Disusun oleh kelompok 6 :

- - Izza Ismah (1601020)

- - Jaka Anugrah (1401023)
- - Jumira (1401024)
- - Liza Elvira (1601105)
- - Rizky Putra Hasanah (1401049)
 Pendahuluan

Rokok elektronik (e-rokok) yang pertama diperkenalkan di
Cina pada tahun 2004 sebagai pengganti rokok yang aman. E-
rokok terdiri dari baterai dan koil untuk memanaskan dan aerosol
pada solusi ( 'e-cair') yang terdapat dalam cartridge atau bisa di isi
ulang ('tank') untuk inhalasi. Biasanya, e-cair adalah solusi nikotin
murni dilarutkan dalam propilen glikol, gliserin nabati, dan rasa.
Karena kehadiran konstituen sederhana seperti dan kurangnya
pembakaran dalam proses aerosolisasi, e-rokok dianggap sebagai
alternatif yang lebih aman dari merokok tembakau.
Pada tahun 2016, Food and Drug Administration (FDA)
mengatur persyaratan untuk pembuatan e-cairan di Amerika
Serikat. Ini termasuk standar untuk keakuratan berlabel nikotin,
kualitas bahan dalam e-cair, kelas basa untuk cairan ini, dan
standar minimum untuk kualitas rasa dan warna
 Bahan

 L – nikotin >90% murni
 E-cair 6 konsentrasi
 Air
 Fase gerak : asetonitril-natrium hidrogen carbonat
 Kelebihan

 Metodenya cepat
 Sederhana dalam mengoperasikan
 Murah
 Dan tidak menggunakan bahan kimia yang
berbahaya
 Kondisi kromatografi dan
Pengembangan Metode

Menggunakan seri Agilent 1260 HPLC, yang terdiri dari
pompa kuaterner, degasser vakum, autosampler, dan
kompartemen kolom dengan termostat dan detektor photodiode
array (PDA), dengan akuisisi data dari perangkat lunak
Chemstation. Sebuah kolom Kinetex Evo (teknologi inti-shell) C18
(150 × 4.6 mm, ukuran partikel 5 μ m dan 100 Å) digunakan,
dengan suhu dipertahankan pada 35 ◦ C. Setelah menyelidiki
berbagai kolom dan fase gerak dalam kombinasi yang berbeda,
kami memilih metode isokratik, dengan fase gerak yang terdiri
dari asetonitril (ACN) -Sodium hidrogen karbonat (pH 10,0, 0,03
M) (20:80, v / v), pada tingkat alir 1 mL / menit. Deteksi UV
dicapai pada 259 nm dengan lebar 4 nm. Fase gerak yang disaring
dengan menggunakan 0,45 μm filter dan dilepaskan dengan
sonikasi selama 10 menit sebelum digunakan. Volume injeksi
untuk analisis semua sampel adalah 10 μL.
 Studi stres Nikotin

Menentukan stabilitas nikotin murni dan larutan
nikotin di bawah photolytic, thermolytic, hidrolitik (asam /
basa), dan kondisi stres oksidatif. Studi degradasi paksa
bertujuan untuk menghasilkan 5% sampai 20% degradasi
nikotin. Kemurnian puncak nikotin diuji dengan
menggunakan array dioda foto (PDA) detektor dan software
Chemstation dengan memeriksa ultraviolet (UV) spektrum
di puncak nikotin. Tumpang tindih spektrum UV yang
berbeda di puncak bunga menunjukkan kemurnian puncak,
dan memastikan tidak adanya puncak degradasi dalam
puncak nikotin.
 Lanjutan. . .

Asam dan basa hidrolitik stres bersama stres oksidatif dalam
bentuk larutan dicapai dengan melarutkan nikotin dalam larutan air 0,1 N
HCl, 0,1 N NaOH, dan H202( 0,003%, 0,3%, dan 3% w / v), masing-
masing, untuk mencapai konsentrasi 1 mg / mL. oksigen atmosfer tidak
dikecualikan selama percobaan degradasi, dan semua solusi disimpan
dalam 10 botol kaca mL dengan sejumlah kecil headspace atmosfer.
Sampel disimpan pada 60 ◦ C dalam serangkaian Binder Inkubator BD240.
Penelitian awal menunjukkan degradasi oksidatif terjadi dengan cepat,
sehingga degradasi oksidatif juga dilakukan pada suhu sekitar 25 ◦ C.
Dalam keadaan berminyak murni, nikotin terkena cahaya ambient dan
suhu 60 ◦ C. Sampel ditarik pada interval yang telah ditentukan dan
diencerkan dengan fase gerak untuk mendapatkan konsentrasi 20 μg / mL
sebelum analisis dengan HPLC. Semua sampel, kecuali untuk studi
degradasi photolytic, ditutupi dengan aluminium foil dan disimpan
dalam gelap. Studi dilanjutkan selama 10 hari atau sampai degradasi
signifikan (> 5%) diamati.
 Metode validasi

