BIOLOGÍA E INMUNOLOGÍA CELULAR

Objetivos
• Aplicar técnicas de Inmunología Celular
para el estudio de la respuesta inmune de
pacientes con enfermedades infecciosas.
 BIOLOGÍA E INMUNOLOGÍA CELULAR

¿ Que es Inmunidad ?
La inmunidad es un sistema de defensa muy sofisticado, conocido como sistema inmunitario, cuya función es impedir que
un agente patógeno ( Virus, bacteria, parásito, etc.) se propague en el organismo.
Es el estado de tener suficientes defensas biológicas para evitar la infección, enfermedad u otra invasión biológica no deseada.
En el medio ambiente existen microorganismos que para prosperar, necesitan introducirse en nuestro cuerpo. Estos
microorganismos (virus, bacterias, protozoos, hongos) o moléculas producidas por ellos pueden causar potencialmente
alteraciones en los organismos que invaden, por lo que se denominan patógenos. Estas invasiones se denominan infecciones,
que en algunos casos pueden llegar a producir enfermedades infecciosas.
El sistema inmunitario reconoce todo tipo de sustancias extrañas al organismo, que se denominan antígenos, y desarrolla frente
a ellos una respuesta inmunitaria para defenderse de las posibles consecuencias que el antígeno pueda provocar en el.
Basa su principio de acción en distinguir aquello que no es
reconocido como propio
• Capacidad de aprendizaje y memoria
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Tipos de respuesta Inmune
El sistema inmune, cuando detecta la presencia de un antígeno, reacciona desencadenando la respuesta
inmune. Ésta puede ser de dos tipos fundamentalmente:
- Inespecífica o innata: actúa de manera similar para cualquier agente externo y no requiere
sensibilización previa.
- Específica o adquirida: se desarrolla sólo frente a la sustancia extraña que indujo su iniciación y en
ella participan prioritariamente los linfocitos y las sustancias liberadas por los mismos, anticuerpos y
citocinas
INMUNIDAD
 Características generales de la Respuesta Inmunitaria Innata y la
Adquirida
Inmunidad Innata
(Inespecífica)
Características Resistencia que no mejora por
sucesivos contactos con el agente
infeccioso.
Actúa con carácter general contra
agentes patógenos.
Células Implicadas Polimorfonucleares,
macrófagos, células NK
Inmunidad Adaptativa
(Específica)
Resistencia que mejora
notablemente tras una infección
repetida.
Memoria inmunológica.
Acción muy específica contra
agentes patógenos.
Linfocitos Th (Th0, Th1, Th2)
Linfocitos Tc
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Cuáles son las Células implicadas en la Respuesta Innata?
Células de estirpe mieloide Células de estirpe linfoide
A) Granulocitos

Eosinófilo Neutrófilo Basófilo

Células NK
B) Monocitos/ Macrófagos

Monocito Macrófago
INMUNIDAD CELULAR

• Qué es la inmunidad celular?

• Es una forma de respuesta inmunitaria adaptativa mediada por linfocitos T. Actúa como
mecanismo de ataque en contra de los microorganismos intracelulares, como virus y algunas
bacterias, capaces de sobrevivir y proliferar en el interior de los fagocitos y otras células del
huésped, lugar al que no tienen acceso los anticuerpos circulantes. La defensa frente a este
tipo de infecciones depende de la inmunidad celular, que induce la destrucción del
microorganismo residentes en los fagocitos o de las células infectadas.

• ¿ Cuáles son las Células implicadas?

• Las células T que tienen distintas funciones.

Células T Colaboradoras tipo 1 o TH1 y
Células T Colaboradoras tipo 2 o TH2

• El primer grupo de células interactúa con los fagocitos mononucleares y les

ayuda a destruir los patógenos intracelulares.

• El segundo grupo Interactúa con las células B y les ayuda a dividir ,

diferenciar y fabricar anticuerpos.
TECNICAS INMUNOLÓGICAS

• Obtención de las PBMC

• Recuento y observación de la viabilidad de
las PBMC
• Cultivo de células
• Estimulación de las PBMC con antígenos y
mitógenos
• Proliferación celular
PBMC - Células mononucleares de sangre periférica
• Es cualquier célula sanguínea que tiene un núcleo redondo

• Importantes para el sistema inmunológico para combatir las infecciones

• La población de linfocitos se compone de células T, Células B y NK

• Estas células se pueden extraer a partir de sangre entera usando Ficoll , un

polisacárido hidrófilo que separará la sangre en una capa superior de plasma,
seguido por una capa de PBMC

• Una fracción inferior de células polimorfonucleares (tales como neutrófilos y

eosinófilos) y los eritrocitos.

¿Cómo se podría separar las células polimorfonucleares?

 Diluir 1:5 con
Centrifugar a 2200
RPMI-P/S rpm x 30 min

RPMI
Ajustar Centrifugar
concentración a PBMC anillo
2 lavados Recuperar
2 mill. Células/ml PBMC Ficoll
 CRIOCONSERVACIÓN
• La criopreservación tiene como objetivo el mantenimiento de la viabilidad y funcionabilidad celular a
temperaturas bajas.
• La estructura y composición de las membranas plasmáticas determinan los principales eventos
celulares que tienen lugar durante los procesos de criopreservación.
• Su comportamiento durante la congelación y descongelación definirá los índices de supervivencia de la
célula congelada.
• Los periodos críticos para la sobrevida celular durante la criopreservación son la fase inicial del
congelamiento y el periodo de retorno a condiciones fisiológicas.
• Los lípidos (colesterol y ácidos grasos) como componentes más abundantes de la membrana
plasmática, determinan la fluidez y resistencia de la membrana durante los procesos de
criopreservación.
CRIOCONSERVACIÓN
 Crioprotectores penetrantes
• Son de bajo peso molecular y permeables a través de la membrana celular. Son utilizados: el glicerol, el
dimetilsulfoxido (DMSO) y propanediol (PROH).
• El dimetil sulfóxido se ha usado como un crioprotector. Su acción crioprotectora se atribuye
inicialmente a su habilidad de prevenir acumulación excesiva de electrolitos y otras sustancias durante
el proceso de congelamiento, y la formación de cristales de hielo que rompen la estructura de la
membrana.
• Su bajo peso molecular permite la entrada rápida través de la membrana celular.
Es importante
• Asegurar un sistema de seguridad y continuidad de congelamiento en nitrógeno líquido para el
descongelamiento realizar ensayos de control de calidad por medio de pruebas de viabilidad.
Gracias