Anda di halaman 1dari 26

TERAPI GEN

DAHLIA AMIL
NINI SAHRIANTI
TERAPI GEN
Pendahuluan
Definisi Terapi Gen
Jenis Terapi Gen
Metoda Terapi Gen
Prasyarat Terapi Gen
Contoh Terapi Gen
PENDAHULUAN
 5000 penyakit bawaan
 Kebanyakan bersifat genetik
 Defisiensi produk gen
 << Dapat digantikan dengan produk dari luar
 Insulin
 Defek pada produk ensim tak bisa digantikan
 Tak stabil dan mudah rusak
 Tak bisa dimasukkan dalam bentuk aktif
 Sifat impermeabel membran sel terhadap
molekul besar
 Terapi gen

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
Definisi
Terapi untuk mengobati penyakit
tententu1,2,3,4
 menginsersikan gen yang telah
diperbaiki atau gen tertentu kedalam
genom sel-sel atau jaringan individu
 menggantikan gen yang abnormal
penyebab penyakit tersebut

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3Scott T., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
Prinsip Terapi Gen 2,3,4
 Insersi gen yang normal pada lokasi yang
tidak spesifik di dalam genom
 untuk menggantikan gen yang tidak berfungsi.
 Prinsip umum yang paling sering digunakan
 Gen abnormal dihilangkan dari genom
individu dan digantikan oleh gen yang
normal
 Homologous recombination
 Gen abnormal diperbaiki melalui cara
selective reverse mutation
 Mengubah regulasi (pengaturan) gen tertentu.

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3ScottT., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
Jenis Terapi
Gen 1,2,4
 Terapi gen sel somatik (somatic cell gene
therapy)
 Terapi gen sel germinal (Germ line cell gene
therapy)

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
Jenis Terapi
Gen
 Terapi gen sel somatik (somatic cell gene
therapy)1,2,4
 gene therapy non hereditable
 gen yang normal atau telah dimodifikasi ditransfer ke
dalam sel-sel somatik pasien
 mengobati/mengatasi gejala penyakit pasien
 tidak dapat diturunkan kepada generasi selanjutnya
 gen yang telah diperbaiki ini hanya ada pada sel-sel
somatik saja dan tidak ada pada sel-sel germinal.
 mirip dengan transplantasi sel, jaringan atau organ
 Lebih rumit dan lebih berbahaya

_____________________________________________________________________________________________________________________________________
________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
Jenis Terapi
Gen
 Terapi gen sel germinal (Germ line cell gene therapy)1,2,4
 Gen yang mengalami defek pada sel-sel germinal
 diperbaiki dengan cara menginsersikan dan mengintegrasikan
gen yang normal atau gen yang telah dimodifikasi kedalam
genom sel-sel germinal
 Gen yang telah diinsersikan ini kemudian akan diturunkan ke
generasi berikutnya
 Sangat bermanfaat untuk mengatasi penyakit-penyakit genetik
dan penyakit-penyakit yang bersifat herediter
 masih sulit dilakukan karena alasan tehnis dan etik
 telah mengubah genetik seseorang

_________________________________________________________________________________________________________________________________________
______
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
METODA TERAPI
GEN1,2,3,4
 Transfer gen yang telah dimodifikasi
atau gen normal kedalam sel-sel sasaran
pada pasien
 Menggunakan vektor biologi yaitu virus
 Menggunakan cara non virus
 naked DNA
 oligonucleotides
 lipoplexes dan polyplexes
 hibrid methods
 dendrimers

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3Scott T., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
Transfer Gen menggunakan vektor
biologi1,2,3,4
 Vektor biologi yang digunakan adalah virus
 susunan genetiknya telah diubah sehingga dapat
membawa gen manusia yang normal
 gen yang telah diperbaiki dimasukkan kedalam sel-sel
sasaran pada tubuh manusia dengan cara tertentu dan
kemudian berintegrasi pada genom tertentu
 gen-gen pada virus yang dapat menyebabkan penyakit
harus dihilangkan dan diganti dengan gen-gen yang telah
diperbaiki
 contoh virus A diketahui dapat berreplikasi atau
memperbanyak diri dengan cara menginsersikan gen-gen
nya kedalam genom sel-sel host.
 virus ini mempunyai 2 jenis gene yaitu gen A dan gene B
 Gen A mengkode protein untuk menginsersikan gen-gen nya
kedalam genom sel host (inang)
 Gen B menyebabkan timbulnya penyakit pada host
 gen C adalah gen yang telah diperbaiki
 menggantikan gen B
 gen A tetap dipertahankan untuk menjalankan fungsinya.

