltosa. La C. acetobutylicum puede
fermentar una gran cantidad de carbohidratos como glucosa, lactosa, fructosa, galactosa, xilosa, sacarosa,
maltosa y almidón. Los productos de fermentación incluyen acetona, butanol y etanol. Los ácidos acético y
butírico, CO2 e hidrógeno también se producen en pequeñas cantidades
• Almidón, melaza, suero de queso, alcachofa de Jerusalén y lignocelulósicos hidrolizados pueden usarse como
materia prima para fermentaciones de acetona-butanol. Se puede obtener un rendimiento del 38% y una
relación de butanol a acetona de 2,75 usando la alcachofa de Jerusalén rica en inulina. Cuando se utiliza la
ultrafiltración de suero de queso, la relación butanol a acetona es 10 sin ninguna acumulación intermedia de
ácidos acético y butírico. Los hidrolizados lignocelulósicos (madera, papel, residuos de cultivos) contienen
glucosa, galactosa, manosa y azúcares pentosas, la mayoría de las cuales son fermentables por C.
acetobutylicum a acetona y butanol.
CONDICIONES DE PROCESO
https://www.youtube.com/watch?v=Vfpru30YOPM (COMO
FUNCIONA BIOGAS)
BIOPROCESOS AEROBICOS
• Ácido cítrico
• Levadura
• Penicilina
ACIDO CÍTRICO
• El ácido cítrico se usa como acidulante en alimentos, productos de confitería y bebidas (75%). Las
aplicaciones farmacéuticas (10%) e industriales (15%) también son importantes. Los complejos de Ácido
cítrico con metales pesados como hierro y cobre se pueden utilizar como un estabilizador de aceite y grasas
En la industria farmacéutica, el ácido cítrico puede usarse en antiácidos, aspirina soluble preparaciones, y
como un estabilizador de ácido ascórbico. Sales metálicas de ácido cítrico como citrato trisódico se utilizan
para prevenir la coagulación de la sangre al formar complejos de calcio. Citrato de trisodio puede usarse en
detergentes y productos de limpieza como un agente de limpieza en lugar de fosfatos.
• El ácido cítrico presente en los cítricos se cristalizó por primera vez a partir de jugo de limón en forma de
citrato de calcio. Más tarde, el ácido cítrico se sintetizó a partir de glicerol. La producción de ácido cítrico
de soluciones de azúcar por bioprocesos aeróbicos se realizó por primera vez con el uso de Penicillium.
Debido a bajos rendimientos obtenidos de Penicillium, se utilizó Aspergillus niger en posteriores procesos
desarrollados.
• El Aspergillus niger es el organismo más utilizado para la producción de ácido cítrico a partir de melazas o
soluciones de azúcar. La levadura Candida también puede usarse para producir ácido cítrico de
carbohidratos o n-alcanos, con rendimientos de hasta 225 g / l. Melaza de remolacha o caña puede ser
utilizado como fuente de carbohidratos para la producción de ácido cítrico. Concentraciones típicas de
elementos traza son 0.3 ppm de zinc, 1.3 ppm de hierro y Mn <0.1 ppm. Las altas concentraciones de
metales pueden ser reducidos con la adición de Na- o K-ferrocianuro. Nitrógeno, fosfato y otras sales
inorgánicas pueden no ser requeridas. Utilización de soluciones puras de glucosa o sacarosa es costoso y
requiere adiciones de nitrógeno (NH4)+, fosfato y sales inorgánicas.
• Dado que el ácido cítrico es un producto de metabolismo primario, se produce en altas concentraciones
solo bajo condiciones muy específicas: alta concentración de azúcar, alta concentración de oxígeno disuelto,
pH inferior a 2, y ausencia de oligoelementos, tales condiciones provocan un desbordamiento en el
metabolismo que resulta en una sobreproducción de ácido cítrico. Los ácidos oxálico y glucónico se
producen si el pH está por encima de 2. Se agrega ferrocianuro de potasio para reducir la concentración de
metales y es un inhibidor de crecimiento que promueve la producción de ácido cítrico.
