Anti – A, Anti – B, Anti - AB

-Kelompok Ganjil :
-- Nurul Rachmawati
-Titania Indrianti
- Yuvensca Pocerattu
- Rizka Apriyanti
- Diniar Dwi Astuti
- Panjarini Nabilla Linggawati
- Siska Taufik Amelia
- Gilda Larassati
- Cynthia Juanika
 Ringkasan
 Anti – A, Anti – B, Anti – AB pada tahun 1900. landsteir
menemukan serum beberapa orang akan mengimbangi sel
darah merah orang lain. Empat fenotip umum sekarang
diketahui O, A, B dan AB. Sub kelompok A dan B telah di
identifikasi.
 Prinsip
 Reagen akan mengalami aglutinasi langsung (penggumpalan) sel uji
sel darah merah yang membawa antigen ABO yang sesuai. Tidak
ada aglutinasi yang umumnya mengindikasikan tidak adanya
antigen ABO yang sesuai.
 Reagen
 Plasmotec Monoclonal Ig M ABO reagen pengelompokkan
darah mengandung antibodi monoklonal tikus yang
diencerkan dalam buffer fosfat yang mengandung Natrium
Klorida, EDTA setiap reagen dipasok pada pengenceran
optimal untuk digunakan dengan semua teknik yang
direkomendasikan dibawah ini tanpa perlu pengenceran dan
penambahan lebih lanjut. Untuk nomor refensi banyak dan
tanggal kadaluwarsa lihat Label Vial.
 Penyimpanan
 Jangan dibekukan. Botol reagen harus disimpan pada suhu 2-
8 o C pada tanda terima. Penyimpanan yang berkepanjangan
pada suhu diluar rentang ini dapat menyebabkan
berkurangnya reaktivitas reagen.
 Pengumpulan Sampel dan Persiapan
 Sampel air matang yang dimenangkan atau tanpa antikoagulan
dapat digunakan untuk pengetikan antigen. Jika pengujian
tertunda maka simpan spesimen pada 2-8 o C. Sampel EDTA
dan sitrat harus 48 jam. Sampel yang dikumpulkan ke dalam
atau CPDA-1 dapat diuji sampai 35 harus sejak tanggal
penarikan. Semua sampel darah harus dicuci setidaknya dua
kali dengan PBS sebelum di uji. Sampel darah yang
menunjukkan bukti lisis dapat memberikan hasil yang tidak
dapat diandalkan.
 Tindakan Pencegahan
1. Reagen dimaksudkan untuk penggunaan diagnostik in vitro saja.
2. Jika botol reagen retak atau bocor, buang isinya segera.
3. Gunakan pereaksi ulang tanggal kadaluwarsa.
4. Jangan gunakan reagen jika ada presipitat.
5. Pakaian pelindung harus dipakai saat menangani reagen, seperti sarung tangan sekali
pakai dan mantek kantung pelindung.
6. Reagen telah disaring melalui kapsul 0,2 um untuk mengurangi beban bio, setelah
botol dibuka, isinya harus tetap layak sampai kadaluwarsa selama tidak ada kekeruhan
yang ditandai, yang dapat mengindikasikan kerusakan atau kontaminasi regaen.
7. Reagen mengandung <0,1 % Natrium Azida dapat menjadi racun jika tertelan dan
dapat bereaksi dengan pipa timah dan tembaga untuk membentuk logam peledak
Azida pada pembuangan siram dengan volume besar air.
8. Tidak ada tes yang diketahui dapat mnjamin bahwa produk yang berasal dari sumber
manusia atau hewan bebas dari agen infeksius. Perhatian harus diberikan dalam
penggunaan dan pembuangan setiap botol dan isinya.
 Pembuangan Reagen dan Menangani
Tumpahan
 Untuk informasi tentang pereaksi dan dekomintasi dari situs
tumpahan melihat Lembar Data Keselamatan Material
tersedia berdasarkan permintaan.
 Kontrol dan Saran
1. Dianjurkan kontrol positif dan kontrol negatif diuji secara paralel dengan setiap batch
pengujian. Tes harus dipertimbangkan jika kontrol tidak menunjukkan yang
diharapkan.
