HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)

KROMATOGRAFI CAIRKINERJA TINGGI

KROMATOGRAFI
 DEFINISI
Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran
didasarkan atas perbedaan distribusi dari
komponen-komponen campuran tersebut diantara
dua fase, yaitu fase diam (padat atau cair) dan
fase.
 Kromatografi

Padat Pertukaran Ion Fasa Diam Gel

Gas Cair Cair Fasa Gerak Cair

Anion Kation GPC

Plat Kolom
JENIS-JENIS KROMATOGRAFI
 Berdasarkan fase gerak yang digunakan,
kromatografi dibedakan menjadi dua golongan
besar yaitu gas chromatography dan liquid
chromatography. Masing-masing golongan dapat
dibagi lagi seperti yang telah disebutkan pada
definisi di atas.
 SKEMA HPLC

Injektor

Kolom analitik
C18 D

Ke penampungan

POMPA

Integrator
INSTRUMEN HPLC
Kromatografi Kolom Terbuka

Sistem pemasukan sampel: manual, tidak volumetrik 

Color Injector
Waktu analisis lama, mengandalkan gaya grafitasi dan
kapiler  pompa
Hasil pemisahan kurang baik  pengemasan kolom
Kesulitan Pengamatan hasil pemisahan untuk analit
tidak berwarna  Detektor
Kesulitan penghitungan kadar  integrator
KCKT dikembangkan dari kromatografi kolom terbuka untuk menjawab
kekurang-kekurangan tersebut

Injector: Sistem pemasukan sampel: sample loop dan robotik injektor,

sangat volumetrik
Pompa: Waktu analisis singkat, pengulangan/presisi baik
Kolom: baja, packing kompak, partikel sangat kecil, tekanan dapat dibuat
besar  Hasil pemisahan baik
Detektor: semua zat dapat diamati (tidak harus berwarna)
Integrator:dilengkapi komputer, bisa menghitung AuC  mudah
penghitungan kadar 

Sehingga disebut: Kinerja Tinggi

WADAH FASE GERAK

Merupakan tandon berisi fase gerak

Mempunyai sistem penyaring
POMPA
Merupakan sistem agar fase gerak mengalir.
Kinerja pompa yang diinginkan :
 Tekanan yang dihasilkan tinggi

 Fluktuasi tekanan rendah

 Kecepatan aliran fase gerak tepat
 INJEKTOR: Alat untuk pemasukan sampel ke dalam sistem
KCKT

Pump Pump

Column

Column

[INJECT] [LOAD]
OVEN KOLOM – instrumen pemanas
Syarat :
1. Keseragaman temperatur yang baik
2. Kestabilan temperatur yang baik
3. Ketepatan kontrol temperatur yang baik
Kolom pada KCKT

> Penampang: baja tahan karat, tahan tekanan tinggi

 Ukuran partikel sangat kecil: pengepakan lebih kompak, hasil
pemisahan lebih baik
 Dapat dipakai berulang
DETEKTOR HPLC

Yang umum dipakai

 Detektor Ultraviolet / Visible (UV/VIS)
 Detektor Photodiode Array (PDA)
 Detektor Fluorescence (RF)
 Detektor Konduktivitas (CDD)
 Detektor Refraktive Indeks (RID)
 Detektor Elektrokimia (ECD)
 Detektor spektrometer massa
HASIL ANALISIS DENGAN MENGGUNAKAN HPLC
KEUNTUNGAN HPLC
 Cepat
 Resolusi

 Sensitivitas detektor

 Kolom dapat digunakan kembali

 Ideal untuk zat bermolekul besar dan

berionik