• El ácido cítrico fue producido históricamente por la fermentación superficial de la melaza de remolacha, y
este proceso todavía es empleado por algunos fabricantes. Las melazas de remolacha diluidas esterilizadas,
con una concentración de azúcar de 150 g / l y un pH de 6, se coloca en bandejas en una temperatura
controlada (30 ° C) y sala limpia aireada. Se agregan al medio nutrientes adicionales esterilizados y
ferrocianuro alcalino. Las esporas de A. niger se extienden sobre el líquido en las bandejas. El micelio forma
una capa en la superficie del medio. Después de 7-10 días de incubación, las bandejas se vacían, el micelio es
eliminado, y el medio se transfiere a la sección de recuperación. La producción de ácidos glucónico y
oxálico se pueden evitar mediante selección de cepas. Los fermentadores pueden ser torres mecánicamente
agitadas o aireadas con un tubo de aspiración de reciclaje interno. La aireación se proporciona al
fermentador mediante burbujeo de aire y se controla la temperatura con serpentines de enfriamiento. La
agitación suele ser suave (50-100 rpm), la melaza diluida con otros nutrientes se agrega al fermentador. El
pH inicial se ajusta en 2.5 a 3.
CONDICIONES DE PROCESO
• Las esporas de A. niger pueden germinar en un medio de inóculo antes siendo transferido al
fermentador principal. En algunos casos, las esporas se introducen directamente en los
medios de fermentación (5 a 25 x 106 esporas / l). Se puede usar aire enriquecido con
oxígeno en algunos casos. Alrededor del 80% del carbono suministrado se convierte en
ácido cítrico en una fermentación típica. Los rendimientos volumétricos típicos de los
procesos por lotes alimentados son alrededor de 130 kg / m3. Cuando la producción de
ácido cítrico se detiene, generalmente después de 4-5 días, los fermentadores se vacían y la
biomasa se separa del caldo por filtración. El líquido se transfiere a la sección de
recuperación.
• La precipitación generalmente se logra mediante la adición de hidróxido de calcio (cal) al
caldo de fermentación calentado para obtener citrato de calcio tetrahidratado. El
precipitado es entonces lavado y tratado con ácido sulfúrico diluido, dando una solución
acuosa de ácido cítrico y CaSO4 (yeso) precipitado. Después del blanqueo y la
cristalización, se obtiene ácido cítrico ya sea anhidro o monohidrato. La extracción con
solvente es otra opción para la recuperación de ácido cítrico, aunque no se usa
comercialmente. La extracción evita el uso de cal y H2SO4 y formación de yeso; sin
embargo, puede provocar la extracción de algunas impurezas presente en melaza. Las
cetonas, los hidrocarburos, los éteres y los ésteres se pueden usar como extractantes. La
extracción de ácido cítrico se realiza a baja temperatura y luego se elimina el disolvente con
agua caliente.
PRODUCCION DE LEVADURA
La levadura de pan es esencial para los productos horneados modernos con los que
estamos familiarizados. Hoy en día, la producción mundial de levadura de panadería
está en el nivel de un millón de toneladas por año. S. cerevisiae es superior a otras
especies de levadura con fines de horneado, principalmente debido a su capacidad de
generar gas (por ejemplo, CO2) en la masa. Las cepas de levadura más adecuadas se
seleccionan en el laboratorio y se almacenan por liofilización.
El proceso se basa en el cultivo aeróbico de Saccharomyces cerevisiae en
carbohidratos. La melaza es la fuente más utilizada de carbono y energía para la
producción de levadura de panadería. Es económico, rico en nutrientes (nitrógeno,
fósforo y minerales), y está disponible todo el año. Otros carbohidratos como
glucosa, sacarosa, fructosa o almidón hidrolizado pueden ser usados. El amoníaco
acuoso (NH4OH), las sales de amonio o la urea pueden usarse como fuentes de
nitrógeno. El ácido fosfórico también se puede agregar como fuente de fosfato,
algunas sales de Mg y Fe pueden ser necesarias. Algunas cepas de levadura requieren
vitaminas B, así como Na, K, Mg, Ca y iones sulfato para un crecimiento efectivo.