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3Scott T., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml

Terapi Gen pada


10
Manusia/AAJ/Histologi
Transfer Gen menggunakan vektor
biologi1,2,3,4
 Vektor biologi yang digunakan adalah
virus
 Adenovirus merupakan virus generasi
pertama yang digunakan dalam terapi gen
dan sangat efektif sebagai vektor pembawa
transgen2,4
 Virus lain
 retrovirus
 adeno-associated viruses
 virus herpes simplex
 virus penyebab HIV
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3Scott T., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml

Monday, November 09, Terapi Gen pada


11
2009 Manusia/AAJ/Histologi
Transfer Gen menggunakan vektor
biologi1,2,3,4
 Retrovirus1,2,3,4
 Materi genetik pada virus ini adalah dalam
bentuk RNA
 Ketika retrovirus menginfeksi sel sasaran (host)
 RNA retrovirus, ensim reverse transcriptase dan
integrase masuk kedalam sel sasaran
 RNA retrovirus akan diubah menjadi DNA
melalui proses reverse transcription menggunakan
ensim reverse transcriptase
 DNA kemudian akan ditransfer kedalam inti sel
sasaran
 berintegrasi pada tempat tertentu di genom sel
sasaran dengan bantuan ensim integrase
 DNA yang telah diperbaiki ini juga akan
terintegrasi pada tempat tertentu di genom sel
sasaran
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3Scott T., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
Transfer Gen menggunakan vektor
biologi1,2,3,4
 Retrovirus1,2,3,4
 Salah satu masalah yang dapat terjadi pada terapi gen
 ensim integrase dapat menginsersikan materi genetik virus pada tempat yang
kurang sesuai
 pada bagian tengah gen-gen endogen pada host
 gen endogen ini tidak dapat berfungsi dikenal sebagai insertional mutagenesis
 pada gen pengatur fungsi gen lainnya
 proses pembelahan sel dapat tidak terkendali dan berubah menjadi sel kanker
 Hal ini sekarang dapat diatasi dengan menggunakan ensim Zinc finger
nucleases5
 Keuntungan menggunakan retrovirus
 transgen yang dimasukkan bisa di transmisikan kesemua sel yang terinfeksi
dan turunannya
 Kerugian
 dapat menyebabkan terjadinya mutasi genetik yang berbahaya selama tahap
pengintegrasian

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3Scott T., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
Transfer Gen menggunakan vektor
biologi1,2,3,4
 Adenovirus1,2,3,4
 Ketika virus adenovirus menginfeksi sebuah sel inang
 molekul DNA virus tersebut akan dimasukkan kedalam sel inang tersebut
 materi genetik adenovirus tidak bersatu dengan materi genetik sel inang
 molekul DNA virus terletak bebas dalam inti sel dan proses transkripsinya
berlangsung secara sendiri
 molekul DNA virus tidak ikut berreplikasi ketika sel mengalami pembelahan
sehingga sel-sel inang hasil pembelahan tidak mengandung DNA virus
 membutuhkan pemasukkan kembali gen-gen yang sudah dimodifikasi ke dalam populasi sel
yang baru
 Sebaliknya keadaan ini akan mencegah terjadinya kanker
 Gendicine
 adenovirus yang telah mengandung gen p53 yang digunakan pada terapi gen untuk
mengobati penyakit kanker pada kepala dan leher
 sudah diizinkan oleh FDA China untuk digunakan pada manusia pada tahun 2003
 FDA Amerika Serikat telah menyetujui advexin, suatu vektor yang serupa dengan
Gendicine untuk digunakan di Amerika serikat pada tahun 2008

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3Scott T., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
Transfer Gen menggunakan vektor adenovirus

(diunduh dari www.acceleratingfuture.com/michael/blog/?p=455)


Transfer Gen menggunakan cara non
virus1,2,3,4
 Keuntungan
 dapat diproduksi dalam jumlah besar
 immunogenisitas pada sel inang yang rendah
 Beberapa metoda non virus yang dapat digunakan
adalah
 Naked DNA
 metoda transfeksi non virus yang sangat sederhana
 penelitian klinik dengan cara menyuntikan naked DNA secara
intramuskular menunjukkan sebagian hasil yang sukses dan
sebagian lagi mengalami kegagalan
 ekspresi gen pada metoda transfeksi ini sangat rendah
dibandingkan dengan cara transfeksi lainnya

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3Scott T., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
Transfer Gen menggunakan cara non
virus1,2,3,4
 Beberapa metoda non virus yang dapat
digunakan adalah
 Oligonukleotida
 Metoda menginaktifkan gen-gen yang terlibat dalam proses
penyakit.
 Menggunakan antisense yang spesifik untuk gen sasasaran
 mengganggu proses transkripsi gen sasaran yang rusak.
 Menggunakan oligonukleotida rantai ganda (double strand
oligonucleotide)
 mengikat faktor-faktor transkripsi yang diperlukan untuk
regulasi promoter gen sasaran

