3.

12 Desorpsi Plasma
Pendekatan lain untuk penentuan massa molekul relatif
protein adalah ionisasi radionuklida: 252Cf desorpsi plasma.
Secara rutin, ia menangani molekul hingga massa molekul
relatif 20.000, tetapi telah digunakan untuk memperoleh
spektrum senyawa koordinasi logam kompleks dengan
molekul relative massa ekular lebih dari 30000 dan protein
dengan molekul relative massa hingga 45.000. Ini adalah
teknik lain yang matang menjadi sistem yang tersedia secara
komersial pada 1980-an (Sundqvist dan Macfarlane, 1985;
Macfarlane, Hill, Jacobs and Geno, 1989).
 Ketika radionuklida 252Cf meluruh, menghasilkan dua
produk fisi (misalnya 142Ba18+ dan 106Tc22+), yang bergerak
terpisah dalam arah yang berlawanan. Salah satunya
fragmen fisi nuklir bergerak menuju sampel, yang dilapisi
sangat foil tipis, terbuat dari alumunium atau aluminized
polyester. Masing-masing sangat energik ion melewati foil
dan, pada dampak dengan sampel, menyebabkan
terlokalisasi 'hot spot' (sekitar 10.000 K). Penimbunan tiba-
tiba seperti sejumlah besar energi dalam sampel
menghasilkan penguapan cepat sebelum dekomposisi dapat
terjadi. Alternatif lain, desorpsi mungkin disebabkan oleh
interaksi antara elektron sekunder dan status vibrasi dari
sebuah molekul, menyebabkan ekspansi molekul yang
cepat, yang mendorongnya menjauh dari permukaan.
 Adalah mungkin bagi kelompok yang berasal dari energi dan gugus
energi internal untuk dinyatakan sebagai unit yang diterima sebagai ion
positif, misalnya, beban negatif menjadi terdelokalisasi untuk sisa gugus.
Apakah molekul terprotonasi atau deprotonasi (yaitu, apakah ion positif
atau ion negatif, masing-masing, terbentuk) tergantung pada sifat asam /
basa dari molekul dalam klaster (Macfarlane, Hill, Jacobs and Geno, 1989).
Dalam mode positif-ion, sebagian besar substansi memberikan molekul
Sedikit, jika ada, fragmentasi diamati terprotonasi, [M + zH]2+, di mana z
adalah bilangan bulat kecil dan sering bersatu. Ion diambil dari daerah
ionisasi dan ke analyzer, spektrometer massa waktu- pada penerbangan.
Pembelahan nuklir fragmen yang bergerak ke arah berlawanan dengan
yang menyebabkan ionisasi terdeteksi dan berfungsi sebagai penanda
waktu untuk peristiwa fisi dan karenanya terjadinya ionisasi. Pengukuran
perbedaan waktu antara ionisasi dan deteksi ion mengarah ke penugasan
massal, waktu yang dibutuhkan untuk melintasi tabung penerbangan
menjadi proporsional dengan akar kuadrat dari massa ion (bagian 2.4.6).
 Spektrum massa dikembangkan selama periode menit dengan
memantau ion yang terbentuk dari setiap peristiwa fisi masing-masing.
Seperti laser desorpsi, spektrometer waktu penerbangan digunakan
karena itu tidak memiliki batasan jangkauan massa dan karena
peristiwa ionisasi (di sini, fisi peristiwa) secara alami berdenyut.
Masalah dengan metode ini adalah quenching spektrum oleh
senyawa tidak mudah yang hadir pada foil sebagai pengotor. Ini bisa
berlebihan datang dengan lapisan pertama foil dengan lapisan tipis dari
adsorben yang selektif ke kelas analit yang diberikan.Misalnya,
nitroselulosa, disemprotkan ke atas aluminium tipis atau poliester foil,
selektif mengikat peptida dan protein (Jonsson etal, 1986; Macfarlane,
1988).Ketika sampel mengandung peptida diterapkan pada permukaan
nitrocellulose, hanya peptida yang terikat kuat. Pengotor yang dipegang
dengan lembut hanya dibersihkan dari permukaan. Analit murni pada
foil kemudian dikenai produk fisi nuklir seperti sebelumnya. Dengan
kata lain, permukaan nitrocellulose bertindak sebagai pemurnian dan
perangkat persiapan. Strategi ini telah diadopsi hampir secara universal
untuk desorpsi plasma untuk keandalannya, kesederhanaan dan
sensitivitas analisis selanjutnya.
 Gambar 3.16. Positif-ion
massa desorpsi plasma
spektrum insulin babi
teradsorp ke nitroselulosa.
(Diambil dengan izin dari
Roepstorff (1987).)
 252Cf metode desorpsi plasma (Cotter, 1988; Macfarlane,
1988; Macfarlane, Hill, Jacobs and Geno, 1989; Roepstorff,
1989; Roepstorff, 1992) membutuhkan ukuran sampel dalam
kisaran picomole rendah, tetapi relatif sedikit molekul yang
digunakan selama analisis. Padahal, jumlah yang digunakan
selama itu Akuisisi spektrum praktis tidak terdeteksi sehingga
sampel tersedia untuk studi lebih lanjut. Padahal, jumlah yang
digunakan selama itu Akuisisi spektrum praktis tidak
terdeteksi sehingga sampel tersedia untuk studi lebih lanjut. Ini
dapat dipulihkan dari foil setelahnya atau dapat diturunkan
secara kimia di situ diikuti dengan pencatatan spektrum massa
lebih banyak. Desorpsi plasma sangat berguna untuk produk
alami seperti peptida, asam amino, racun, antibiotik, dan
oligonukleotida. Seperti yang ditunjukkan di gambar 3.16,
insulin protein memberi molekul terprotonasi pada m/z 5778.3,
menyarankan massa molekul relatif 5777.3 (nilai sebenarnya
adalah 5777.6).