CONDICIONES DE PROCESO
• Los rendimientos típicos son de aproximadamente 0,5 gramos de células / gramo de sustrato y 1 g
de células por gramo de oxigeno La tasa de crecimiento específica máxima de la levadura es 0.6 h-1
(tiempo de duplicación de 1.2 h). La temperatura y el pH del medio de fermentación se controlan a
30 ° C y 6-7, respectivamente. Se requieren altas concentraciones de oxígeno disuelto (más de 2
mg / l) para promover la producción de biomasa. Las altas concentraciones de carbohidratos
pueden provocar la producción de etanol incluso en condiciones aeróbicas. El etanol es inhibidor
de la célula crecimiento y reduce el rendimiento de biomasa.
• Los resultados de la separación por centrífuga dan una crema de color claro con
hasta 22% de sólidos de levadura. La crema se almacena en agitada tanques a 2-4 ° C,
y parte se usa para sembrar fermentaciones adicionales. La levadura de panadería
puede venderse en forma de crema, en forma comprimida (30% de sólidos de
levadura), o secarse (95% sólidos de levadura).
• Filtros rotativos de vacío se utilizan para concentrar la crema. La levadura filtrada se
puede mezclar con emulsionantes antes de ser extruida en pasteles de levadura o
empacado en bolsas de papel grandes. La levadura de panadería fresca se puede
comercializar como partículas de flujo libre agregando ingredientes tales como
almidón modificado o celulosa micronizada.
• Para producir levadura seca activa, la torta de levadura filtrada se extruye en
partículas que son secadas en una corriente de aire caliente. La temperatura de
secado es usualmente 45 ° C ya que mueren a temperaturas superiores a 50 ° C, el
tiempo puede variar de 20 minutos a varias horas, dependiendo del tipo de secador
utilizado. El contenido de humedad final de las levaduras después del secado es de
aproximadamente 5-10%. El secador Roto-Louvre es un cilindro vacío que gira a 1-4
rpm, la duración es de 10-15 h. En los secadores de lecho fluidizado, la temperatura
de secado y el tiempo son 45 ° C y 1-2 h, respectivamente. Los secadores por
pulverización son los más utilizados, la temperatura y el tiempo de secado son 50 ° C
y 10-20 min, respectivamente.
https://www.youtube.com/watch?v=QnSo0ibrBRw (LA
LEVADURA)
PENICILINA
• Diferentes especies del género Penicillium se utilizan para producir diferentes formas de
penicilina. La variedad utilizada por Fleming fue P. notatum. Más tarde, se usaron diferentes
cepas, como P. chrysogenum, que es la más ampliamente utilizada tensión utilizada en la
industria. Las cepas seleccionadas se almacenan en forma de esporas liofilizadas. Las células
vegetativas pueden congelarse a -70 ° C con glicerol como medio de suspensión.
• P. chrysogenum puede usar una variedad de carbohidratos y aceites como fuentes carbono
y energía, entre ellos se encuentran la glucosa, la sacarosa, el almidón hidrolizado, la lactosa
y la melaza. El aceite de maíz con lactosa produce una producción rápida de penicilina
altamente concentrada. La formulación media ha cambiado significativamente con los nuevos
desarrollos. Una composición típica es: glucosa o melaza, 10%; sólidos de licor de maíz
empinado, 4-5%; ácido fenilacético (alimentación continua), 0.5-0.8% total; aceite vegetal
antiespumante, 0.5% total.
• El licor de maceración de maíz (CSL) se utiliza como fuente de nitrógeno, ya que da como
resultado un rendimiento mayor de penicilina en comparación con las otras fuentes de
nitrógeno. Algunos compuestos en CSL se convierten al ácido fenilacético u otros
precursores de cadena lateral. La adición continua de sulfato de amonio para mantener la
concentración de amonio se requiere (250-300 mg / l) para la síntesis continua de penicilina
y para evitar la lisis del micelio.
CONDICIONES DE PROCESO
• Ciertos precursores de la cadena lateral de penicilina deben agregarse al medio de fermentación. Esto constituye un
elemento de costo mayor. Penicilina G requiere 0.47 g de sodio fenilacetato y penicilina V 0,5 g de fenoxiacetato
sódico por gramo de penicilina producida, más del 90% de los precursores se incorporan a la estructura de la
penicilina. El fósforo suministrado suele ser suficiente, ya que la concentración de fosfato debería ser limitante (200-
300 mg / l) en los medios para la producción de penicilina.