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3Scott T., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
Transfer Gen menggunakan cara non
virus1,2,3,4
 Beberapa metoda non virus yang dapat digunakan
adalah
 Lipoplexes and polyplexes
 Meningkatkan efisiensi transfer dengan cara melindungi DNA
dari kerusakan dan memfasilitasi pemasukkannya kedalam sel
 Menggunakan molekul lipid
 lipoplexes dan polyplexes
 dirancang untuk melindungi DNA dari proses degradasi
selama proses transfeksi
 membungkus plasmid yang mengandung DNA dalam bentuk
seperti micelle atau liposome
 lipoplexes atau polyplexes yang telah mengandung DNA
dikenal sebagai lipoplex.
 lipoplex akan berinteraksi dengan membran sel dan masuk
kedalam secara endositosis
 endosome yang mengandung lipoplex ini kemudian akan lisis
dan transgen yang ada di dalamnya akan dikeluarkan ke
dalam sitoplasma sel untu kemudian akan masuk ke dalam inti
sel
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3Scott T., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
Transfer Gen menggunakan cara non
virus1,2,3,4
 Beberapa metoda non virus yang dapat
digunakan adalah
 Metoda Hibrid (Hybrid method)
 Untuk meningkatkan efisiensi trnasfer transgen
dikembangkan metoda hibrid (campuran) yaitu
kombinasi liposome dengan virus influenza atau HIV
yang diinaktifkan

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3Scott T., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
HAMBATAN DALAM TERAPI
GEN2,4
 Beberapa faktor yang menghambat efektivitas penggunaan terapi
gen
 Masa hidup alami terapi gen yang pendek (Short-lived nature of gene
therapy)
 gen yang dimasukkan kedalam sel-sel target harus dapat berfungsi
 sel-sel yang mengandung gen terapi ini harus dapat hidup lama dan stabil.
 Respons Imunologik
 adanya stimulus tertentu yang merangsang timbulnya respons imunologik
dapat menurunkan efektivitas terapi gen
 adanya respon imunologik ini juga akan menyulitkan pengulangan terapi
gen pada pasien
 Masalah dengan virus yang berfungsi sebagai vektor
 toksisitas, reaksi imunologik dan inflamasi, kontrol gen dan jaringan
sasaran.
 kemungkinan pulihnya kembali kemampuan virus untuk menyebabkan
penyakit pada manusia

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
HAMBATAN DALAM TERAPI
GEN2,4
 Beberapa faktor yang menghambat efektivitas penggunaan terapi
gen
 Kelainan gen multipel
 terapi gen sulit digunakan untuk mengobati penyakit-penyakit yang
disebabkan oleh adanya kombinasi gen-gen yang mengalami kerusakan
 penyakit jantung, tekanan darah tinggi, Alzheimer, artritis dan diabetes.
 Potensi untuk timbulnya tumor
 Bila DNA diintegrasikan pada tempat yang salah di dalam genom,
misalnya pada daerah tumor suppressor gene, hal ini dapat menyebabkan
timbulnya tumor.
 pasien dengan X-linked severe combined immunodeficiency (X-SCID) yang
diterapi dengan sel punca darah (Hematopoietic stem cells yang diinfeksi oleh
retrovirus yang mengandung transgen
 Tiga dari 20 pasien yang diterapi menderita leukemia6

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
2Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
4What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
6Woods NB, Bottero V, Schmidt M, von Kalle C, Verma IM (Apr 2006). "Gene therapy: therapeutic gene causing lymphoma". Nature 440

(7088): 1123
Prasyarat 1

 National Institute of Health (NIH)


 Gen harus di klon dan diketahui
karakteristiknya
 harus tersedia dalam bentuk murni
 Metoda efektif
 Resiko terapi gen
 harus dievaluasi secara berhati-hati
 seminimal mungkin
 Penyakit tidak dapat diobati dengan cara
lainnya
 Harus ada data penelitian pendahuluan

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
Contoh Terapi Gen1
 Terapi gen pada manusia pertama kali dilakukan tahun 1990
 penyakit ”Adenosine deaminase-deficient severe combined
immunodeficiency disease (ADA-SCID)
 SCID
 penyakit autosomal yang jarang terjadi
 penderita tidak mempunyai sistem imun
 beberapa penderita mengalami defisiensi ensim adenosine deaminase
(ADA)
 kadar deoxyadenosine yang terfosforilasi meningkat mencapai tingkat
toksik dan terakumulasi dalam limfosit T
 membunuh sel limfosit.

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
Terapi Gen pada”Adenosine deaminase-deficient
severe combined immunodeficiency disease (ADA-
SCID)


Contoh Terapi Gen 1

 Contoh penggunaan adenovirus dalam terapi gen


 terapi gen yang dipakai untuk mengobati cystic fibrosis
(CF)
 virus adenovirus yang membawa gen CF diinhalasi oleh pasien
 sel-sel paru akan terinfeksi dan mensintesa produk gen CF untuk
mengatasi simptom dan gejala penyakit
 kuatnya reaksi imunologik tubuh menyebabkan terapi gen menjadi
tidak efektif
 Sel-sel yang terinfeksi virus dan mengandung transgen akan
mati dan tidak bisa memperbanyak diri

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503

Monday, November 09, Terapi Gen pada


25
2009 Manusia/AAJ/Histologi
Monday, November 09, Terapi Gen pada
26
2009 Manusia/AAJ/Histologi