2. Saat mengetik sel darah merah dari pasien penting bahwa kontrol negatif reagen
disertakan karena potensiator makromolekul dalam pereaksi dapat menyebabkan
reaksi positif palsu dengan sel dilapisi Ig G.
3. Spesimen darah yang memiliki subkelompok A atau B lemah (misalnya Ax) dapat
memberi naik ke reaksi negatif atau lemah palsu saat diuji menggunakan slide,
mikrotitre plates atau kartu gel. Dianjurkan untuk menguji kembali subkelompok
lemah menggunakan teknik tabung.
4. Individu yang berusia lebih dari enam bulan harus memiliki hasil pengelompokkan
darah ABO mereka yang dikonfirmasi dengan menguji serum atau plasma mereka
terhadap kelompok darah kelompok A1 dan B yang diketahui dapat dikonfirmasi.
5. Dalam teknik yang dianjurkan satu volume kira-kira 40 ul saat menggunakan penetes
botol yang disediakan.
6. Penggunaan reagen dari interpretasi hasilnya harus dilakukan oleh personel yang
terlatih dan berkualitas sesuai dengan persyaratan negara dimana reagennya
digunakan.
7. Pengguna harus menentukan kesatuan reagen untuk digunakan dalam teknik lainnya.
 Reagen dan Bahan yang Dibutuhkan
 Tongkat aplikatir. Pembaca plat otomatis
 Slide kaca mikroskop. Tabung uji kaca (10x15 mm atau 12x75
mm)

 Fosfat Buffer Saline (PBS) : NaCl 0,9%, pH 7,0 at 22 0 C.
Positif (idealnya kelompok A2B) dan negatif (kelompok O)
mengendalikan sel darah merah.
 Uji tabung sentrifuge. Delivalidasi “U” dengan lempeng
mikro yang baik.
 Pipet volume.
 Teknik yang Dianjurkan
A. Teknik Tabung
• Siapkan suspensi 2-3% dari sel uji merah yang dicuci di PBS.
• Tempatkan ditabung uji berlabel : 1. volume pereaksi anti – ABA
Plasmatec dan 1 volume suspensi sel merah uji.
• Campurkan secara menyeluruh dan ikubasi pada suhu kamar
selama 1 menit.
• Sentrifuge semua tabung selama 10 detik pada 1000 rof atau
untuk waktu alternatif dan kekuatan yang sesuai.
• Dengan hati – hati resuspend tombol sel merah dan baca
makroskopis untuk aglutinasi.
• Tabung apapun, yang menunjukkan hasil negatif atau yang patut
dipertanyakan harus di inkubasi selama 15 menit suhu kamar.
• Mengikuti inkubasi, ulangi langkah 4 dan 5.
A. Teknik Microplate, menggunakan sumur “U”
 Siapkan suspensi 2-3% dari tes yang dicuci pada sel darah merah
di PBS.
 Letakkan disumur yang sesuai 1 volume pereaksi Plasmatec Anti
– ABO dan 1 uji volume suspensi sel darah merah.
 Campur sekucupnya, sebaiknya gunakan penggilingan lambung,
hati – hati untuk menghindari kontaminasi silang.
 Inkubasi pada suhu kamar selama 15 menit (tergantung waktu
pada pengguna).
 Sentrifuge lempeng mikro selama 1 menit pada 140 rof atau
untuk waktu alternatif dan kekuatan yang sesuai.
 Pasang kembali tombol sel dengan menggunakan agitasi yang
dikontrol dengan hati – hati pada penggosok lapisan bawah.
 Baca secara makroskopis atau dengan pembaca otomatis yang di
validasi.
 Reaksi lemah apapun harus di ulang dengan teknik tabung.
A. Teknik Geser
 Siapkan suspensi 35-45% sel uji merah dalam serum, plasma
atau PBS.
 Tempatkan pada slide kaca berlabel : 1 volume reagen Plasmatec
Anti – ABO dan 1 volume suspensi sel darah merah.
 Dengan menggunakan tongkat aplikator yang bersih, perumusan
campuran dan sel diatas area sekitar 20x40 mm.
 Perlahan miringkan slide bolak balik selama 30 detik, dengan
sesekali melakukan pencampuran lebih lanjut selama periode 2
menit, pertahankan slide pada suhu kamar.