• El proceso para producir penicilina implica una fase de lote inicial en la que se produce el crecimiento celular. En las
primeras 40 h se logra un crecimiento rápido con un tiempo de duplicación de casi 6 h. Después de obtener una alta
densidad celular, los nutrientes (glucosa y CSL) y los precursores se agregan lenta o intermitentemente para reducir el
crecimiento celular a 0.02 h-1 y maximizar la producción de penicilina. Las concentraciones de oxígeno, carbono,
nitrógeno y fosfato deben ser bajas. La preparación del cultivo comienza con esporas liofilizadas y cultivos de agar
inclinado. Las células vegetativas se cultivan en matraces de agitación y luego se transfieren a fermentadores de semillas
(10-100 l). Los fermentadores de producción son tanques agitados de 200-500 m3.
• La agitación mecánica a un ritmo de 100 a 300 rpm, temperaturas alrededor de 25-28 ° C (26 ° C óptimo). Se agrega
antiespumante para reducir la formación de espuma. El oxígeno disuelto se controla a > 2 mg / ly pH a 6.5. La aireación
vigorosa se suministra desde la parte inferior de los fermentadores mediante un anillo. Debido a la alta viscosidad del
caldo, la transferencia de oxígeno es un problema importante en fermentaciones de penicilina. En algunos casos, se
prefieren las cepas de pellets porque el medio es menos viscoso y se mejora el suministro de oxígeno. La fermentación
se detiene cuando la tasa de absorción de oxígeno del cultivo excede la tasa de transferencia de oxígeno del reactor, o
cuando 80% del fermentador está lleno.
• El proceso original para la recuperación de la penicilina del caldo de fermentación fue basado en adsorción
en carbón activado. Después de lavar con agua, el carbón activado se eluyó con 80% de acetona. La
penicilina se concentró por evaporación al vacío a 20 a 30 ° C. La solución acuosa restante se enfrió a 2 ° C,
se acidificó para pH = 2-3, y la penicilina extraída con acetato de amilo. La penicilina se cristalizó de acetato
de amilo con sales minerales en exceso a un pH de 7 a vacío. Este proceso no es económico debido al alto
costo del carbón activado.
• La extracción con solvente se lleva a cabo a pH bajo como 2.5-3, usando acetato de amilo o acetato de
butilo como disolvente. Extractores centrífugos continuos, en contracorriente, multietapa se utilizan para
este propósito. El coeficiente de distribución de la penicilina G o V entre la fase orgánica y acuosa depende
fuertemente del pH del medio. Con un pH de 3, el coeficiente de distribución es de aproximadamente 20.
Las penicilinas G y V se degradan en condiciones ácidas con una cinética de primer orden. Para evitar la
degradación de la penicilina durante extracción con solvente a pH bajo, la temperatura se mantiene
alrededor de 2-4 ° C y se mantiene el tiempo de filtración muy corto (1-2 min). Dos extractores usados en
serie resultan en casi un 99% de recuperación de penicilina.
• La adsorción con columnas de carbón activado en serie se usa para eliminar impurezas y
pigmentos del disolvente rico en penicilina después de la extracción. La penicilina puede
volver a extraerse al agua mediante la adición de álcali (KOH o NaOH) o tampón a pH de 5
a 7.5. La relación de agua a solvente en esta extracción generalmente está entre 0.1 y 0.2.
Se puede usar un extractor de contracorriente continuo de etapas múltiples para este
propósito.
• La cristalización puede realizarse a partir del disolvente o la fase acuosa. Na, K y las
concentraciones de penicilina, el pH y la temperatura deben ajustarse para la cristalización.
Los cristales pueden lavarse y presecarse con alcohol butílico anhidro para eliminar algunas
impurezas.
• Los costos más importantes en la producción de penicilina son las materias primas (35%) y
servicios públicos (14%). Al usar materias primas más baratas, como melaza o almidón, y
cepas genéticamente mejoradas que producen mayores rendimientos de penicilina, los
costos de producción pueden reducirse significativamente. Más del 80% de la penicilina
producida se utiliza para la síntesis de 6-APA y otros intermedios.
https://www.youtube.com/watch?v=WOstCO6nzZc (LA
PENICILINA)
TRATAMIENTO DE AGUAS
https://www.youtube.com/watch?v=flKuePzXR2A (DEPURADORA
DE AGUA CON ALGAS)