Validasi metode HPLC yang dikembangkan untuk linearitas,
jangkauan, sensitivitas (batas deteksi (LOD) dan kuantisasi (LOQ)), akurasi,
presisi dan ketahanan sesuai pedoman ICH. Untuk melakukan hal ini, larutan
stok utama dari nikotin (1 mg / mL) dibuat dengan melarutkan nikotin dalam
pelarut fase mobile. Larutan seri stok diencerkan dengan pelarut fase gerak
untuk menghasilkan solusi yang bekerja di kisaran 0,78-50 μ g / mL dengan
lima ulangan. Sensitivitas dari metode HPLC ditentukan dengan menghitung
LOD dan LOQ dengan menyuntikkan konsentrasi serial yang lebih rendah
menunjukkan puncak dengan sinyal untuk rasio kebisingan minimal 3: 1 dan
10: 1, masing-masing. LOD, jumlah terendah analit yang dapat dideteksi
dengan metode analisis, tidak perlu diukur. LOQ adalah jumlah terendah
analit yang dapat diukur dengan metode analisis. Keakuratan suatu metode
analisis adalah kedekatan antara hasil tes dari nilai eksperimental dan aktual.
Keakuratan metode ini dilaporkan sebagai persentase pemulihan dengan alat
tes dibandingkan dengan jumlah tambahan yang diketahui. Ketepatan suatu
metode analisis adalah kedekatan antara beberapa suntikan sampel yang
sama. Hal ini dapat dinyatakan sebagai pengulangan, presisi menengah, dan
reproduktifitas.
 Lanjutan. . .

Akurasi intra-hari dan presisi dihitung dengan analisis dari 3
ulangan dari 5, 10, 20, dan 40 μ g / mL. akurasi antar-hari dan presisi
dihitung dengan analisis konsentrasi yang sama dengan 3 ulangan
lebih dari 3 hari. Instrumental presisi atau injeksi pengulangan
ditentukan dengan menganalisis 10 suntikan dari satu sampel dari
nikotin pada konsentrasi 20 μ g / mL untuk memeriksa persentase
relatif standar deviasi (% RSD). akurasi dihitung dengan
membandingkan konsentrasi eksperimental terhadap sebenarnya
konsentrasi. Ketahanan suatu metode analisis adalah kemampuannya
untuk tetap tidak terpengaruh oleh variasi kecil tapi disengaja dalam
parameter metode. Dalam studi ini, kami menguji kekokohan metode
kami dengan memvariasikan rasio fase gerak oleh studi ini kami
menguji kekokohan metode kami dengan memvariasikan rasio fase
gerak dengan ± 1%, Volume injeksi dari 5 μL hingga 20 μL, suhu
kolom dari 30 ◦ C hingga 40 ◦ C, laju alir dari 0,8 mL / menit hingga
1,2 mL / menit, dan pH buffer 9,5-10,5.
Penerapan metode analisis untuk menganalisis
e-cairan dan menentukan tinggi suhu
stabilitasnya

Menganalisis e-cairan dalam rentang konsentrasi dari
0 mg/mL dalam dua rasa yang berbeda (mint dan
semangka) dengan menggunakan metode HPLC yang
dikembangkan. E-cair diberi label 0 mg/mL dianalisis murni
sedangkan e-cair yang lainnya diencerkan untuk
mendapatkan konsentrasi 30 μg/mL sebelum dianalisis.
Selain itu e-cair disimpan dalam wadah asli pada suhu 60 ◦ C
dalam seri binder inkubator BD240 dan dianalisis setelah 10
hari untuk menentukan stabilitas dan memastikan metode
dapat membedakan puncak degradasi dari puncak analit.
Kemurnian puncak nikotin dihitung menggunakan
perangkat lunak chemstation untuk memastikan tidak
adanya puncak degradasi.
Hasil

 Pengembangan metode

pH bufer, persentase fasa organik dalam buffer,
dan suhu kolom dioptimalkan untuk mencapai
pemisahan kromatografi dan kuantifikasi nikotin
 Gambar 1
Kromatogram standar nikotin dalam kondisi stress yang di pilih,
mulai dari konsentrasi 20 μg/mL dalam semua kasus. Puncak
nikoin terlihat eluting setelah 4,8 menit dalam semua kondisi


 
Pemisahan puncak optimal dicapai dengan menggunakan
Kinetex Evo C18 (150 × 4,6 mm, partikel) ukuran 5 µm dan 100 Å)
kolom. Setelah menguji berbagai kombinasi buffer dan pelarut
organik, fase gerak yang terdiri dari asetonitril-natrium hidrogen
karbonat (NaHCO3) (pH 10,0, 30 mM) (20:80, v / v) dengan laju
alir 1 mL / menit digunakan. Suhu kolom dioptimalkan pada 35
◦C untuk mencapai kemurnian yang diperlukan dari puncak
nikotin. Setelah injeksi 10 µL, puncak nikotin terelusi setelah 4,8
menit (Gambar 2a) dan dideteksi oleh detektor PDA pada 259 nm.
Puncak kemurnian itu ditentukan dengan pengujian antara 200
dan 400 nm, dan indeks kemurnian berada dalam batas ambang
(999.499) seperti yang ditunjukkan oleh rasio kemurnian (999.741)
di pita hijau dan tumpang tindih berbeda spektra puncak,
menunjukkan tingkat kemiripan yang tinggi (Gambar 2b)
 Gambar 2
a. Kromatogram nikotin (20 μg/mL)
b. Profil kemurnian puncak (garis merah) dari nikotin menunjukkan nilai
kemurnian dalam batas ambang. Sisipan menunjukkan tumpang tindih
spektrum yang berbeda


