Danilo O. Soto1, 3
Andreina Cuello3
1,Facultadde Ciencias Agronómicas y Veterinarias-UASD, 2 Instituo Dominicano de Investigaciones Agropecuarias y Forestales
(IDIAF) 3 Laboratorio de Post-entrada Departamento de Sanidad Vegetal-Ministerio de Agricultura (DSV-MA)
Introducción
Objetivos
Métodos
Métodos
Identificar el agente causal asociado a los síntomas
observados en tomates.
a. Colección y preservación de muestras
b.Extracción y conservación de Ácidos nucleicos
(ARN)
c. Reversotranscripción del ARN en ADN (cADN,
ADN complementario)
d.PCR usando iniciadores universales para Viroides
y cinco géneros de virus.
8vo CONGRESO SODIAF 2018
Métodos
Evaluación de la progresión de la enfermedad, con el 20% de las plantas
de cada invernadero
Evaluaciones mensuales
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Métodos
Evaluar posibles poblaciones mixtas (varios
tipos o especies de viroides
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Resultados y Discusión
a. Identificar el agente causal asociado a los síntomas observados en tomates
360 bp
260 bp
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Resultados y Discusión
Muestras analizadas para determinar presencia de viroides usando los
iniciadores PospiF PospiR
Y Vid-1 y Vid-2. Iniciadores universales o semi-universales para la
amplificación de fragmentos de ADN de viroides.
260 pb
PospiF-R 360 pb
Vid-1-2
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Resultados y Discusión
Resultados y Discusión
b. Distribución e Incidencia de la enfermedad
Todas las regiones evaluadas presentaron
presencia del PSTVd
En La Vega (Constanza, Jarabacoa),
Resultados y Discusión
c. Determinar progresión y las formas de transmisión
Se evaluaron invernaderos, los cuales mostraban
diferentes niveles iniciales de infección.
1 1 2 3 4
2 0 0 1.6 12
3 1 _ 80 -
4 0 0.14 2.5 7
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Resultados y Discusión
c. Determinar progresión y las formas de transmisión
De todas las formas de transmisión que fueron probadas, se pudo
confirmar la transmisión mecánica, inoculado directamente sobre las
hojas de las plantas, la transmisión mecánica sin usar buffer de
extracción frotando los dedos en una planta enferma, luego frotando
los dedos sobre una planta sana y también la transmisión por semillas
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Resultados y Discusión
A pesar de la amplificación por PCR del RNA extraído de semillas,
no se pudo obtener amplificación de plantas generadas a partir de
semillas de frutos de plantas enfermas
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Resultados y Discusión
La transmisión mecánica, parece ser la principal vía de dispersión,
dentro de cada unidad productiva analizada
Luego de que aparece la primera planta enferma, a ambos lados
de esta, aparecen entre cinco y seis con síntomas, al siguiente
mes
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Resultados y Discusión
A B C D
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Resultados y Discusión
Los métodos de polinización, mas los trabajos de
deschuponamientos o “deshije” son factores que
contribuyen con la diseminación interna del PSTVd
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Resultados y Discusión
Los niveles mas bajos en términos de diseminación interna
fue observado donde los obreros trabajan en una sola
unidad de producción y hay desinfección de las manos
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Resultados y Discusión
d. Determinar su diversidad genética y posibles poblaciones mixtas
Resultados y Discusión
El resultado de 20 secuencias de ADN amplificado con iniciadores
universales indican que no hay mezclas de poblaciones
Conclusión
El PSTVd es una de las principales limitantes en la producción de tomates a
nivel de invernaderos
Está ampliamente distribuido en las principales zonas de producción
Los efectos de este patógeno, están estrechamente vinculados al manejo
que se les de en cada centro de producción
En ninguna plantación evaluada se presentó infección antes del inicio de la
cosecha
Los niveles de incidencia estuvo entre un 10 a 90% dependiendo del
manejo
Aparentemente ha habido una sola introducción según las secuencias
analizadas
Gracias por su atención