IMPEDANCE &

FLOWCYTOMETRY
KELOMPOK 5

FRANS APANDI
JESSY FRANSISKA
SURYANI
LIA PUSVITA
SITI ELSA TRIHARDISA
IMPEDANCE & FLOWCYTOMETRY
 Nama asli aliran teknologi
berbasis fluoresensi cytometry
adalah "cytophotometry pulsa"
(Jerman: Impulszytophotometrie),
berdasarkan aplikasi paten
pertama pada aliran berbasis
fluoresensi cytometry. Di Amerika
Teknik Yayasan Konferensi ke-5
pada Automated Sitologi di
Pensacola (Florida) pada tahun
1976 - delapan tahun setelah
pengenalan aliran cytometer
berbasis fluoresensi pertama
(1968) - disepakati untuk umum
menggunakan nama "cytometry
aliran", sebuah istilah yang
dengan cepat menjadi populer.
 SEJARAH
 Aliran berbasis impedansi pertama perangkat cytometry, menggunakan
prinsip Coulter , diungkapkan dalam US Patent 2656508 , yang
dikeluarkan pada tahun 1953 , Wallace H. Coulter . Mack Fulwyler adalah
penemu cikal bakal aliran cytometers ini -,,,Khususnya penyortir sel [ 1 ]
Fulwyler mengembangkan ini pada tahun 1965 dengan publikasi di
bidang Ilmu [ 2 ] Aliran pertama perangkat berbasis fluoresensi cytometry
( ICP 11 ) dikembangkan di 1968 oleh Wolfgang Göhde dari Universitas
Münster , mengajukan paten pada 18 Desember 1968 [ 3 ] dan pertama
kali dikomersialisasikan pada 1968-1969 oleh pengembang Jerman dan
produsen Partec melalui Phywe AG di Göttingen . . Pada saat itu , metode
penyerapan masih banyak disukai oleh para ilmuwan lain atas metode
fluoresensi [ 4 ] Segera setelah itu, aliran cytometry instrumen
dikembangkan , termasuk Cytofluorograph ( 1971) dari Bio / Fisika
Systems Inc (kemudian : Ortho Diagnostics ) , yang PAS 8000 (1973) dari
Partec , para FACS pertama ( pemilahan sel fluoresensi - diaktifkan )
instrumen dari Becton Dickinson ( 1974), ICP 22 ( 1975) dari Partec /
Phywe dan epos dari Coulter ( 1977-1978 ) .
 Cytometers aliran modern mampu menganalisis
beberapa ribu partikel setiap detik, dalam "real
time," dan secara aktif dapat memisahkan dan
mengisolasi partikel yang memiliki sifat-sifat
tertentu. Sebuah cytometer aliran mirip dengan
mikroskop, bukan hanya menghasilkan gambar sel,
flow cytometry menawarkan "high-throughput"
(untuk sejumlah besar sel) kuantifikasi otomatis
parameter set. Untuk menganalisis jaringan yang
solid.
Sebuah aliran cytometer memiliki lima
komponen utama:
 sel aliran - aliran cairan (cairan selubung), yang membawa dan meluruskan sel
sehingga berkas tunggal melalui berkas cahaya.

 sistem pengukuran - sering digunakan adalah pengukuran impedansi (atau

konduktivitas) dan sistem optik - lampu (merkuri, xenon); tinggi daya laser
berpendingin air (argon, kripton, pewarna laser); rendah daya laser berpendingin
udara ( argon (488 nm), merah-HeNe (633 nm), hijau-HeNe, HECD (UV)); laser
dioda (biru, hijau, merah, ungu) menghasilkan sinyal cahaya

 detektor dan Analog-to-Digital Converter (ADC) sistem - yang menghasilkan

FSC dan SSC serta sinyal fluoresensi dari cahaya menjadi sinyal listrik yang dapat
diproses oleh komputer
 sistem amplifikasi - linear atau logaritmik

 komputer untuk analisis sinyal.

