MEJORA DE CEPAS
INDUSTRIALES
Microbiología industrial
I.- SELECCIÓN DE CEPAS MICROBIANAS
•El éxito de un bioproceso microbiano comienza con la adecuada selección del
microorganismo a utilizar, para lo cual se busca que:
•1. La cepa a utilizar debe ser genéticamente estable.
•2 Su velocidad de crecimiento debe ser alta.
•3. Sus requerimientos nutricionales deben ser satisfechos con medios de
cultivo de bajo costo.
•4. Fácil de conservar, sin pérdida de sus características particulares.
•6. Debe llevar el proceso fermentativo en poco tiempo.
•7. Debe lograr un alto rendimiento del producto y este debe ser de fácil
extracción (Merchuck, 2006).
•Los microorganismos pueden obtenerse por aislamiento a partir de fuentes
naturales o de una colección de cultivos.
•A nivel industrial, las empresas pueden poseer su propia colección de
organismos, naturales o mejorados genéticamente, que poseen gran valor
comercial.
a.- Colecciones o bancos de cultivos
•La fuente última de todas las cepas es el ambiente natural, como agua, suelo,
plantas y desechos.
•Por ejemplo:
• en suelos tratados con pesticidas se pueden encontrar organismos
adaptados a la degradación de estos productos químicos; y
• en larvas de insectos muertos se encuentran los agentes causantes de la
muerte.
•Elegida la fuente de aislamiento, se escoge la técnica a usar:
•a) aislamiento directo,
•c) Enriquecimiento del cultivo: esta técnica consiste en incrementar en una
población mixta el número de organismos de interés en relación al resto,
mediante el empleo de medios de cultivo selectivos.
II.- CONSERVACIÓN DE CEPAS
•Los objetivos de la conservación de los cultivos son:
•a) preservar la pureza genética del cultivo sin pérdida de sus propiedades
bioquímicas;
•b) lograr que el cultivo pueda ser transportado y manejado con facilidad
•a.- Subcultivo.
•Consiste en la resiembra (repique) periódica de la cepa en un medio de cultivo
fresco. El intervalo de transferencia varía con el microorganismo.
•Una vez desarrollados los cultivos se mantienen a 4 °C por 15 a 60 días.
•Inconvenientes:
•a) incremento de la posibilidad de mutación con cada transferencia, con
pérdida de las características del organismo;
•b) riesgo de contaminación;
•c) alteraciones en el medio de cultivo, durante la estadía en frío, en la cual se
produce una desecación gradual del mismo.
•b.- Congelación.
•Requiere:
•El crecimiento del cultivo hasta la fase estacionaria, cuando las células son
más resistentes a los daños por congelación y descongelación.
•Utilizar una alta densidad celular, por que, parte de las células se lisan.
•La formación de hielo se inicia en el medio extracelular, lo que provoca un
aumento de la concentración de sales debido a la disminución del agua
cuando ésta se transforma en hielo, es decir, se produce un desequilibrio
osmótico.
Entonces las células se deshidratan por osmosis. Este efecto puede minimizarse
con las siguientes acciones:
•Controlando la tasa de enfriamiento mediante el uso de un congelador con
control de la tasa de congelación.
•Utilizando agentes crioconservantes.
•Manteniendo las temperaturas de almacenamiento adecuadas.
•Controlando la tasa de descongelación.
Agentes crioconservantes.
•Los más utilizados son el DMSO y el glicerol.
•Se pueden dividir en dos categorías:
•Crioconservantes intracelulares con bajo peso molecular que hacen
permeables las células; por ejemplo el glicerol o el dimetil sulfóxido a
concentraciones entre 0,5M y 3M son efectivos minimizando el daño celular.
•Crioconservantes extracelulares con pesos moleculares relativamente altos
(mayores o iguales que el de la sacarosa) que no penetran en las células; son
más efectivos protegiendo sistemas biológicos que se congelan a tasas muy
rápidas. Aunque algunos de estos agentes tienen un efecto protector sobre la
membrana celular, parece ser que el mecanismo primario de acción es la
inducción de la vitrificación (formación de cristales extracelular).
•Parece ser que las células se cargan con solutos durante la lenta congelación y
esto, unido a su baja permeabilidad al agua, causa una lísis osmótica durante la
descongelación; por eso, la descongelación lenta en estos tipos de células
permite que haya suficiente tiempo para una correcta rehidratación y la pérdida
progresiva de los solutos acumulados (Miller y Mazur, 1976)
•C.- Mantenimiento bajo capa de aceite
•Consiste en cubrir el cultivo después de su desarrollo en medio sólido, con
una capa de aceite mineral o vaselina estéril.
•Se pueden conservar a temperatura ambiente o refrigerados por varios años.
•En estas condiciones los microorganismos pueden continuar
reproduciéndose, con posibilidades de aparición de mutantes.
•Se conoce que en cada división celular hay una pequeña probabilidad de que
ocurra un cambio genético, en algunas células de una colonia.
•La frecuencia de mutaciones espontáneas varía entre 10-6 a 10-9 mutaciones
por genoma y por generación. Si se considera un valor de 10 -7 se deberán
estudiar unos (>10 7 ) organismos, en la búsqueda de un mutante.
•La selección de variantes naturales, se logra observando las características
morfológicas de las colonias, que se asocian con mayor o menor
productividad, lo que permite detectar los clones deseados.
•Las melaninas, usadas para bronceadores y protectores solares de, se suelen obtener de
modo químico. Se han localizado y aislado los genes de síntesis de melanina en la
bacteria del suelo Streptomyces antibioticus, y se han transferido a otras bacterias más
fáciles de manejar, lográndose en ellas su expresión.
•Se quiere producir adhesivos biológicos por ingeniería genética. Por ejemplo, se aisló el
gen de una proteína adhesiva del mejillón (Mytilus edulis), y se ha logrado expresar en
microorganismos. Se espera que de tener éxito, esta proteína pueda emplearse en
adhesivos para dentistas y médicos.
•Se estudia la obtención de caucho por ingeniería genética, a partir de genes de la planta
productora (Hevea brasiliensis).
•Síntesis del índigo (colorante para la tela denim), hoy se produce a partir de
sustancias químicas peligrosas como anilinas, formaldehido, cianuro, etc., y es
contaminante. Se ha desarrollado bacterias de E. coli manipuladas
genéticamente a las que se ha logrado transferir un conjunto de 15 genes
(naftalenodioxigenasa, ruta del corísmico, etc.), de Pseudomonas y la nueva
cepa es capaz de producir índigo a niveles rentables (Iañez).