Anda di halaman 1dari 11

KELOMPOK 5

DOSEN :
1. Dra.IRYANI,M.Si
2. FAIZAH QURRATA
ANGGOTA :
AINI,S.Pd,M.Pd
1. AHDIATUNNURI
2. DINDA SAHARA
ASISTEN DOSEN:
3. ELFANNY DELVIA
1. ARIZKA TAMARANI
2. NURUL FADHILLAH
AGDISTI
Pengendapan
enzim
ekstraseluler
mikroba
menggunakan
ammonium sulfat
Tujuan Percobaan
1. Mahasiswa dapat mengendapkan enzim
ekstraseluler mikroba menggunakan ammonium
sulfat
2. Mahasiswa dapat menggunakan tabel ‘persen
kejenuhan ammonium sulfat’
3. Mahasiswa dapat menggunakan mikrosentrifuga
dengan benar
4. Mahasiswa dapat menggunakan mikropipet
dengan benar
Dasar teori

Persen
kejenuhan
Enzim ammonium
Pemurnian
parsial enzim
Mikropipet

Ektraseluler
Salting out

Salting in

Intraseluler
Alat dan Bahan
Alat : Bahan :
1) Pipet mikro ukuran 100-1000 1) Reagen bieuret
µL 1 buah 2) Buffer phospat pH 6,5 0,1 M
2) Tabung mikro ukuran 2000 3) Larutan albumin 1%
µL 8 buah 4) Bongkahan es
3) Tip biru 5 buah 5) Kultur cair mikroba (telah
4) Mikrosentrifuga ditumbuhkan pada media
5) Gelas kimia cair sehari sebelumnya)
6) Magnetic stirrer
7) Batang pengaduk
Prosedur kerja
Tabung mikro

– (+) 4 mL kultur cair dengaSn pipet mikro


Sentrifuga

– pada 12.000 rpm,20 menit,suhu 5°c


menimbang

– (NH4)2SO4, dihaluskan
– letak supernatan dlm gelas kimia
– (+) (NH4)2SO4 sedikit demi sedikit kedalam 4 mL supernatan suhu 4 °c
sambil diaduk
Larutan didiamkan

– selama 1 jam sambil tetap diaduk


Tabung mikro

– (+) lar. masing masing 2mL dgn pipet mikro


Sentrifuga
– Pada 12.000 rpm,20 menit,suhu 5°c
– Memisahkan endapan dari supernatant

Endapan
– ditambahkan buffer phospat 300 µL

Simpan
– fraksi ammonium sulfat 0-80% jenuh suhu -10°c
Uji protein pada endapan dan supernatant
Tabung mikro 1 2 3

Lar. Albumin - - 100


µL
Protein dlm buffer 100 µL - -
phospat
Supernatant - 100 µL -

Reagen bieuret 1 tetes 1 1


tetes tetes

Amati warna
Hasil Pengamatan
 Endapan A.xylinum : warna
hijau
 Supernatan A.xylinum : warna biru
 Albumin + reagen bieuret : warna
ungu
 Supernatan S.cerevisiae : warna
hijau
 Endapan S.Cerevisiae : warna
biru
Pengertian
enzim Pembahasan
Hasil uji
 Endapan A.xylinum :
Enzim yang Endapan warna hijau
digunakan

 Supernatan
Fungsi A.xylinum : warna biru
sentrifuga
 Albumin + reagen
Konsentrasi bieuret : warna ungu
Supernatan tinggi
 Supernatan
 Endapan S.cerevisiae :warna
Pengaruh hijau
Konsentrasi S.Cerevisiae
penambahan
rendah : warna biru
ammonium sulfat
Kesimpulan
Dari percobaan dapat disimpulkan bahwa:
 Cara yang digunakan untuk menggendapkan suatu protein adalah
dengan penambahan suatu garam. Ion garam dapat mempengaruhi
kelarutan protein.
 Penambahan garam terus-menerus dapat mengendapkan suatu protein
karena kemampuan ion garam untuk menghidrasi, sehingga terjadi
kompetisi antara garam dan molekul protein untuk mengikat air, air yang
tersedia untuk molekul protein akan berkurang kemudian protein akan
mengendap atau yang biasa disebut dengan salting-out.
Lampiran

Endapan A.X : Supernatan Albumin +


reagen bieuret Endapan S.C :
Hijau A.X : Biru Supernatan
: ungu Biru
S.C : Hijau