 Studi stress nikotin


 Table 1
Studi stress nikotin menunjukkan % nikotin yang tersisa
setelah terkena berbagai kondisi tertekan.
 Metode validasi

Kurva standar nikotin menunjukkan linearitas dalam
kisaran 0,78 - 50 μg/mL (gambar 3) dengan persamaan
linear
Y = 9.1092x + 0.4476
Sebagaimana yang di peroleh dari analisis regresi
linear. Koefesien korelasi (R2) adalah 10000.
 Gambar 3
menunjukkan kurva kalibrasi HPLC standar nikotin yang menunjukkan
linearitas pada rentang konsentrasi 0,78 – 50 μg/mL (n = 5, poin data
menunjukkan nilai rata – rata dan bar kesalahan merupakan standar deviasi)


 
Nilai LOD dan LOQ masing-masing adalah 0,07
µg / mL dan 0,3 µg / mL. Akurasi dan hasil presisi
telah dirangkum dalam Tabel 2. Intra-day akurasi
adalah antara 99,3% dan 100,7% dengan% RSD kurang
dari 0,9%. Akurasi Inter-hari adalah antara 100,3% dan
100,6% dengan % RSD kurang dari 1,1%.
 Table 2
Keakuratan dan akurasi data dari metode HPLC yang diperoleh dari
studi intra dan inter day. Konsetrasi ditunjukkan dalam μg/mL. RSD
= standar deviasi relatif.


 
Metode HPLC yang dikembangkan ditemukan
kuat, sebagaimana dibuktikan oleh data akurasi (Tabel
3) dan nilai% RSD kurang dari 0,5%, menunjukkan
presisi tinggi dengan variasi fase gerak, pH buffer, laju
alir, volume injeksi, dan suhu kolom.
 Table 3
Keakuratan ditentukan oleh pengaruh perubahan parameter
kromatografi pada fase terbalik (RP) – HPLC metode nikotin


Penerapan metode analitik untuk menganalisis
kandungan Nikotin dalam E-cairan dan
menentukan stabilitas pada suhu tinggi

Metode HPLC mampu memisahkan nikotin dari
bahan lain yang ada dalam e-liquid. E-liquid dengan rasa
semangka menunjukkan puncak negatif yang besar diikuti
oleh puncak kecil lainnya, yang bisa disebabkan oleh agen
penyedap memiliki absorbansi UV lebih rendah
dibandingkan dengan fase gerak (Gambar 4). Puncak nikotin
murni untuk standar dan tekanan panas e-liquid,
menunjukkan tidak ada produk degradasi atau agen
penyedap yang tersembunyi di bawah puncak nikotin.
Menariknya, puncak negatif yang dikaitkan dengan agen
penyedap berubah setelah 10 hari penyimpanan di 60 ◦C
menunjukkan degradasi.
 Gambar 4
Kromatogram E – cair dalam kondisi standar dan tekanan panas (30
μg/mL). Puncak nikotin terlihat eluting setelah 5 menit dalam semua
kondisi.


 
Semua e-cairan yang diuji mengandung nikotin,
seperti yang diiklankan, dengan pengecualian dari e-liquid
berlabel 0 mg / mL nikotin, yang tidak menunjukkan
puncak nikotin apa pun. Untuk semua sampel lainnya,
jumlah nikotin hadir (mg / mL) lebih tinggi dari konten
berlabel (Tabel 4). Variabilitas dalam kandungan nikotin
dalam e-cairan diamati di antara rasa yang berbeda, dengan
kandungan nikotin mulai dari 112,0% ± 1,52% hingga 117,9%
± 1,87% dari nilai berlabel (Tabel 4). Sedangkan sebagian
besar sampel e-liquid adalah stabil selama 10 hari pada 60
◦C, nikotin 3 mg / mL dalam rasa mint terdegradasi hingga
91,3 ± 1,11% tersisa.
 Table 4
Analisis konsetrasi nikotin standar dan e – cairan tertekan
secara termal


 kesimpulan

Jurnal ini mengembangkan dan memvalidasi metode
HPLC yang mengindikasikan stabilitas untuk kuantifikasi
nikotin. Metode sederhana dan cepat dapat digunakan
untuk analisis rutin nikotin dan cocok untuk digunakan
diadopsi di laboratorium yang berbeda. Ini adalah
kekhawatiran bahwa dalam semua e-liquid yang diuji,
jumlah sebenarnya dari nikotin lebih tinggi dari jumlah
berlabel. Metode yang menunjukkan stabilitas memiliki
potensi yang baik untuk digunakan sebagai alat analisis
untuk menentukan kandungan dan stabilitas aktual dari
berbagai diatur dan produk nikotin yang tidak diatur
tersedia di pasar.
See you next time 