 Baca makroskopis setelah 2 menit melewati cahaya yang
menyebar dan jangan salahkan fibrin untai sebagai aglutinasi.
 Reaksi lemah apapun harus di ulang dengan teknik tabung.
 Interpretasi Hasil
 Positif : Aglutinasi sel darah merah merupakan hasil tes positif dan
dalam keterbatasan prosedur uji yang diterima, menunjukkan
adanya antigen ABO yang sesuai pada tes sel darah merah.
 Negatif : Tidak ada aglutinasi dari tes sel darah merah merupakan
hasil negatif dan dalam batasan prosedur pengujian yang diterima,
menunjukkan tidak adanya antigen ABO yang sesuai pada tes sel
darah merah.
 Perbedaan : Jika hasil yang diperoleh dengan kelompok terbalik
tidak berkolerasi dengan kelompok maju, diperlukan penyelidikan
lebih lanjut.
 Hasil uji sel yang di aglutinasi menggunakan negatif reagen harus
di kecualikan, karena aglutinasi paling mungkin disebabkan oleh
efek potensialator makromolekul dalam reagen pada sel peka.
 Stabilitas Reaksi
 Baca semua tabung dan lempeng lurus setelah di sentrifuge.
 Tes slide harus di interpretasikan dalam dua menit untuk
memastikan spesifitas dan untuk menghindari kemungkinan
hasil negatif dapat salah diartikan sebagai tes torehan positif.
 Perhatian harus dilakukan dalam interpretasi hasil tes yang
dilakukan pada suhu selain yang di rekomendasikan.
 Pembatasan
 Antigen ABO tidak sepenuhnya berkembang saat lahir dan oleh karena itu reaksi
yang lebih lemah dapat terjadi dengan spesimen kabel atau neonatal.
 Bila menggunakan Plasmatec Monoclonal Anti – A, B, spesimen darah dari
subkelompok A atau B yang lemah (misalnya Ax) dapat menimbulkan reaksi
negatif atau lemah palsu saat diuji menggunakan slide, piring mikrotiter atau
kartu gel, disarankan untuk melakukan uji ulang subkelompok lemah yang
menggunakan teknik tabung.
 Plasmatec Monoclonal Anti – A atau Anti – B Monoclonal terhadap yang lemah
ini A dan B sub – kelompok.
 Darah yang tersimpan dapat memberikan reaksi yang lebih lemah daripada
darah segar.
 Hasil positif palsu atau negatif palsu juga memungkinkan juga akurat karena :
 - Kontaminasi bahan uji
 - penyimpanan yang tidak tepat, konsentrasi sel, waktu inkubasi atau suhu
 - penyimpanan dan teknik yang direkomendasikan
 - sampel kabel yang terkontaminasi dengan Jeli Wharton
 Karakteristik Kinerja yang Spesifik
 Reagen telah dicirikan oleh semua prosedur yang disebutkan dalam teknik yang
dianjurkan.
 Sebelum melepaskan, masing – masing Plasmatec Monoclonal Anti – A, Anti –
B, dan Anti – AB diuji dengan teknik yang dianjurkan terhadap panel antigen –
reaktivitas yang sesuai.
 Spesifitas antibodi monoklonal sumber ditunjukkan dengan menggunakan panel
sel antigen negatif.
 Potensi reagen telah diuji terhadap standar referensi minimum berikut yang
diperoleh dari National Institute of Biological Standards and Controls (NIBSC).
 Plasmatec reagen ABO monoklonal tidak mendeteksi antigen crypt seperti T, Tn
atau Cad.
 Kontrol kualitas reagen dilakukan dengan menggunakan sel darah merah yang
dicuci dua kali dengan PBS sebelum digunakan.
 Reagen sesuai dengan rekomendasi yang tercantum dalam terbitan terbaru
pedoman Layanan Transfusi Darah Inggris.
 Penolakan
 Pengguna bertanggung jawab atas kinerja reagen dengan
metode apapun selain yang disebutkan dalam teknik yang
dianjurkan.
 Setiap penyimpangan dan teknik yang dianjurkan harus
divalidasi sebelum digunakan.
TERIMA KASIH