Transcrição e Processamento de

RNA

Agradecimentos: Profa. Dra. Aline Maria da Silva

Instituto de Química- USP

Bibliografia:
Genes VII - Benjamin Lewin
Biologia Molecular Básica-Arnaldo Zaha
Lenhinger Principles of Biochemistry (3a. Ed.)
 - Processo para
síntese de todos
Replicação os RNAs da
célula
- Reflete o
Transcrição estado fisiológico
Transcrição Reversa da célula
- O conjunto de
Replicação de RNA
genes expressos
em uma dada
situação é
variável
Tradução
- Processo
catalisado pelas
RNAs
polimerases
Proteína
 Principais Tipos de RNA

RNA mensageiro (mRNA): contém a informação

genética para a sequência de aminoácidos das
proteínas
RNA transportador (tRNA): identifica e
transporta os aminoácidos até o ribossomo
RNA ribossômico (rRNA): constituinte dos
ribossomos
 tRNA
-Estrutura secundária
com grampos e alças
formando um trevo

-Alto número de
bases modificadas
depois da sua
transcrição
Bases modificadas nos tRNAs
Processamento do precursor do tRNA

Modificação
das bases Processamento

tRNA maduro
Ribossomo bacteriano Ribossomo Eucariótico
70S (2,7 x 106) 80S (4,6 x 106)

rRNAs:
 Processamento do precursor do rRNA
RNA precursor
30S

Metilação das
bases

Clivagem

RNAs maduros
 Exemplos de rRNAs:

- Estrutura secundária
com grampos e alças

- Bases metiladas
E.coli:
Transcrição

DNA fita codificadora

DNA fita molde

RNA transcrito
Síntese de RNA: formação
da ligação fosfodiester
envolve o ataque nucleofílico
do 3’ OH da cadeia
crescente no fosfato do
carbono 5´do
ribonucleosídeo trifosfatado
que será incorporado

A RNA polimerase não

requer um iniciador
(primer) para iniciar a
síntese do RNA
Bolha de transcrição

RNA
polimerase

Fita molde

Direção da transcrição
Direção da transcrição
RNA polimerase de E.coli
 Ligação ao
RNA polimerase de promotor
E.coli

As RNA polimerases
não tem mecanismo Centro
catalítico
de correção de erro
(taxa de erro 10-5)

Reconhecimento
específico do
promotor
Promotores de genes bacterianos

Região -35 Região -10 Posição +1

 Reconhecimento e
Ligação ao promotor
Início da Transcrição

Deslocamento da
subunidade sigma
Marcação do DNA com 32P
Footprinting
de DNA
Tratamento
com DNAse

Regiões ligadas a
RNA polimerase

Separar os fragmentos em uma

eletroforese em gel de
poliacrilamida. Visualizar
fragmentos após exposição a
filme de Raio-X
Substituição do fator sigma controla a iniciação: Os
distintos fatores sigma reconhecem promotores
diferentes
Bolha de transcrição

RNA
polimerase

Fita molde

Direção da transcrição

5´ 3´
Terminação da transcrição
através da formação do
grampo de terminação
 Terminação da transcrição
dependente da proteína Rho

Rho (46kDa, ativa como hexâmero)

move-se ao longo do RNA
acompanhando a RNA polimerase

Com a pausa da RNA polimerase na

sequência de terminação, Rho alcança a
enzima

Rho desenrola o híbrido RNA-DNA

Sequência de Terminação
dependente de Rho: rica em C
A RNA polimerase bacteriana é inibida por
rifamicina (liga a subunidade beta)

A subunidade beta da
RNA pol contem 5
sítios de ligação para
rifamicina

O antibiótico previne
o início da síntese da
cadeia de RNA,
imediatamente após a
formação da primeira
ligação fosfodiester
 Agentes intercalantes
inibem tanto a
transcrição com a
replicação, em
procariotos e
Actnomicina D eucariotos

Acridina
 0 gene geralmente é maior do que a sequência codificadora para a proteína

5´UTR 3´UTR

Proteína

UTR: Região não traduzida (Untranslated region)

0 mRNA bacteriano pode ser policistrônico (poligênico)

Distância intergênica
5´UTR 3´UTR
(-1 a 40 bases)

Gene A Gene B

início fim início fim

 Núcleo
Etapas envolvidas
na expressão de
genes em
Transcrição
eucariotos

Processamento

Transporte

Tradução

Citoplasma
 RNA polimerases de eucariotos

RNA pol I Nucleólo rRNA Várias subunidades

RNA pol II Nucleoplasma hnRNA Várias subunidades

(transcrito
primário)
snRNA
RNA pol III Nucleoplasma rRNA 5S Várias subunidades
tRNAs
RNA pol Mitocondria 01 subunidade
Mitocondrial
RNA pol de Cloroplasto Similar as
Cloroplastos bacterianas

Requerem proteínas auxiliares: fatores de transcrição

A RNA polimerase II é inibida especificamente
por -amanitina

Isolado do cogumelo
Amanita phalloides

Altamente tóxico

Bloqueia a etapa de
elongação
Estrutura típica de um gene transcrito pela RNApol II

Enhancer Promotor Gene

Estrutura de Promotores da RNA Pol II
Promotores de genes transcritos pela RNApol II

Tata Binding Protein

Complexo TFIID
Promotores de genes
transcritos pela
RNApol III e I:
A TBP também é
componente dos
complexos de iniciação
de transcrição destes
promotores
 Domínios dos Fatores de Transcrição

Domínio de Ativação

Domínio conector

Domínio de ligação ao DNA

Proteínas necessárias para transcrição a partir de promotores
reconhecidos pela RNA Pol II
Procariotos

Eucariotos
Splicing
 Adição do 5´CAP
(modificação da extremidade 5´do hnRNA)
 Etapas para geração do
Transcrição e transcrito maduro
adição do 5´cap

(hnRNA)

Clivagem,
poliadenilação e
splicing
Poliadenilação:
Adição da cauda poli (A) na
extremidade 3´do hnRNA
(transcrito primário): ~200
Adeninas

Sequencia sinal para

poliadenilação
 (hnRNA)

Splicing: remoção dos introns

Genes eucarióticos são em geral

interrompidos por introns
Mamíferos tem maior número de
exons/gene número de
Tamanho de introns em Exons que codificam para proteínas
vertebrados é variado são usualmente pequenos
AGGUAAGU-----Pyr---A--NCAGG

Remoção de introns pelo

“spliceossomo”:
associação de
ribonucleoproteínas
pequenas (snRNPs)
formando um complexo de
3x103 kDa
Auto-splicing:introns do grupo I
Auto-splicing:
introns do grupo I
Auto-splicing:
introns do grupo II