 AKUISISI
 Proses pengumpulan data dari sampel menggunakan aliran
cytometer disebut ' akuisisi ' . Akuisisi dimediasi oleh komputer
secara fisik terhubung ke aliran cytometer , dan perangkat lunak
yang menangani antarmuka digital dengan cytometer tersebut .
Perangkat lunak ini mampu menyesuaikan parameter ( yaitu
tegangan , kompensasi , dll) untuk sampel yang diuji , dan juga
membantu dalam menampilkan informasi sampel awal sementara
memperoleh data sampel untuk memastikan bahwa parameter
diatur dengan benar . Cytometers aliran awal adalah , pada
umumnya , peralatan eksperimen , tetapi kemajuan teknologi telah
memungkinkan aplikasi luas untuk digunakan dalam berbagai
keperluan baik klinis dan penelitian . Karena perkembangan ini ,
pasar yang cukup besar untuk instrumentasi , analisis perangkat
lunak , serta reagen yang digunakan dalam akuisisi seperti antibodi
sebagai fluorescently berlabel telah dikembangkan
 Instrumen modern biasanya memiliki beberapa
laser dan detektor fluoresensi . Rekor saat ini untuk
instrumen komersial adalah sepuluh laser [ 6 ] dan
18 detektor fluoresensi . Peningkatan jumlah laser
dan detektor memungkinkan untuk pelabelan
antibodi ganda , dan lebih tepat dapat
mengidentifikasi populasi target dengan spidol
fenotipik mereka. Instrumen tertentu bahkan dapat
mengambil gambar digital dari sel individu, yang
memungkinkan untuk analisis lokasi sinyal neon
dalam atau pada permukaan sel .
 Data yang dihasilkan oleh
aliran-cytometers dapat diplot
dalam dimensi tunggal, untuk
menghasilkan histogram, atau
dalam dua dimensi dot plot atau
bahkan dalam tiga dimensi.
Daerah di plot ini dapat
dipisahkan secara berurutan,
berdasarkan intensitas
fluoresensi, dengan menciptakan
serangkaian ekstraksi bagian,
disebut "gerbang." Protokol
gating spesifik ada untuk tujuan
diagnostik dan klinis terutama
dalam kaitannya dengan
hematologi.
 Analisis komputerisasi
 Kemajuan terbaru pada identifikasi populasi otomatis
menggunakan metode komputasi telah menawarkan
alternatif strategi gating tradisional. Sistem identifikasi
otomatis berpotensi membantu temuan populasi langka dan
tersembunyi. Metode otomatis Perwakilan termasuk Flock
[14] di Imunologi database dan Analisis Portal (ImmPort),
[15] FLAME [16] di GenePattern dan flowClust, [17] [18]
[19] di Bioconductor. Upaya kolaboratif telah menghasilkan
sebuah proyek open disebut FlowCAP (Arus cytometry:
Penilaian Kritis Penduduk Identifikasi Metode, [20]) untuk
menyediakan cara yang obyektif untuk membandingkan
dan mengevaluasi aliran cytometry metode pengelompokan
data, dan juga untuk membangun bimbingan tentang
penggunaan yang tepat dan penerapan metode ini.
Fluorescence-activated cell sorting
(FACS)
 Fluoresensi-diaktifkan sel menyortir ( FACS ) adalah jenis khusus dari
aliran cytometry . Ini menyediakan metode untuk menyortir campuran
heterogen sel biologis menjadi dua atau lebih kontainer , satu sel pada
suatu waktu , berdasarkan hamburan cahaya dan neon karakteristik khusus
dari setiap sel . Ini adalah instrumen ilmiah yang berguna , karena
menyediakan cepat , objektif dan kuantitatif rekaman sinyal neon dari sel-
sel individual serta pemisahan fisik sel kepentingan tertentu . Akronim FACS
adalah merek dagang dan dimiliki oleh Becton , Dickinson dan Perusahaan
. [ 21 ] Di antara sebagian besar peneliti yang menggunakan teknologi ini
untuk menyortir atau analisis , istilah ini telah menjadi generik dalam
penggunaan umum , seperti xerox atau tisu . penyortir sel pertama
ditemukan oleh Mack Fulwyler pada tahun 1965 , menggunakan prinsip
Coulter , teknik yang relatif sulit yang tidak lagi digunakan dalam
instrumen modern. Teknik ini dikembangkan oleh Len Herzenberg , yang
bertanggung jawab untuk coining istilah FACS . [ 22 ] Herzenberg
memenangkan Hadiah Kyoto pada tahun 2006 untuk bekerja dalam aliran
cytometry .
 PARAMETER TERUKUR
 • digunakan untuk diagnosis konfirmasi  • antigen nuklir
leukemia limfositik kronis • aktivitas enzimatik
• volume dan kompleksitas morfologi sel • pH , kalsium terionisasi intraseluler ,
• pigmen sel seperti klorofil atau magnesium , potensial membran
phycoerythrin • fluiditas membran
• kandungan DNA Total ( analisis siklus sel • apoptosis ( kuantifikasi , pengukuran
, kinetika sel, proliferasi , ploidi , degradasi DNA , potensial membran
aneuploidi , endoreduplication , dll ) mitokondria , perubahan permeabilitas ,
• konten RNA Total aktivitas caspase )
• variasi jumlah salinan DNA ( by Flow- • viabilitas sel
FISH atau BAC -on - Beads teknologi ) • pemantauan electropermeabilization
• analisis kromosom dan pemilahan ( sel
konstruksi pustaka , cat kromosom ) • ledakan oksidatif
• ekspresi protein dan lokalisasi • karakteristik resistensi multidrug ( MDR )
• Protein modifikasi , phospho - protein pada sel kanker
• produk transgenik in vivo , khususnya • glutathione
protein fluorescent hijau atau terkait • berbagai kombinasi ( antigen DNA /
Fluorescent Protein permukaan , dll )
• antigen permukaan sel ( Cluster • kepatuhan sel ( misalnya kepatuhan sel
diferensiasi ( CD ) spidol ) patogen - host)
• antigen intraseluler ( berbagai sitokin ,
mediator sekunder , dll )
 APLIKASI
 Teknologi ini memiliki aplikasi dalam sejumlah bidang,
termasuk biologi molekuler, patologi, imunologi, biologi
tanaman dan biologi kelautan. Ini memiliki aplikasi yang
luas dalam kedokteran (khususnya dalam transplantasi,
hematologi, imunologi tumor dan kemoterapi, diagnosis
prenatal, genetika dan sperma menyortir pemilihan
pendahuluan untuk seks). Dalam biologi kelautan, sifat
autofluorescent plankton fotosintetik dapat dimanfaatkan
dengan sitometri untuk mengkarakterisasi kelimpahan dan
struktur komunitas. Dalam rekayasa protein, flow cytometry
digunakan dalam hubungannya dengan layar ragi dan
bakteri display untuk mengidentifikasi varian protein
permukaan sel-ditampilkan dengan sifat yang diinginkan.
 TERIMA KASIH