PEWARNAAN GRAM

Disusun Oleh
PATTIYAH
13310306
 Pewarnaan gram pertama kali
dikembangkan oleh seorang dokter
berkebangsaan Denmark Christian Gram (
1853-1938 ) pada tahun 1884.
 Pewarnaan gram merupakan pewarnaan
diferensial yang membedakan bakteri
dalam dua kelompok yaitu bakteri gram
positif dan bakteri gram negatif.
 Pewarnaan ini bertujuan untuk
mengidentifikasi bakteri secara umum.
Pewarnaan gram menggunakan 4 reagen yang
berbeda. Keempat reagen tersebut adalah :
1. “Primary Stain“ berupa ungu kristal,
digunakan pertama dan mengecat semua sel
menjadi ungu ( purple-blue )
2. “Mordan”( pemantek ) berupa Iodine,
membentuk Kompleks Ungu Kristal Iodine
yang tidak karat & memperkuat warna dari
pengecatan pada sel sehingga terlihat warna
purple-black.
3. “Decolorizing Agents” berupa Etil alcohol 96%,
yang menyebabkan dua fungsi yaitu sebagai
pelarut lipid dan agen pengdehidrasi.
4. “Counter Stain“ berupa Safranin, reagen
terakhir ini memberika warna merah pada sel
yang sebelumnya tidak berwarna.
 KUMAN GRAM KUMAN GRAM
POSITIF NEGATIF

Dinding sel :
-Lapisan Lebih tebal Lebih tipis
pepdidoglikan
- kadar lipid 1-4% 11-22%

Resistensi terhadap Tidak larut Larut

alkali ( 1% KOH)

Kepekaan terhadap Lebih peka Kurang peka

penisilin

Kepekaan terhadap Tidak peka peka

streptomicin
PROSEDUR PEWARNAAN
1. Bersihkan kaca objek dengan alkohol sehingga bebas
dari lemak.
2. Buka tutup tabung biakan bakteri, bakar leher tabung
di api bunsen. Pijarkan ose lalu didinginkan. Celupkan
ose kedalam biakan bakteri lalu goreskan pada objek
glass. Kemudian pijarkan kembali ose dan bakar
kembali leher tabung.
3. Tetesi preparat dengan ungu kristal, diamkan selama
30 detik. Lalu bilas dengan aquades.
4. Tetesi iodine diamkan selama 30 detik, kemudian cuci
dengan aquades.
5. Bilas preparat dengan alkohol 96% selama 2 detik
hingga zat warna larut. Lalu bilas lagi dengan
aquades.
6. Tetesi pewarna safranin diamkan selama 30 detik.
Bilas dengan aquades.
7. Keringkan preparat.
8. Lihat di bawah mikroskop.
Interpretasi

 Bakteri gram negatif berwarna merah.

 Bakteri gram positif berwarna ungu.
TERIMA KASIH